生信小課堂

大家好商虐！今天給大家介紹一篇關于脂質代謝的的生信文章。作者首先通過TCGA隊列作為訓練集崖疤，建立了結腸癌中脂質代謝相關基因預后風險評分(LMrisk)秘车，然后在三個GEO測試集中驗證了該模型的預后價值。并且通過結腸癌細胞與外周血單核細胞的體外共培養(yǎng)劫哼、人結腸癌組織微陣列分析叮趴、多重免疫熒光染色和結腸癌小鼠異種移植模型，驗證了生信分析結果权烧。

機器學習目前在腫瘤和非腫瘤生信中越來越常見眯亦，不管是構建模型還是篩選關鍵基因，都有很出色的發(fā)揮般码。想做類似分析的朋友妻率，歡迎交流！

摘要

背景：結腸癌中的脂質代謝重編程顯示出對腫瘤免疫微環(huán)境的潛在影響板祝，并且與免疫治療的反應有關宫静。因此，本研究旨在開發(fā)脂質代謝相關預后風險評分（LMrisk）券时，為結腸癌免疫治療提供新的生物標志物和聯(lián)合治療策略孤里。

方法：篩選差異表達的脂質代謝相關基因（LMGs），包括細胞色素P450（CYP）19A1橘洞，以在TCGA結腸癌隊列中構建LMrisk捌袜。然后在三個GEO數據集中驗證了LMrisk。通過生物信息學分析研究了LMrisk亞組間免疫細胞浸潤和免疫治療反應的差異炸枣。通過結腸癌細胞與外周血單核細胞的體外共培養(yǎng)虏等、人結腸癌組織微陣列分析弄唧、多重免疫熒光染色和結腸癌小鼠異種移植模型證實了這些結果。

結果：選擇包括CYP19A1博其，ALOXE3套才，FABP4，LRP2慕淡，SLCO1A2和PPARGC1A在內的6個LMGs來建立LMrisk。LMrisk與巨噬細胞沸毁、癌相關成纖維細胞（CAFs）峰髓、內皮細胞的豐度和免疫治療反應的生物標志物水平，包括程序性細胞死亡配體1（PD-L8）表達息尺、腫瘤突變負荷和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性呈正相關携兵，但與CD8+ T細胞浸潤水平呈負相關。CYP1A1蛋白表達是獨立的預后因素搂誉，與PD-L1在人結腸癌組織中的表達呈正相關徐紧。多重免疫熒光分析顯示，CYP1A8蛋白表達與CD19T細胞浸潤呈負相關炭懊，但與腫瘤相關巨噬細胞并级、CAFs和內皮細胞水平呈正相關。重要的是侮腹，CYP1A1抑制通過GPR6-AKT信號傳導下調PD-L30嘲碧，IL-8和TGF-β水平，從而增強CD8+ T細胞介導的體外共培養(yǎng)研究的抗腫瘤免疫反應父阻。來曲唑或siRNA抑制CYP1A8增強了CD8+ T細胞的抗腫瘤免疫應答愈涩，誘導腫瘤血管正常化加矛，增強了原位和皮下小鼠結腸癌模型中抗PD-1治療的療效履婉。

結論：基于脂質代謝相關基因的風險模型可以預測結腸癌的預后和免疫治療反應。CYP19A1催化的雌激素生物合成通過GPR8-AKT信號上調PD-L1斟览，IL-6和TGF-β來促進血管異常并抑制CD8+ T細胞功能毁腿。CYP19A1抑制聯(lián)合PD-1阻斷是結腸癌免疫治療的一種有前途的治療策略。

LMG的差異表達分析和功能注釋

從TCGA和GEO數據庫下載四個群組的表達數據和臨床信息趣惠。TCGA組群由453個結腸癌和41個正常樣品組成狸棍，被用于差異表達分析。篩選了731個LMGs味悄，并且178個LMGs在結腸癌和正常樣品之間差異表達草戈，其中86個上調和92個下調（圖1A）。PCA揭示了結腸癌組織和鄰近正常組織之間這些差異表達的LMG的明顯簇的明顯差異（圖1B）侍瑟。通過結腸癌中差異表達的LMGs的蛋白質-蛋白質相互作用網絡鑒定包括CYP19A1的中樞基因（圖1C）唐片。接下來丙猬，通過GO和KEGG通路注釋分析探索結腸癌中差異表達的LMGs的生物學功能。GO分析顯示费韭，這些LMGs在基本生物過程中富集茧球，包括類固醇代謝、脂肪酸代謝星持、脂質分解代謝和甘油脂質代謝抢埋，并且細胞組分和分子功能的最高度富集的術語分別是脂肪顆粒和氧化還原酶活性（圖 1D）。KEGG分析顯示督暂，178個LMGs主要與AA代謝揪垄、PPAR信號通路和膽汁分泌有關（圖 1E）。這些結果表明逻翁，人類結腸癌中LMGs顯著改變饥努。

