01? 內(nèi)容

腫瘤微環(huán)境是指腫瘤的發(fā)生、生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移與腫瘤細(xì)胞所處的內(nèi)外環(huán)境有著密切關(guān)系悲靴，它不僅包括腫瘤所在組織的結(jié)構(gòu)、功能和代謝耸三，而且亦與腫瘤細(xì)胞自身的(核和胞質(zhì))內(nèi)在環(huán)境有關(guān)浇揩。腫瘤與環(huán)境，兩者既是相互依存积锅，相互促進(jìn)乏沸，又是相互拮抗爪瓜，相互斗爭(zhēng)的铆铆。它是現(xiàn)代腫瘤生物學(xué)的一個(gè)關(guān)鍵和核心的問(wèn)題丹喻。近年來(lái)由于腫瘤細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)的進(jìn)展，人們對(duì)于腫瘤和環(huán)境的相互關(guān)系有了更加深入的了解谅猾。這不僅對(duì)于認(rèn)識(shí)腫瘤的發(fā)生鳍悠、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等有著重要的意義敬矩，而且對(duì)于腫瘤的診斷弧岳、防治和預(yù)后亦有著重要的作用。今天為大家?guī)?lái)一篇2020年發(fā)表于JEM（The Journal of Experimental Medicine）的文章：Accumulation of long-chain fatty acids in the tumor microenvironment drives dysfunction in intrapancreatic CD8+ T cells禽炬，探討代謝物對(duì)于研究腫瘤微環(huán)境的意義。

02? 文章速讀

CD8+ T細(xì)胞是抗腫瘤免疫的主效應(yīng)因子柳恐，它們?cè)谀[瘤部位的存在與良好的結(jié)果相關(guān)桐臊。然而，腫瘤微環(huán)境(TME)所施加的代謝約束會(huì)抑制它們控制腫瘤進(jìn)展的能力伤提。文章描述了在胰腺導(dǎo)管腺癌(PDA)的TME區(qū)脂質(zhì)聚集肿男，CD8+ T細(xì)胞浸潤(rùn)小鼠和人類(lèi)腫瘤却嗡。在這種富含脂質(zhì)但缺乏營(yíng)養(yǎng)的TME中，利用脂質(zhì)代謝對(duì)維持細(xì)胞功能尤為重要如庭。

本研究發(fā)現(xiàn)撼港，胰腺內(nèi)CD8+ T細(xì)胞逐漸積累特定的長(zhǎng)鏈脂肪酸(LCFAs)，而不是提供燃料來(lái)源往毡，這損害了它們的線粒體功能靶溜，并觸發(fā)脂質(zhì)代謝途徑的主要轉(zhuǎn)錄重編程罩息，從而導(dǎo)致脂肪酸分解代謝的減少。特別是断楷，胰腺內(nèi)CD8+ T細(xì)胞特異性地表現(xiàn)出極長(zhǎng)鏈酰輔酶A脫氫酶(VLCAD)的下調(diào)崭别，這加劇了介導(dǎo)脂肪毒性的極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFAs)和極長(zhǎng)鏈脂肪酸(VLCFAs)的積累恐锣。通過(guò)ACADVL的強(qiáng)制表達(dá)土榴，腫瘤特異性T細(xì)胞的代謝重編程能夠增強(qiáng)腫瘤內(nèi)T細(xì)胞的存活和持久性响牛，克服了PDA免疫治療的一個(gè)主要障礙。

03? 文章背景

1.胰管腺癌（PDA）患者的總體生存率似乎與CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)有關(guān)矢赁，但我們對(duì)調(diào)節(jié)這些浸潤(rùn)T細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境(TME)背景下功能的機(jī)制的認(rèn)識(shí)仍然有限撩银。

2.CD8+T細(xì)胞是抗腫瘤免疫的關(guān)鍵效應(yīng)因子豺憔。然而，腫瘤浸潤(rùn)的CD8+T細(xì)胞往往獲得被稱(chēng)為“衰竭”的分化狀態(tài)的改變抄邀，因此無(wú)法控制腫瘤的生長(zhǎng)昼榛。在PDA患者和PDA的小鼠模型中的幾項(xiàng)研究表明，CD8T細(xì)胞往往很少准夷，如果存在莺掠，則會(huì)變得功能失調(diào)彻秆。

