【準(zhǔn)備】
試劑盒提前復(fù)溫rt
樣品（細(xì)胞上清為例）：1000g颤陶，20min
【一】樣品準(zhǔn)備&配標(biāo)準(zhǔn)品
樣品離心時(shí)即可進(jìn)行，先準(zhǔn)備7個(gè)EP管（做好順序標(biāo)記佩微，7號(hào)管為空白）
標(biāo)準(zhǔn)品粉末 1000g 1min（使所有粉末沉底）
標(biāo)準(zhǔn)品溶解液 1mL 溶解旅敷，靜置 10min 绞佩，輕輕搖晃
7個(gè)EP管各加 500 μL 標(biāo)準(zhǔn)品溶解液
從標(biāo)準(zhǔn)品吸取500 μL至 1號(hào)EP管癣亚，震蕩均勻丑掺，再從1號(hào)吸 500 μL 到 2號(hào)管，以此類推
7號(hào)管為空白述雾，不加
【二】
（1）加樣100 μL/孔（梯度標(biāo)準(zhǔn)品 和 樣品）
（2）蓋封口膜街州，37℃ 80min
【三】
上一步結(jié)束前15min 配Washing Buffer 和 生物素結(jié)合抗體Bio-Ab
（1）甩掉孔內(nèi)液體
（2）每孔 200 μL Washing Buffer，靜置1~2min玻孟，甩掉唆缴，拍干∈螋幔【共3次】
（3）100 μL/孔 Bio-Ab
（4）蓋封口膜面徽，37℃ 50min
【四】
上一步結(jié)束前15min 配 鏈親霉素結(jié)合HRP（Avi-HRP）
（1）甩干，洗3次
（2）100 μL/孔 Avi-HRP
（3）蓋封口膜玩敏，37℃ 50min
【五】底物顯色
（1）甩干斗忌，洗5次
（2）90 μL TMB底物/孔质礼，避光37℃ 20min
（3）50 μL 終止液/孔旺聚，輕輕拍打板子邊緣幾下以混合
【六】上機(jī)
注意擦拭干凈板底，不要有水漬和指紋
液面不要有氣泡
450nm波長(zhǎng)眶蕉，no lid
