SDS-PAGE是十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的一種常用電泳技術(shù)弃理，用于分離蛋白質(zhì)和寡核苷酸溃论。聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成。其中四甲基乙二胺（TEMED）作為加速劑能催化過硫酸銨產(chǎn)生自由基痘昌。過硫酸銨（APS）作為催化劑產(chǎn)生自由基钥勋，從而引發(fā)丙烯酰胺單體聚合，同時甲叉雙丙烯酰胺與丙烯酰胺鏈間產(chǎn)生甲叉鍵交聯(lián)辆苔，從而形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)算灸。
其中SDS（十二烷基硫酸鈉）是陰離子去污劑，作為變性劑和助溶試劑驻啤，它能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵菲驴，使分子去折疊，破壞蛋白分子的二三級結(jié)構(gòu)骑冗。而強還原劑如巰基乙醇赊瞬，二硫蘇糖醇能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS后贼涩，分子被解聚成多肽鏈巧涧，解聚后的氨基酸側(cè)鏈和SDS結(jié)合成蛋白-SDS 膠束，所帶的負(fù)電荷大大超過了蛋白原有的電荷量遥倦，這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結(jié)構(gòu)差異谤绳。
SDS-PAGE一般采用的是不連續(xù)緩沖系統(tǒng)，與連續(xù)緩沖系統(tǒng)相比袒哥，能夠有較高的分辨率缩筛。之所以會有分離膠和濃縮膠之分，濃縮膠和分離膠的PH值不同统诺，前者主要表現(xiàn)為濃縮效用，后者表現(xiàn)為分子篩效用疑俭。濃縮膠的pH是6.8粮呢，在這個pH條件下，緩沖液中的HCl的Cl離子幾乎全部解離钞艇，Gly的等電點為6.0啄寡，僅少數(shù)解離為負(fù)離子，在電場中移動速度很慢哩照。酸性蛋白質(zhì)在此pH下解離為負(fù)離子挺物，三類離子的遷移速率為Cl>一般蛋白質(zhì)>Gly，電泳開始后飘弧，Cl離子泳動快识藤，在其后留下一個低離子濃度區(qū)砚著。Gly在電場中移動很慢，造成移動離子的缺乏痴昧，于是快慢離子間就形成了一個缺少離子的高壓區(qū)稽穆，在高壓區(qū)內(nèi)所有的負(fù)離子都會加速移動，當(dāng)移到Cl離子區(qū)域時赶撰，高電壓消失舌镶，蛋白質(zhì)的移動速度慢下來，當(dāng)以上穩(wěn)定狀態(tài)建立后豪娜，蛋白質(zhì)樣品在快慢離子間被濃縮形成一個狹小的之間層餐胀，按照電荷大小排列，但是由于目標(biāo)蛋白都帶有負(fù)電荷瘤载，所以位于同一的起點否灾。從濃縮膠進(jìn)入分離膠后，膠的pH升高惕虑，Gly的離解度增大坟冲，泳動率上升，又因為它分子小溃蔫，故超過所有的蛋白質(zhì)分子健提，緊跟在Cl離子后，Cl離子遷移后伟叛，低離子濃度不再存在私痹，形成了恒定的電場強度，因此统刮，蛋白質(zhì)樣品在分離膠中的分離主要取決于它的電荷性質(zhì)紊遵，分子大小和形狀，分離膠的孔徑有一定大小侥蒙，對不同相對質(zhì)量的蛋白質(zhì)來說暗膜，通過時收到的滯阻作用不同，即使靜電荷相等的顆粒鞭衩，也會由于這種分子篩的效應(yīng)学搜，把不同大小的蛋白質(zhì)相互分開。
步驟：
1.配膠论衍，有分離膠和濃縮膠之分瑞佩，膠濃度隨你蛋白的大小變化而變化，一般12%坯台，一般需要兩個小時炬丸，需要提前準(zhǔn)備。短期可以充水放置于4℃冰箱蜒蕾。
2.將蛋白加入5X的SDS-loading稠炬， 100℃加熱10min焕阿，以充分變性蛋白。
3.上樣酸纲，一般10μL捣鲸。
4.濃縮膠一般80V 30min 進(jìn)入分離膠后可140V 30min。
5.結(jié)束后可用于考染或者western blot闽坡。
最后的最后? 提醒一下自己：
丙烯酰胺-甲叉丙烯酰胺（Arc-Bis）：中等毒性栽惶，神經(jīng)毒劑。低濃度接觸數(shù)月數(shù)年后疾嗅，漸出現(xiàn)頭痛頭暈疲勞外厂，嗜睡，手指剌痛代承，麻木感汁蝶，常伴有兩手掌發(fā)紅，脫屑论悴，手掌足心多汗掖棉。
過硫酸銨（APS）：對皮膚粘膜有刺激性和腐蝕性.吸入后引起鼻炎、喉炎膀估、氣短和咳嗽等.眼幔亥、皮膚接觸可引起強烈刺激、疼痛甚至灼傷.口服引起腹痛察纯、惡心和嘔吐.長期皮膚接觸可引起變應(yīng)性皮炎.帕棉。
SDS：對粘膜和上呼吸道有刺激作用,對眼和皮膚有刺激作用.可引起呼吸系統(tǒng)過敏性反應(yīng)。
TEMED：強神經(jīng)毒劑
記得帶上手套和口罩饼记！