3.最近的發(fā)現(xiàn)表明CD8+T細(xì)胞的激活和分化與代謝重編程密切相關(guān)结闸。恢復(fù)CD8+T細(xì)胞依賴(lài)氧化磷酸化(OXPHOS)來(lái)促進(jìn)其代謝需求扎附。

4.腫瘤細(xì)胞具有高度的糖酵解留夜，并通過(guò)消耗大量關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，特別是葡萄糖來(lái)支持其過(guò)度生長(zhǎng)碍粥，這也是最佳T細(xì)胞激活所必需的。當(dāng)缺乏葡萄糖時(shí)钦讳，CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生效應(yīng)細(xì)胞因子的能力受到損害枕面。然而，它們?nèi)匀豢梢酝ㄟ^(guò)線粒體OXPHOS維持其增殖和效應(yīng)功能琼开，使用長(zhǎng)鏈脂肪酸(LCFAs)通過(guò)脂肪酸(FA)β氧化過(guò)程來(lái)促進(jìn)三羧酸循環(huán)稠通。

5.目前尚不清楚腫瘤微環(huán)境（TME）的營(yíng)養(yǎng)成分變化如何與觀察到的腫瘤浸潤(rùn)C(jī)D8+T細(xì)胞功能障礙相關(guān)买猖。

6.現(xiàn)有數(shù)據(jù)表明，腫瘤特異性CD8+T細(xì)胞的代謝重編程可能是促進(jìn)代謝敵對(duì)TME存活的策略飞主，作為提高免疫治療臨床療效的方法的一部分高诺。

04? 方法技術(shù)

1.免疫組化

2.免疫熒光

3.T細(xì)胞分離

4.透射電鏡

5.油紅O脂質(zhì)染色

6.葡萄糖濃度測(cè)定

7.細(xì)胞外通量分析

8.流式細(xì)胞分選

9.小鼠靜脈給藥

10.T細(xì)胞脂質(zhì)組學(xué)分析液相色譜

11.細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組分析

12.質(zhì)譜成像

13.小鼠T細(xì)胞TCR轉(zhuǎn)導(dǎo)

14.過(guò)繼性免疫療法

15.超聲成像

16.單細(xì)胞測(cè)序

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.胰腺TME在PDA進(jìn)展過(guò)程中積累脂質(zhì)

（1）脂質(zhì)在PDA TME中積累，而葡萄糖和H6Ps在PDA進(jìn)展過(guò)程中減少

在9 - 30周的不同時(shí)間點(diǎn)處死小鼠筏餐，根據(jù)細(xì)胞學(xué)和結(jié)構(gòu)異常魁瞪，將腫瘤發(fā)展分為早期胰腺上皮內(nèi)瘤變和高級(jí)別瘤前病變惠呼。中性脂質(zhì)從早期到晚期的發(fā)展過(guò)程中在胰腺組織中積累。通過(guò)k-means聚類(lèi)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分割旅薄，并將IMS與共聚焦圖像進(jìn)行共配泣崩，得到一個(gè)平均譜洛口，并與連續(xù)切片上的CD8+ T細(xì)胞分布呈正相關(guān)绍弟。

（2）中性脂質(zhì)和LC甘油磷脂在PDA進(jìn)展過(guò)程中積累在TME中

在CD8T細(xì)胞填充的區(qū)域（其中一個(gè)以橙色突出顯示）的進(jìn)展過(guò)程中發(fā)現(xiàn)一個(gè)具有代表性的脂質(zhì)物種PE（42：6）(一種多不飽和磷脂酰乙醇胺著洼，總碳FA鏈長(zhǎng)度為42個(gè)碳)富集。研究表明豹悬，在浸潤(rùn)C(jī)D8+T細(xì)胞的地區(qū)液荸，含有非常長(zhǎng)鏈FAs(VLCFAs)的特定甘油磷脂在胰腺上皮內(nèi)瘤變中富集。結(jié)果主要檢測(cè)到PEs和磷脂酰肌醇的增加伤柄，特定物種的富集在早期病變中已經(jīng)明顯适刀。磷脂酰絲氨酸和磷脂酰膽堿的差異不太明顯煤蹭。與對(duì)照相比，非常長(zhǎng)鏈(VLC)鞘磷脂在晚期疾病時(shí)間點(diǎn)相對(duì)減少常挚。