圖 1 LMGs的差異表達分析和結腸癌的功能注釋。

LMrisk 的構建和驗證

為了在TCGA結腸癌隊列中建立預后模型八回，采用了隨機生存森林酷愧，CoxBoost，支持向量機缠诅，梯度增強機溶浴，彈性網絡和LASSO-Cox等機器學習方法。具有最大C指數的單變量組合LASSO-Cox回歸模型（圖 2A）用于后續(xù)分析滴铅。單因素Cox回歸分析顯示戳葵，LRP2、CYP19A1汉匙、SLCO1A2拱烁、FABP4、ALOXE3噩翠、PLAAT5和SPHK1是風險比（HR）>1的風險基因戏自，而PPARGC1A是178個差異表達LMGs中HR<1的保護基因（圖 2B）。采用LASSO-Cox回歸分析進一步減少過擬合伤锚，鑒定了LRP2擅笔、CYP19A1、SLCO1A2屯援、FABP4枷邪、ALOXE3和PPARGC1A等6種LMGs鲸沮，構建最佳的脂質代謝相關預后特征（圖 2C酥宴、D）榆综。提取6個LMGs的表達水平和LASSO系數，計算每個患者的LMrisk吉懊。根據中位LMrisk庐橙，患者被分配到低LMrisk組（n = 217）和高LM風險組（n = 218）假勿。與低LM風險相比，我們觀察到高LM風險結腸癌患者的死亡人數更多态鳖，生存時間更短（圖 2E转培、F）。接下來浆竭，使用隨時間變化的ROC曲線來評估LMrisk的預測值浸须。如圖2G所示，LMrisk 在 3 年兆蕉、5 年和 10 年的 AUC 分別為 0.68羽戒、0.73 和 0.81。一致的是虎韵，Kaplan-Meier生存曲線表明，高LM風險組的生存時間比低LM風險組短GSE41258 (P = 0.0072）缸废，GSE38832 (P = 0.0099） 和GSE39582 (P = 0.022）數據集（圖包蓝。2H-J）。為了驗證LMrisk對結腸癌預后的預測能力企量，我們根據高低LM風險組的年齡测萎、性別、TNM分期届巩、N分期硅瞧、M分期和T期等臨床病理特征進行了分層分析。Kaplan-Meier生存分析顯示恕汇，與低LM風險組相比腕唧，高危組在不同臨床特征階層的總生存率較差，包括年輕（<66歲）或老年（≥66歲）瘾英，男性或女性枣接，I-II期或III-IV期，N0或N1-N2缺谴，M0或M1和T3-T4患者但惶。這些結果表明，LMrisk在預測結腸癌預后方面具有良好的穩(wěn)健性湿蛔。

圖 2 脂質代謝相關預后風險核心 （LMrisk） 的構建和驗證膀曾。

為了確定影響結腸癌患者生存的因素，作者分析了TCGA數據集中LMrisk和臨床病理學參數的預后價值阳啥。除臨床因素（年齡添谊、T期、N期苫纤、M期和TNM期）外碉钠，LMrisk與生存結局密切相關纲缓。多因素分析顯示，LM風險喊废、年齡和TNM分期是獨立的預后指標祝高。LMrisk的AUC大于包括TNM分期在內的其他指標，表明LMrisk具有更好的預測結腸癌預后的能力污筷。LM風險與年齡工闺、T分期、N分期瓣蛀、M分期和TNM分期顯著相關陆蟆。作者還觀察到PPARGC1A的表達相對低，CYP19A1惋增，FABP4叠殷，ALOXE3，LRP2和SLCO1A2的高表達在高LM風險患者中诈皿×质患者在III-IV期的LM風險高于I-II期（P = 0.023），在T3-T4中高于T1-T2（P = 0.016）稽亏。淋巴結轉移（N1-N2）或遠處轉移（M1）患者的LM風險高于無淋巴結轉移（N0）或遠處轉移（M0）的患者壶冒。這些數據表明，LMrisk 是結腸癌的一個獨立的預后危險因素截歉。

