一半抱、載體被譽(yù)為基因操作中的“分子的運(yùn)輸車”脓恕,其本質(zhì)是一類核酸分子
攜帶外源目的基因進(jìn)入宿主細(xì)胞,并能穩(wěn)定存在窿侈,利用宿主細(xì)胞的復(fù)制或表達(dá)系統(tǒng)炼幔,進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)系統(tǒng)的工具稱為載體。
二史简、作為分子的運(yùn)輸者—載體需要具備以下幾個(gè)基本條件:
- 具有自我復(fù)制的能力—載體必須要有自己的復(fù)制起始位點(diǎn)乃秀,能夠獨(dú)立復(fù)制;
- 具有合適的限制性核酸內(nèi)切酶的單一酶切位點(diǎn)—外源DNA片段準(zhǔn)確的插入到載體上圆兵;
- 具有合適的選擇標(biāo)記基因—用來篩選重組體跺讯;
選擇性標(biāo)記基因的作用:首先證明載體已經(jīng)進(jìn)入至宿主細(xì)胞;此外還可將含有外源基因的宿主細(xì)胞從其他細(xì)胞中篩選出來殉农;
最常用的遺傳選擇性標(biāo)記基因:
? 抗藥性基因如抗氨芐青霉素刀脏、抗卡那霉素kana等抗抗生素基因
? lacZ基因
? 綠色熒光蛋白基因GFP
? 發(fā)光基因
三、依據(jù)用途和功能可分為:
克隆載體和表達(dá)載體
A.克隆載體(克隆基因或DNA片段):
克隆載體攜帶外源基因進(jìn)入宿主細(xì)胞超凳,使外源基因在宿主細(xì)胞中繁殖的載體愈污。
復(fù)制子是克隆載體最重要的一個(gè)結(jié)構(gòu)成分,復(fù)制子的存在帶動(dòng)外源基因在宿主細(xì)胞中復(fù)制擴(kuò)增轮傍。
B.表達(dá)載體(用于基因的蛋白表達(dá)):
表達(dá)載體是能使外源基因在宿主細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄和翻譯的載體暂雹。
與克隆載體想比較,表達(dá)載體不僅可以使外源基因在宿主細(xì)胞中擴(kuò)增金麸,而且還可利用表達(dá)系統(tǒng)完成在宿主細(xì)胞中的表達(dá)擎析。