2.CD8+T細(xì)胞在PDA進(jìn)展過(guò)程中功能受損

用免疫組織化學(xué)方法對(duì)T細(xì)胞在原位的浸潤(rùn)進(jìn)行了縱向分析稽物，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)CD4+和CD8+T細(xì)胞在疾病早期滲透到胰腺，并持續(xù)到后期吼过。浸潤(rùn)胰腺組織的免疫細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析表明傀缩，總CD3+T細(xì)胞的百分比在炎癥早期達(dá)到峰值赡艰，并在高級(jí)別病變中保持相似的頻率斤葱。根據(jù)先前的研究揖闸，在CD3T細(xì)胞中汤纸，F(xiàn)oxp3調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量和CD4T細(xì)胞總數(shù)的百分比增加芹血。相反，兩個(gè)絕對(duì)數(shù)和頻率隨著時(shí)間的推移啃擦，CD8+T細(xì)胞明顯下降饿悬，而它們逐漸獲得功能衰竭的特征，這是由耗竭標(biāo)記的上調(diào)所表明的珠叔，包括PD1和TIM3和降低產(chǎn)生效應(yīng)細(xì)胞因子和分子的能力祷安，如IFNγ和顆粒酶β函卒。因此，PDA能夠招募初始CD8+T細(xì)胞免疫反應(yīng)虱咧，但CD8+T細(xì)胞在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中功能受損锚国。

3.胰腺內(nèi)CD8+T細(xì)胞積累VLCFAs，CD8+T細(xì)胞功能障礙與特定LCFAs的積累有關(guān)

（1）胰腺內(nèi)CD8+T細(xì)胞積累VLCFAs

早期和晚期胰腺上皮內(nèi)瘤變浸潤(rùn)C(jī)D8+T細(xì)胞明顯高于對(duì)照脾绘沉。對(duì)CD8+T細(xì)胞脂質(zhì)表達(dá)譜表明豺总，在早期時(shí)間點(diǎn)，浸潤(rùn)的CD8+T細(xì)胞的脂質(zhì)組成已經(jīng)與幼稚細(xì)胞顯著不同另玖。比較CD8+和CD4+T細(xì)胞浸潤(rùn)晚期胰腺上皮內(nèi)瘤變的脂質(zhì)組成譜，觀察到除甘油磷脂外慷丽，所有超級(jí)水平的脂質(zhì)的總體增加鳄哭，它們是細(xì)胞膜的主要結(jié)構(gòu)成分。在晚期時(shí)間點(diǎn)發(fā)現(xiàn)不同的FAs富集锄俄。在從晚期胰腺上皮內(nèi)瘤變分離的CD8+T細(xì)胞中積累的FAs列表中發(fā)現(xiàn)棕櫚酰胺飘痛，在BSA-棕櫚酸存在下培養(yǎng)CD8+T細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)棕櫚減少增殖和分泌效應(yīng)分子的能力车柠，如IFNγ塑猖、顆粒酶β和TNF-α。

（2）VLCFA在胰腺內(nèi)CD8T細(xì)胞積累

熒光葡萄糖類(lèi)似物2-[N-(7-硝基苯-2-oxa-1塑陵，3-二唑-4-yl)氨基]-2-脫氧-D-葡萄糖(2-NBDG)的攝取在CD8+T細(xì)胞亞群中具有可比性蜡励。從早期和晚期，胰腺上皮內(nèi)瘤在其膜上表達(dá)CD36兼都，與通過(guò)浸潤(rùn)C(jī)D8T細(xì)胞增加LC脂質(zhì)攝取一致的稽寒。觀察到在CD4+T細(xì)胞和總CD45+CD3-髓系細(xì)胞中，Bodipy-C16的攝取也高于脾細(xì)胞慎王，提示了一種免疫細(xì)胞浸潤(rùn)胰腺TME的一般機(jī)制宏侍，通過(guò)試圖從葡萄糖轉(zhuǎn)化為脂質(zhì)代謝來(lái)適應(yīng)其獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)成分。脾幼稚T細(xì)胞和浸潤(rùn)C(jī)D8+T細(xì)胞的早期和晚期胰腺上皮內(nèi)瘤變具有不同的代謝譜咱旱。與早期相比，浸潤(rùn)晚期胰腺上皮內(nèi)瘤變的CD8+T細(xì)胞表現(xiàn)出更明顯的組成變化莽龟。特別是毯盈，在疾病進(jìn)展的時(shí)間過(guò)程中病袄，對(duì)統(tǒng)計(jì)上不同的脂質(zhì)代謝化合物的注釋證實(shí)了浸潤(rùn)的CD8+T細(xì)胞中脂質(zhì)的總體增加益缠，這在晚期胰腺上皮內(nèi)瘤變中更明顯地表現(xiàn)在FAs的超類(lèi)水平上。共享相同TME的浸潤(rùn)C(jī)D4+T細(xì)胞在早期和晚期胰腺上皮內(nèi)瘤變中表現(xiàn)出最小的差異宋欺，與CD8+T細(xì)胞不同胰伍，CD4+T細(xì)胞在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中沒(méi)有經(jīng)歷主要的脂質(zhì)積累。檢測(cè)CD8+T細(xì)胞在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中在體內(nèi)形成LDs的能力祷杈，結(jié)果發(fā)現(xiàn)即使>20%浸潤(rùn)早期病變的CD8+T細(xì)胞中含有LD渗饮，但在晚期時(shí)間點(diǎn)，這一顯著降低私蕾。