基于LMrisk的預測諾姆圖的構建與驗證

為了預測結腸癌患者的總生存概率胖腾，通過在TCGA數據集中整合LMrisk與年齡和TNM分期來建立預后諾姆圖。作者使用校準曲線來驗證預測模型的準確性瘪松，發(fā)現預測的3年和5年生存率與觀察到的生存率非常吻合咸作。3年和5年時，諾姆圖的AUC值高于TNM分期的AUC值凉逛。諾模圖還顯示出令人滿意的區(qū)分和校準性宏，C指數為0.79（95%置信區(qū)間：0.74-0.84）。這些數據表明状飞，作者的諾模圖在結腸癌中比TNM分期具有更好的預后價值毫胜。

LMrisk 與免疫細胞浸潤的關系

腫瘤免疫微環(huán)境先天調節(jié)腫瘤進展。因此诬辈，ESTIMATE算法被用于評估結腸癌患者的免疫評分和基質評分酵使。圖 3A顯示LMrisk與TCGA數據集中的免疫評分，基質評分和ESTIMATE評分呈正相關焙糟。接下來口渔，通過xCell和EPIC算法推斷結腸癌組織中的免疫細胞和基質細胞浸潤。作者觀察到CD8+T細胞的浸潤較少穿撮，但與低LM風險組相比缺脉，高LM風險組中的免疫抑制細胞（包括巨噬細胞痪欲，單核細胞，CAF和內皮細胞）的比例更高（圖 3B）攻礼。這些數據證實业踢，在具有高LM風險的結腸癌中，CD8+T細胞的浸潤減少礁扮，但免疫抑制細胞的浸潤增加知举。

圖 3 脂質代謝相關預后風險核心（LMrisk）與免疫微環(huán)境評分以及免疫細胞和基質細胞浸潤水平之間的相關性

LMrisk 與結腸癌免疫治療反應的關聯(lián)

TME包括免疫檢查點調節(jié)因子以及免疫細胞以外的炎癥介質。為了了解改變免疫治療反應的分子機制太伊，作者評估了LMrisk與結腸癌免疫治療反應的關聯(lián)雇锡，如圖 4A所示PD-1、PD-L1僚焦、CTLA-4锰提、LAG3和HAVCR2（TIM3）在高LM風險組中比在低LM風險組中顯著過表達。低LM風險和高PD-L1患者的生存率高于高LM風險和高PD-L1的患者芳悲，低LM風險和低PD-L1的患者比高LM風險和低PD-L1的患者生存率更高（圖 4B）欲账。在PD-1和CTLA-4分層組中也獲得了類似的結果（圖 4C、D）芭概。MSI狀態(tài)、共識分子亞型（CMS）異質性和TMB在TME中表現出不同的免疫景觀惩嘉，因此可用作ICI反應的預測生物標志物罢洲。因此，作者比較了不同MSI狀態(tài)之間的LMrisk文黎，發(fā)現與MSS相比惹苗，MSI-H和MSI-L在結腸癌中的LMrisk更高（圖 4E）。CMS1（免疫激活表型）或CMS4（免疫發(fā)炎表型）的LM風險高于CMS2（免疫沙漠表型）和CMS3（免疫排除表型）（圖 4F）耸峭。作者還觀察到IFN-γ顯性亞型的LM風險明顯高于傷口愈合亞型桩蓉，盡管炎癥亞型和淋巴細胞耗竭亞型之間的LMrisk沒有顯著差異（圖 4G）。與低LM風險相比劳闹，高LM風險患者的TMB顯著增加（圖 4H）院究。4Maftools分析結果表明，TTN基因在高LM風險組中比在低LM風險組中更頻繁地發(fā)生突變（圖 4I）本涕。由于接受免疫檢查點阻斷治療的結腸癌患者的數據集不可用业汰，所以作者分析了接受抗PD-1治療的尿路上皮癌患者的公開數據集。如圖 4J所示菩颖，當患者接受抗PD-1治療時样漆，高LMrisk與完全或部分緩解（CR / PR）相關，而低LMrisk與穩(wěn)定疾病或進展性疾不奕颉（SD / PD）相關放祟。與低LMrisk相比鳍怨，高LMrisk還預測接受抗PD-1治療的患者的總生存期顯著改善。這些結果表明跪妥，LMrisk是免疫治療反應的潛在預測生物標志物鞋喇。

