血液也叫全血，醫(yī)學(xué)上稱為外周血，從外周血中提取DNA就是從有核的白細(xì)胞中提取DNA医咨。目前常見的方法是先裂解血細(xì)胞釋放DNA构舟，然后在高鹽環(huán)境下使DNA從有機(jī)溶劑中析出灰追，最后去除蛋白、色素和鹽等雜質(zhì)得到純化后的DNA狗超。要想獲得高質(zhì)量的血液DNA弹澎，可以從以下幾個(gè)方面選擇血液DNA提取試劑：
1、DNA得率
DNA得率與裂解液的性能有關(guān)努咐，裂解液通常含有去污劑苦蒿、鹽和蛋白酶。去污劑是通過使蛋白質(zhì)變性渗稍，破壞膜結(jié)構(gòu)及解開與核酸相連接的蛋白質(zhì)佩迟，從而使核酸游離在裂解體系中；鹽可以為反應(yīng)提供一個(gè)合適的裂解環(huán)境竿屹，抑制樣品中的核酸酶在裂解過程中對(duì)核酸的破壞报强，維持核酸結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定等；蛋白酶可以將蛋白質(zhì)消化成小的片段拱燃，促進(jìn)核酸與蛋白質(zhì)的分開秉溉。一款性能好的裂解液可以有效的破壞膜的結(jié)構(gòu)使DNA充分釋放，否則會(huì)使DNA得率降低碗誉。國內(nèi)常用的血液DNA提取試劑中召嘶，Qiagen、BIOG的裂解液性能都非常不錯(cuò)哮缺，一般情況下弄跌，加入血液后10分鐘就可以將血細(xì)胞徹底裂解。
此外蝴蜓，DNA得率與血液樣品的量成正比岂傲，如果要提高DNA得率，可通過增加血液的量來實(shí)現(xiàn)愁溜。一般先提取200ul的全血瑟啃，如結(jié)果不理想可考慮增加血液量。但如果增加血液量還不能得到滿意結(jié)果渡贾，應(yīng)及時(shí)考慮更換試劑。目前國內(nèi)常用的血液DNA提取試劑有Qiagen、BIOG等谊惭。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)，Qiagen試劑的血液DNA提取得率侮东，一般1mL樣本在15-20μg左右圈盔。BIOG與Qiagen公司的提取得率相近，1mL血液樣本在11-42μg悄雅，基本上都能滿足下游PCR實(shí)驗(yàn)的要求驱敲。
2、DNA純度
DNA的純度也很重要宽闲，DNA純度不足會(huì)影響后續(xù)的PCR众眨、熒光定量PCR和各種酶切試驗(yàn)等。一般通過測定OD260/OD280比值來估計(jì)核酸純度容诬。純DNA的OD260/OD280比值為1.8娩梨，如果提取的DNA溶液OD260/OD280比值小于1.6，通常說明有蛋白質(zhì)或酚览徒、多糖等的污染狈定。如果提取的DNA溶液OD260/OD280>1.9，則表明有RNA污染习蓬。
DNA純度與吸附膜對(duì)DNA的親和力和洗滌液性能有關(guān)纽什。吸附膜對(duì)DNA的親和力越強(qiáng)，洗滌液去除蛋白友雳、色素稿湿、鹽和多糖等污染的能力越強(qiáng)，DNA的純度越高押赊。目前的血液DNA提取試劑采用的吸附膜有國產(chǎn)和進(jìn)口的饺藤，國產(chǎn)的吸附DNA的能力較弱，據(jù)我們所知流礁，BIOG采用的是進(jìn)口的化學(xué)修飾離子膜涕俗，比傳統(tǒng)的核酸吸附膜更薄，但親和力更強(qiáng)神帅，可高效再姑、專一的吸附DNA。國內(nèi)熟知的BIOG品牌找御、T品牌以及國外的Qiagen等元镀，這些公司所研發(fā)洗滌液都具有較好的性能绍填，可以最大限度的去除血液中的血紅蛋白、脂類和鹽等雜質(zhì)栖疑，我們在實(shí)驗(yàn)中提取到的DNA溶液OD260/OD280比值維持在1.7-1.9之間讨永，利用提取的DNA進(jìn)行后續(xù)PCR、熒光定量PCR和各種酶切試驗(yàn)等也沒有問題遇革。
3卿闹、試劑價(jià)格
價(jià)格也是選購產(chǎn)品的重要考量因素。對(duì)于絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)如PCR萝快、qPCR锻霎、基因檢測、分子雜交等揪漩，國產(chǎn)試劑都能滿足質(zhì)量要求旋恼。與國外知名品牌相比，國產(chǎn)試劑的價(jià)格較為便宜氢拥，如BIOG蚌铜，價(jià)格還不到國外品牌價(jià)格的30%，性價(jià)比較高嫩海。因而，對(duì)于以上實(shí)驗(yàn)建議選用BIOG等國產(chǎn)試劑囚痴。
綜合看來叁怪，與國外知名品牌相比，國產(chǎn)試劑在血液DNA提取純度和提取得率上差別不大深滚，而在價(jià)格方面奕谭，國產(chǎn)試劑具有比較明顯的優(yōu)勢。如果經(jīng)費(fèi)不多或下游做PCR痴荐、qPCR血柳、分子雜交等實(shí)驗(yàn)，可考慮選擇性價(jià)比較高的BIOG等國產(chǎn)品牌生兆。