4.胰內(nèi)CD8+T細(xì)胞在富含脂質(zhì)的PDA TME中代謝耗盡

通過(guò)觀察棕櫚酸對(duì)其線粒體功能的影響云茸，發(fā)現(xiàn)棕櫚酸處理的CD8+T細(xì)胞顯示線粒體功能下降。相反懊纳，亞油酸治療不會(huì)引起任何線粒體功能障礙亡容。浸潤(rùn)晚期胰腺上皮內(nèi)瘤變的CD8+T細(xì)胞表現(xiàn)出較高的線粒體頻率，有不規(guī)則的嵴和擴(kuò)張的腕間間隙（腫脹）茂缚，以及具有明顯電子致密基質(zhì)的高凝結(jié)線粒體，通常存在于凋亡前細(xì)胞中脚囊，且線粒體質(zhì)量下降。在積累BodipyFLC16的CD8+T細(xì)胞中讲岁，線粒體染色僅在棕櫚處理后顯著降低衬以，CD8+T細(xì)胞積累中性脂質(zhì)(脂質(zhì)TOX)即使在棕櫚處理時(shí)也沒(méi)有表現(xiàn)出類(lèi)似的線粒體缺陷。FACS分析顯示阶淘，與CD4室相比互妓，CD8室的Bodipy FL C16陽(yáng)性細(xì)胞和MitoTracker陰性細(xì)胞的頻率明顯升高。結(jié)果表明霉猛，雖然大多數(shù)CD4+T細(xì)胞能耐受LC脂質(zhì)的攝取珠闰，但吸收LC脂質(zhì)的CD8+T細(xì)胞中有很大一部分具有受損的線粒體。在比較CD8+T細(xì)胞與髓系細(xì)胞室(CD45+CD3?時(shí))坛悉，也得到了類(lèi)似的結(jié)果,提示脂質(zhì)積累和線粒體功能障礙可在浸潤(rùn)的CD8T細(xì)胞中特異性地交織在一起承绸。與幼稚T細(xì)胞相比，CD3/CD28結(jié)扎激活后OCR顯著增加轩猩，但優(yōu)先使用有氧糖酵解荡澎。相反，OXPHOS對(duì)早期浸潤(rùn)C(jī)D8和CD4T細(xì)胞至關(guān)重要彤委，可能是一種滿(mǎn)足在腫瘤內(nèi)發(fā)揮其功能所必需的高代謝需求的手段焦影。然而车遂，CD8+T細(xì)胞逐漸失去了參與OXPHOS的能力舶担，在晚期時(shí)間點(diǎn)與早期胰腺上皮內(nèi)瘤變細(xì)胞相比彬呻。相反，浸潤(rùn)的CD4+T細(xì)胞在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中增加了OCR率湖苞。

5.浸潤(rùn)晚期腺上皮內(nèi)瘤變的CD8+T細(xì)胞顯示ACADVL下調(diào)

