1. 細菌 Cas9 的原理
(1) 原始狀態(tài)
cas9_3.png
(2) 改造后的狀態(tài)
cas9_4.png
(3) 如何編輯 genomic DNA
cas9_5.png
其中 依賴DNA Binding Proteins 的技術(shù)有：
DNA_BP.png
蛋白特異性結(jié)合DNA后徘溢，
(4) 基因操作技術(shù)
- DNA 測序
- 限制性內(nèi)切酶
- PCR
- Genome editing
(5) CRISPR-Cas9 技術(shù)
cas9_6.png
(6) Genome editing using CRISPR-Cas9
genome_editing.png
藍色是自己設(shè)計的20bp的gRNA序列吞琐；
而切割位點在NGG的上游某個位置，_-20bp之間然爆。
- 細菌中站粟，Cas9蛋白精確的平端切割位點位于PAM上游3個核苷酸位置，形成平末端產(chǎn)物曾雕。
有兩種修復(fù)切口的方法：
- 自然修復(fù)
-
提供一個外源 template DNA序列奴烙，兩端和切口配對，中間靠DNA修復(fù)機制剖张。
insertion.png
切口位置：
cut_site.png
(7) CRISPR-Cas as a genome editing toolbox
toolbox.png
主要有2個使用方法：
- 基因編輯
- DNA結(jié)合蛋白切诀，用于操縱基因組：把切割domain替換為其他分子，
- 比如啟動子來做過表達搔弄，
- GFP來定位基因組三維結(jié)構(gòu)幅虑。
2. 一個植物敲除的例子
一個載體上2個gRNA的例子。
cas9_1.png
cas9_2.png
3. 更多研究
(1) Testing in vivo editing using SaCas9
幾乎每種微生物都有自己的Cas9版本顾犹，大小和序列都不一樣倒庵。
切割效率也不一樣。體內(nèi)測試切割效率蹦渣。
SaCas9.png
(2) CRISPR 系統(tǒng)的分類
Cas9_classes.png
(3) 如果編輯RNA呢哄芜？
edit_RNA.png