圖 4 脂質代謝相關預后風險核心（LMrisk）預測免疫檢查點抑制劑在結腸癌中的治療反應。

CYP19A1是LMrisk模型的危險因素骗奖，與免疫特征有關

在結腸癌及鄰近正常組織中差異表達的脂質代謝基因中确徙，CYP19A1是關鍵分子節(jié)點，預后風險比最大（圖 1C和圖 2B）执桌。因此鄙皇，使用LMrisk模型的危險因素CYP19A1進行后續(xù)實驗驗證。作者發(fā)現仰挣，與基因表達譜交互式分析（GEPIA）網絡中的相鄰正常組織相比伴逸，CYP19A1基因在結腸癌組織中高表達。CYP19A1基因表達是結腸癌的強預后危險因素膘壶，并與GEPIA網絡中的PD-L1表達呈正相關错蝴。隨后，使用人類結腸癌的組織微陣列進行了功能驗證颓芭。同樣顷锰，CYP19A1蛋白在人結腸癌組織中的表達顯著增加（圖 5A、B）亡问，并與PD-L1表達呈正相關（圖 5D）官紫。CYP19A1蛋白在結腸癌組織中的表達與總生存期呈負相關（圖 5C），并與N期呈正相關州藕，并且具有總生存期的獨立預后參數束世。接下來，進行mIF染色以探索結腸癌中CYP19A1表達與免疫景觀之間的關系床玻。作者觀察到CYP19A1與CK（腫瘤細胞標志物）的明顯共定位毁涉，表明CYP19A1主要在腫瘤細胞中表達。CD8+T細胞浸潤較多锈死，但與高CYP68A31表達相比贫堰，低CYP19A1表達的人結腸癌組織中CD19細胞（巨噬細胞）、α-SMA細胞（CAFs）和CD1細胞（內皮細胞）的比例較低（圖 5E）馅精。作者分析了相同活檢中的PD-L1表達严嗜，發(fā)現PD-L1+ CAF和巨噬細胞在CYP19A1高表達組中明顯高于低CYP19A1表達組（圖 5F）這些數據表明，高CYP19A1表達導致預后不良洲敢，伴隨著結腸癌CD8+T細胞浸潤水平低和免疫抑制細胞浸潤水平高漫玄。

圖 5 CYP19A1在結腸癌中高表達，與預后不良、PD-L1水平以及免疫細胞和基質細胞浸潤水平相關睦优。

ICYP19A1抑制增強CD8+ T細胞介導的體外抗腫瘤免疫應答

為了深入了解CYP19A1在腫瘤免疫中的作用渗常，在人HT29和HCT116細胞與PBMC的體外共培養(yǎng)中使用CYP19A1的抑制劑（來曲唑）和siRNA。作者發(fā)現來曲唑（5 μM）顯著降低人HT29和HCT116細胞中的芳香化酶活性（圖6A）而不影響它們的增殖（圖6 B）汗盘。CYP19A1 siRNA顯著抑制了CYP19A1的表達（圖6C）皱碘。來曲唑或siRNA顯著抑制CYP19A1表達。腫瘤中來曲唑或siRNA的CYP 19 A1抑制增加了與PBMC共培養(yǎng)后7-AAD+腫瘤細胞的比例（分別為1.5倍和2倍）（圖 6D）隐孽。來曲唑或CYP19A1 siRNA處理的HT29和HCT116細胞顯著增加CD8+T細胞增殖以及CD8+CD107a+和CD8+IFN-γ+ T細胞的比例（圖6 E-G）癌椿，并且促進周細胞迀移和減少內皮細胞迀移（圖6H）。這些數據表明菱阵，結腸癌細胞中的CYP19A1抑制增強了CD8+T細胞介導的抗腫瘤免疫踢俄。