（1）胰腺內(nèi)CD8+T細(xì)胞從早期和晚期病變是轉(zhuǎn)錄不同的

RNA測(cè)序突出了與早期和晚期腺上皮內(nèi)瘤變相關(guān)的不同特征详囤。差異調(diào)節(jié)基因在不同的T細(xì)胞群體中表現(xiàn)出改變的代謝特征，包括與FA穩(wěn)態(tài)相關(guān)的基因亞群隆箩。與靜息的幼稚T細(xì)胞相比羔杨，活化的CD8+T細(xì)胞對(duì)檢測(cè)基因的很大一部分(n=58)有差異調(diào)節(jié)作用。然而理澎，Palm存在下的激活大大改變了它們的轉(zhuǎn)錄譜曙寡，特別是參與FA代謝的基因。ACADVL在LCFA處理的細(xì)胞中與對(duì)照相比明顯下調(diào)执隧，證實(shí)其表達(dá)與LCFA積累密切相關(guān)镀琉。

（2）浸潤(rùn)晚期腺上皮內(nèi)瘤變的CD8+T細(xì)胞ACADVL缺乏

從晚期腺上皮內(nèi)瘤變中分離到的浸潤(rùn)的CD8+T細(xì)胞與從早期腺上皮內(nèi)瘤變中分離出來(lái)的CD8+T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄不同蕊唐，晚期病變分離的細(xì)胞表現(xiàn)為參與細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性和線粒體功能(Ndufa3、Ndufa9凡壤、Ndufa11和Vdac3)的關(guān)鍵基因下調(diào)。分析證實(shí)亚侠，CD8+T細(xì)胞在浸潤(rùn)晚期腺上皮內(nèi)瘤變時(shí)，VLC酰輔酶A脫氫酶(VLCAD)水平低于早期箕别。相反滞谢，在相同的富含脂質(zhì)的TME中，CD4+T細(xì)胞上調(diào)了VLCAD的水平母截，與它們接觸OXPHOS和適應(yīng)不斷變化的TME的能力相一致橄教。

6.腫瘤特異性T細(xì)胞工程表達(dá)更高水平的ACADVL表現(xiàn)出增強(qiáng)的代謝適應(yīng)能力

（1）用于表達(dá)ACADVL的腫瘤特異性T細(xì)胞具有更好的代謝適應(yīng)能力

用一個(gè)含有TCR1045單獨(dú)或TCR1045和ACADVL的結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)導(dǎo)CD8+T細(xì)胞，該結(jié)構(gòu)由P2A元件連接华烟。與TCR1045單獨(dú)相比持灰，ACADVL在Msln特異性T細(xì)胞中的過(guò)表達(dá)導(dǎo)致ACADVL-TCR1045轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞酶活性升高，過(guò)表達(dá)ACADVL的T細(xì)胞線粒體功能較高比吭。ACADVL-TCR1045細(xì)胞基底OCR和備用呼吸能力升高姨涡。監(jiān)測(cè)KPC小鼠，直到發(fā)育一個(gè)定義的胰腺腫瘤腫塊赏表，然后再進(jìn)行相同數(shù)量的TCR1045和ACADVL-TCR1045T細(xì)胞匈仗，表達(dá)不同的同源標(biāo)記，以方便跟蹤每一個(gè)群體的工程T細(xì)胞隨時(shí)間在同一個(gè)治療宿主在同一個(gè)TME间狂。結(jié)果發(fā)現(xiàn)火架，在輸注后10d忙菠，ACADVL-TCR1045T細(xì)胞在腫瘤中的數(shù)量明顯高于TCR1045T細(xì)胞牛欢，表現(xiàn)出較好的T細(xì)胞代謝適應(yīng)度和生存優(yōu)勢(shì)。在輸注后21d傍睹，ACADVL-TCR1045T細(xì)胞的這種優(yōu)先存活更加明顯犹菱，表明表達(dá)ACADVL的T細(xì)胞在代謝敵對(duì)的TME中提高了存活和持久性。

