一直說比對(duì)之前要去接頭,那么我們?nèi)サ慕宇^是什么樣子的呢?我一開始以為就是在待測(cè)序的reads加上一段堿基順序已知的序列就可以了概页,后來發(fā)現(xiàn) 情況和我想象的不大一樣。怎么回事捏练慕?就拿Illumina來說惰匙,它測(cè)序常使用的接頭是Y型接頭。那么什么是Y型接頭呢铃将?它又有什么優(yōu)點(diǎn)呢项鬼?
Y型接頭,故名思意劲阎,長(zhǎng)的和字母Y一樣绘盟。在接頭的末端,堿基是不互補(bǔ)的悯仙。接頭由兩部分組成奥此,其中的arm部分是非互補(bǔ)序列,而stem部分是互補(bǔ)序列可以加到測(cè)序的reads上雁比。Y adapter的樣子就像下面的圖一樣:
adapters
當(dāng)我們將測(cè)序的reads加上接頭稚虎,就變成了這個(gè)樣子:
image.png
在這里小聲說一句,其中的綠色部分是待測(cè)序的reads
emmmm偎捎,這樣有了圖片就讓我這蒼白無力的文字形象了很多……那么蠢终,知道了它是什么樣子之后,我們下一步想知道的就是為什么要使用Y型adapter了茴她。
當(dāng)我們進(jìn)行建庫的時(shí)候寻拂,會(huì)在reads的兩端加上不同的adapter。這里我們把兩個(gè)adapters稱為A和B丈牢。當(dāng)我們加上接頭之后祭钉,會(huì)出現(xiàn)三種不同的情況:
- A--reads--B
- A--reads--A
- B--reads--B
顯然,后兩種情況是無法進(jìn)行PCR擴(kuò)增的己沛。但是常規(guī)的adapter無法避免這種情況的存在慌核,但是有了Y型adapter,就可以保證只出現(xiàn)第一種情況申尼。