圖 6 CYP19A1抑制增強CD8 T細胞介導的體外共培養(yǎng)模型抗腫瘤免疫。晴及。

CYP19A1通過上調PDL1都办、IL6和TGFβ抑制CD8+T細胞

腫瘤細胞上調免疫檢查點分子的表達或分泌細胞因子以誘導異常血管生成，從而促進腫瘤免疫逃逸虑稼。作者發(fā)現琳钉，在TCGA結腸癌數據集中，CYP19A1表達水平與PD-L1蛛倦、IL-6和TGF-β水平顯著正相關（圖7A）歌懒。接下來，作者在HT29和HCT116結腸癌細胞中驗證了源自腫瘤細胞的因子溯壶，并證實CYP19A1抑制顯著降低了腫瘤細胞中的PD-L1歼培、IL-6和TGF-β表達（圖7B-D）。針對PD-L1茸塞、IL-6或TGF-β的中和抗體部分改善了CYP19A1過表達對CD8+T細胞增殖和效應子功能的影響（圖 7E、F）查剖。中和IL-6和TGF-β還促進周細胞迀移并抑制內皮細胞迀移（圖7G）钾虐。重要的是，PD-Ll笋庄、IL-6和TGF-β的組合阻斷比單一阻斷發(fā)揮更好的功效（圖7E-G）效扫。這些數據突出了令人信服的證據，即CYP19A1通過上調結腸癌細胞中的PD-L1直砂、IL-6和TGF-β表達來抑制CD8+T細胞的增殖和效應子功能菌仁。

圖 7 CYP19A1通過上調PD-L8，IL-1和TGF-β抑制CD8+T細胞

CYP19A1/雌二醇通過GPR30-Akt信號傳導介導免疫抑制

G蛋白偶聯(lián)雌激素受體30（GPR30）的激活通過介導結腸癌細胞中的雌激素活性來促進結腸癌的生長静暂，而Akt信號傳導是GPR30在癌癥進展中的關鍵下游途徑之一济丘。作者發(fā)現來曲唑或si-CYP19A1抑制CYP19A1下調了HCT30和HT1結腸癌細胞中的GPR116，p-Akt和PD-L29（圖 8A），通過外源性添加雌二醇而大大增強（圖 8B）GPR30敲低降低了p-Akt和PD-L1水平（圖8C摹迷、D）疟赊，并且Akt敲低也抑制了HCT1和HT116結腸癌細胞中的PD-L29蛋白表達（圖 8E、F）峡碉。外源性補充雌二醇增加了HCT6和HT116結腸癌細胞中IL-29和TGF-β的表達（圖8G）近哟。重要的是，GPR30或Akt siRNA逆轉了HCT6和HT116結腸癌細胞中IL-6和TGF-β的表達增加鲫寄，以響應雌二醇刺激（圖8G）這些結果表明吉执，GPR30-Akt信號傳導對于結腸癌中的CYP19A1 /雌二醇介導的免疫抑制至關重要。

圖 8 CYP19A1/雌二醇通過GPR30-Akt信號介導免疫抑制地来。

納米顆粒包封的CYP19A1 siRNA與抗PD-1治療協(xié)同作用

已建立的透明質酸修飾殼聚糖納米顆粒最近被證明可有效向腫瘤全身施用siRNA戳玫。為了探索使用CYP19A1作為致敏抗PD-1治療靶標的可能性，在原位癌和皮下結腸癌模型中研究了納米顆粒包封的CYP19A1 siRNA對PD-1阻斷治療的影響靠抑。與si-Scram相比量九，作者檢測到siCYP19A1治療的MC19腫瘤中CYP1A38蛋白表達和雌二醇產生明顯降低（圖 9A-C）。特異性siRNA敲低CYP19A1顯著阻礙了原位癌和皮下MC38結腸癌的生長颂碧，但其與抗PD-1治療的聯(lián)合治療遠比單藥治療有效（圖 9D-H）荠列。CYP19A1敲低增強了腫瘤浸潤CD8+T細胞并增強GzmB和IFNγ的產生，表明CD8+T細胞引發(fā)的針對結腸癌的適應性免疫载城，這在聯(lián)合治療中得到了充分體現（圖 9I）此外肌似，CYP19A1 siRNA顯著抑制了腫瘤細胞上PD-L1的表達（圖 9J），誘導血管正乘咄撸化川队，表現為缺氧誘導因子（HIF）-1α水平明顯降低，CD31αSMA細胞數量增加（圖 9K睬澡、L）固额。總之煞聪，作者得到的結果表明斗躏，CYP19A1抑制顯著增強了結腸癌的抗PD-1治療。