（2）ACADVL過(guò)表達(dá)增強(qiáng)了代謝適應(yīng)能力

轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞表達(dá)工程TCR(Vβ9)和結(jié)合的H2-Db四聚體访得，即MHCI等位基因虑椎，含有Msln406-414捆姜。體外刺激和轉(zhuǎn)導(dǎo)7d后迎膜，兩種細(xì)胞類(lèi)型均表達(dá)類(lèi)似的激活標(biāo)記CD69和4-1BB，并產(chǎn)生類(lèi)似數(shù)量的抗腫瘤細(xì)胞因子IFNγ和TNFα珊豹，以響應(yīng)刺激同源MSln406-414肽榕订。在輸注后21d，ACADVL-TCR1045T細(xì)胞的這種優(yōu)先存活更加明顯贩幻，表明表達(dá)ACADVL的T細(xì)胞在代謝敵對(duì)的TME中提高了存活和持久性两嘴。相對(duì)于TCR1045T細(xì)胞，在脾臟和血液中也發(fā)現(xiàn)了更多的ACADVL-TCR1045T細(xì)胞趣些。注射后10d贰您，ACADVL-TCR1045T細(xì)胞僅表達(dá)低水平的PD-1拢操、Tim-3庐冯、Lag-3和TIGIT坎穿，與報(bào)道的TCR1045T細(xì)胞相似。在轉(zhuǎn)移后10d從腫瘤中分離出的兩個(gè)T細(xì)胞群體與脾對(duì)應(yīng)物相比栖茉，減少產(chǎn)生IFNγ和TNFα孵延，但相互之間的細(xì)胞因子數(shù)量相似。

7.人胰腺內(nèi)CD8+T細(xì)胞下調(diào)人脂質(zhì)豐富的TME中ACADVL

（1）人CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)PDA的脂質(zhì)積累和ACADVL功能障礙

評(píng)估七對(duì)匹配的人類(lèi)PDA和鄰近的正常組織惶凝，紅油O染色證實(shí)了人PDA腫瘤積累中性脂質(zhì)的趨勢(shì)犬钢。與小鼠樣本一樣，人樣本中VLC鞘磷脂相對(duì)減少混滔。轉(zhuǎn)錄類(lèi)似于先前描述的耗盡的T細(xì)胞歹颓，CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)PDA顯示ACADVL表達(dá)減少。

（2）人CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)PDA的脂質(zhì)積累和ACADVL功能障礙

與小鼠模型相似领跛，我們發(fā)現(xiàn)LC甘油磷脂積累在七個(gè)人類(lèi)PDA樣本中的五個(gè)撤奸，這種積累對(duì)于PE和PI是最明顯的。在12個(gè)人類(lèi)PDA腫瘤和9個(gè)匹配的鄰近正常胰腺組織上的單細(xì)胞RNA-seq證實(shí)怎诫，浸潤(rùn)這兩個(gè)不同胰腺微環(huán)境的CD8T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄不同贷痪，人類(lèi)PDA浸潤(rùn)的CD8T細(xì)胞降低了與細(xì)胞毒性特征相關(guān)的基因的表達(dá)。用特異性熒光共軛抗體對(duì)22例慢性胰腺炎和96例PDA腫瘤進(jìn)行多光譜圖像分析肉津，在蛋白質(zhì)水平上證實(shí)ACADVL在腫瘤浸潤(rùn)C(jī)D8T細(xì)胞中的特異性下調(diào)。

思路總結(jié)

1.質(zhì)譜成像檢測(cè)到在胰腺上皮內(nèi)瘤變（PDA）從早期到晚期的腫瘤微環(huán)境（TME）中脂質(zhì)積累偶洋；

2.免疫組化和流式分析CD8+T細(xì)胞在PDA進(jìn)展過(guò)程中功能受損距糖；

3.相對(duì)定量分析及主成分分析胰腺內(nèi)CD8+T細(xì)胞積累非常長(zhǎng)鏈脂肪酸（VLCFAs），CD8+T細(xì)胞功能障礙與特定長(zhǎng)鏈脂肪酸（LCFAs）的積累有關(guān)恩脂；

4.透射電鏡及流式分析胰內(nèi)CD8+T細(xì)胞在富含脂質(zhì)的PDA TME中代謝耗盡趣斤；

5.高通量測(cè)序及免疫熒光分析浸潤(rùn)晚期腺上皮內(nèi)瘤變的CD8+T細(xì)胞顯示酰-CoA脫氫酶（ACADVL）下調(diào)；

6.用一個(gè)含有TCR1045單獨(dú)或TCR1045和ACADVL的結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)導(dǎo)CD8+T細(xì)胞玉凯，注射小鼠联贩，檢測(cè)T細(xì)胞存活率及細(xì)胞因子分泌情況，腫瘤特異性T細(xì)胞工程表達(dá)更高水平的ACADVL表現(xiàn)出增強(qiáng)的代謝適應(yīng)能力歹啼；

7.組織脂質(zhì)染色座菠、高通量測(cè)序、質(zhì)譜成像浴滴、免疫熒光檢測(cè)人胰腺內(nèi)TME中CD8+T細(xì)胞ACADVL下調(diào)岁钓。

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