細(xì)胞用表達(dá)多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
觀察到血管性血友病因子的表達(dá)及對熒光標(biāo)記的低密度脂蛋白（LDL）的攝入確認(rèn)其內(nèi)皮細(xì)胞特性瑟由。
bEnd.3 cells細(xì)胞可用細(xì)胞因子和脂多糖(LPS)誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的Peyer's結(jié)高內(nèi)皮細(xì)胞受體， 粘膜血管定居因子(MAdCAM-1) 及內(nèi)皮細(xì)胞選擇素的表達(dá)簿寂。
腫瘤壞死因子 a (TNF alpha), 白介素 1 (IL-1)或 LPS的誘導(dǎo)作用是濃度及時間依賴的忽媒。
代數(shù)較早的bEnd.3細(xì)胞未受刺激時在表面表達(dá)MAdCAM-1襟士，但過了30代后就不表達(dá)了语淘。
細(xì)胞粘附分子 1 (ICAM-1)持續(xù)表達(dá)妇汗，并在LPS, IL-1 and TNF a處理后升高。
30代前血管細(xì)胞粘附分子 1 (VCAM-1)持續(xù)表達(dá)掂摔，但30代后不表達(dá)术羔。
bEnd.3細(xì)胞中腫瘤壞死因子a (TNF alpha)可以誘導(dǎo)P-選擇素的表達(dá)职辅，30代后更強(qiáng)。
Bend.3細(xì)胞信息
細(xì)胞名稱：小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
細(xì)胞簡稱：Bend.3
細(xì)胞別名：bEND.3; b.End3; Bend.3; bEnd3; BEND3; brain-derived Endothelial cells.3
產(chǎn)品貨號：TCM-C715
種屬來源：小鼠
組織來源：腦
細(xì)胞形態(tài)：上皮樣細(xì)胞
生長特性：貼壁生長
培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%P/S
配套培養(yǎng)基貨號：TCM-G715
傳代比例：1:4-1:6聂示，每2-3天換液一次
傳代周期：24-32 h
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2域携，溫度：37℃
凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存
推薦海星?HyCyte?一步凍存液（即用型鱼喉、無血清秀鞭、無需程序降溫），貨號：GUCP-201
Bend.3細(xì)胞培養(yǎng)要點
bEnd.3細(xì)胞最常遇到的問題就是細(xì)胞形態(tài)變化和難消化
細(xì)胞形態(tài)問題
Bend.3細(xì)胞本身生長較慢扛禽，在低密度時會呈現(xiàn)不規(guī)則細(xì)胞形態(tài)锋边，高密度時則呈規(guī)則纖維狀，所以若在培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)異常编曼，則有可能是細(xì)胞密度低豆巨，建議細(xì)胞鋪滿密度較高時傳代。以下為bEnd.3細(xì)胞不同密度培養(yǎng)圖片：
細(xì)胞消化問題
1. 消化時間：bEnd.3細(xì)胞培養(yǎng)時間越長越難消化掐场，培養(yǎng)4天傳代往扔，一般消化3-5分鐘；培養(yǎng)7天傳代熊户，一般消化5-10分鐘萍膛。具體消化時間以顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)為準(zhǔn)。
2. 難消化問題：如遇到消化困難不必?fù)?dān)心嚷堡，可通過分次消化的方式解決蝗罗，具體操作方法如下（以T25瓶細(xì)胞為例）：
(1) 吸出原培養(yǎng)液；
(2) 加入2mL左右PBS蝌戒，輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞串塑，吸出PBS丟棄；
(3) 加入1mL左右胰酶北苟，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞桩匪；
(4) 放入培養(yǎng)箱消化，消化3-5分鐘（根據(jù)具體細(xì)胞稍作延長或縮短）粹淋，顯微鏡下看到細(xì)胞開始漂浮吸祟，可以加入2mLPBS瑟慈，晃動培養(yǎng)瓶使細(xì)胞懸浮桃移，不要吹打剩下的貼壁細(xì)胞；
(5) 吸出培養(yǎng)瓶內(nèi)的PBS和細(xì)胞懸液葛碧，轉(zhuǎn)移到無菌離心管中借杰，在離心管中加入3mL含血清的培養(yǎng)基終止消化并吹散細(xì)胞，使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液进泼；
(6) 原培養(yǎng)瓶中加入0.5mL胰酶蔗衡，晃動培養(yǎng)瓶浸潤細(xì)胞纤虽，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)消化，直到細(xì)胞塊中間全部收縮變圓绞惦，晃動培養(yǎng)瓶可脫落逼纸；
(7) 用3mL含血清的培養(yǎng)基終止消化，將瓶底的細(xì)胞全部吹下济蝉，并輕輕吹吸分散細(xì)胞呈單顆杰刽；
(8) 收集細(xì)胞懸液與第一次消化下來的細(xì)胞合并到一個離心管；
(9) 離心收集細(xì)胞沉淀王滤，1100rpm/min 4分鐘贺嫂，離心完吸出上清丟棄；
(10) 加入新鮮培養(yǎng)基雁乡，吹打幾下混勻細(xì)胞第喳，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補(bǔ)足培養(yǎng)基踱稍，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)曲饱；
(11) 檢查培養(yǎng)箱二氧化碳，溫度和水盤珠月。
Bend.3細(xì)胞培養(yǎng)注意事項
(1) 細(xì)胞培養(yǎng)過程中形態(tài)多樣渔工，低密度時容易出現(xiàn)放射狀細(xì)胞，看似已經(jīng)鋪滿瓶底桥温，其實細(xì)胞量較少引矩，需要細(xì)胞胞體排列緊密的時候進(jìn)行傳代；
(2) 細(xì)胞培養(yǎng)過程中避免頻繁換液侵浸，可以每隔2-3天換液或者半量換液一次旺韭；
(3) 培養(yǎng)過程中會產(chǎn)生10%左右活的單顆漂浮細(xì)胞，貼壁細(xì)胞密度偏低時掏觉，注意收集懸浮細(xì)胞区端，貼壁細(xì)胞密度偏高時，可以換液時丟棄澳腹；
(4) 接種量對細(xì)胞生長有影響织盼，接種量過低細(xì)胞會有增殖緩慢，漂浮過多的現(xiàn)象酱塔，請注意控制傳代比例沥邻；
(5) 細(xì)胞對溫度和pH較敏感，傳代或換液前培養(yǎng)基可以常溫復(fù)溫4小時以上羊娃；避免使用pH改變（偏酸：顏色偏黃唐全；偏堿：顏色偏紫紅）的培養(yǎng)基；
(6) 細(xì)胞傳代過程中若出現(xiàn)單次消化時間過長蕊玷，可進(jìn)行分次消化邮利，切不可將細(xì)胞強(qiáng)行吹下來弥雹，以避免吹打造成細(xì)胞機(jī)械損傷。