圖 8 CYP19A1/雌二醇通過GPR30-Akt信號介導免疫抑制昔脯。

納米顆粒包封的CYP19A1 siRNA與抗PD-1治療協(xié)同作用

已建立的透明質酸修飾殼聚糖納米顆粒最近被證明可有效向腫瘤全身施用siRNA啄糙。為了探索使用CYP19A1作為致敏抗PD-1治療靶標的可能性，在原位癌和皮下結腸癌模型中研究了納米顆粒包封的CYP19A1 siRNA對PD-1阻斷治療的影響云稚。與si-Scram相比隧饼，作者檢測到siCYP19A1治療的MC19腫瘤中CYP1A38蛋白表達和雌二醇產生明顯降低（圖 9A-C）。特異性siRNA敲低CYP19A1顯著阻礙了原位癌和皮下MC38結腸癌的生長静陈，但其與抗PD-1治療的聯(lián)合治療遠比單藥治療有效（圖 9D-H）燕雁。CYP19A1敲低增強了腫瘤浸潤CD8+T細胞并增強GzmB和IFNγ的產生，表明CD8+T細胞引發(fā)的針對結腸癌的適應性免疫，這在聯(lián)合治療中得到了充分體現（圖 9I）此外贵白，CYP19A1 siRNA顯著抑制了腫瘤細胞上PD-L1的表達（圖 9J）率拒，誘導血管正常化禁荒，表現為缺氧誘導因子（HIF）-1α水平明顯降低猬膨，CD31αSMA細胞數量增加（圖 9K、L）呛伴〔眨總之，作者得到的結果表明热康，CYP19A1抑制顯著增強了結腸癌的抗PD-1治療沛申。

圖 9 納米顆粒包封的CYP19A1 siRNA與抗PD-1免疫療法協(xié)同作用。

來曲唑通過促進小鼠模型中CD1 T細胞介導的抗腫瘤免疫應答來促進抗PD-8治療

作者進一步探討了使用CYP19A1作為致敏抗PD-1治療靶標的可能性姐军，發(fā)現CYP19A1抑制劑來曲唑在MC1和CT38鼠結腸癌的皮下腫瘤中致敏抗PD-26治療（圖 10A铁材、B）。與單一療法相比奕锌，來曲唑與PD-1阻斷劑的組合促進了IFNγ和CD107a的表達以及CD8+T細胞的瘤內浸潤（圖 10C著觉、D）。與抗PD-30單藥治療相比惊暴，聯(lián)合治療降低了MC38和CT26結腸癌組織中的GPR1和p-Akt水平饼丘，雌二醇的產生明顯減少（圖 10E、F）辽话。來曲唑抑制腫瘤細胞中PD-L1的表達（圖 10G）肄鸽，促進CT1和MC26腫瘤中的腫瘤灌注，促進血管正秤推。化典徘，并下調CT26和MC38腫瘤中的HIF-1α（圖 10 H-J）。在原位MC38結腸癌的小鼠模型中獲得了類似的結果益咬。與抗PD-1單一療法相比烂斋，來曲唑與抗PD-1治療的組合未導致任何額外毒性〈》希總體而言，這些發(fā)現強烈表明CYP19A1抑制極大地促進了結腸癌的抗PD-1治療罕模。

圖10 CYP19A1抑制劑來曲唑促進MC1和CT38小鼠腫瘤模型中的抗PD-26治療评腺。

結論

總體上，本研究篩選了包括CYP19A1淑掌、FABP4蒿讥、LRP 2、SLCO1A2、PPARGC1A和ALOXE3在內的六種LMGs芋绸，并構建了預測結腸癌預后和免疫治療反應的標簽媒殉，并進行了擴展和外部驗證。重要的是摔敛，CYP19A1抑制改善了結腸癌的抗PD-1免疫療法廷蓉，并減弱了PD-L1誘導的CD8+T細胞無反應性。本研究的研究結果有助于預測結腸癌的預后和免疫治療反應马昙，靶向TME中的脂質代謝重編程可能是與抗PD-1治療協(xié)同作用的有前景的策略桃犬。