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摘要：鐵死亡是一種鐵依賴的非凋亡細(xì)胞死亡形式逼侦，但其分子機(jī)制仍不清楚冕广。在這里，我們證明熱休克蛋白β-1(HSPB1)是癌細(xì)胞鐵死亡的負(fù)調(diào)節(jié)因子偿洁。Erastin是一種特異性的鐵死亡誘導(dǎo)化合物撒汉，能刺激癌細(xì)胞中依賴于熱休克因子1(HSF1)的HSPB1的表達(dá)。HSF1和HSPB1的敲除增強(qiáng)了erastin誘導(dǎo)的鐵死亡涕滋，而熱休克預(yù)處理和HSPB1的過(guò)表達(dá)則抑制erastin誘導(dǎo)的鐵死亡睬辐。蛋白激酶C介導(dǎo)的HSPB1磷酸化通過(guò)減少鐵介導(dǎo)的脂質(zhì)活性氧的產(chǎn)生而提供對(duì)鐵死亡的保護(hù)。此外宾肺，抑制HSF1-HSPB1途徑和HSPB1磷酸化增加了erastin在人/鼠移植瘤模型中的抗癌活性溯饵。我們的研究結(jié)果揭示了HSPB1在鐵代謝中的重要作用，在鐵死亡介導(dǎo)的癌癥治療中具有重要作用锨用。
為什么作者會(huì)做這個(gè)東西丰刊，估計(jì)是這種熱休克蛋白是應(yīng)激時(shí)增多的，并且鐵死亡也屬于應(yīng)激增拥，那么兩者是否有一種特殊的緣分使其結(jié)合在一起啄巧。。掌栅。秩仆。。猾封。
首先澄耍，作者應(yīng)用erastin刺激，看看熱休克蛋白家族變化情況晌缘，找到作者想要研究的這個(gè)熱休克蛋白齐莲，修的麻袋，這回HSP70為什么這么熟悉磷箕，似乎我之前看過(guò)hsp70可以結(jié)合GPX4选酗，促進(jìn)穩(wěn)定，負(fù)性調(diào)節(jié)鐵死亡的文章搀捷，滿滿的套路啊星掰。
找到了一個(gè)蛋白，接下來(lái)又兩個(gè)思路嫩舟，一是為什么這個(gè)蛋白升高了氢烘，二是，這個(gè)蛋白又什么用家厌。先找上游播玖，發(fā)現(xiàn)敲除了上游HSF1，HSPB1也改變了饭于。文章設(shè)計(jì)不嚴(yán)謹(jǐn)啊蜀踏，這里應(yīng)該做CO-IP實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證下啊。
然后掰吕，作者敲減細(xì)胞的HSPB1和HSF1果覆，看看鐵死亡耐受情況，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞對(duì)鐵死亡耐受增加殖熟。在erastin誘導(dǎo)下細(xì)胞內(nèi)鐵增多局待，可能與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體增加有關(guān)，同時(shí)細(xì)胞在erastin誘導(dǎo)下脂質(zhì)過(guò)氧化水平明顯升高菱属，這種erastin誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡可以被抗鐵死亡藥物逆轉(zhuǎn)钳榨。作者這么做感覺(jué)真亂，就是不是能分開(kāi)做個(gè)纽门，非要兩個(gè)一起薛耻，任性，這個(gè)鐵你提出來(lái)干嘛赏陵？
試問(wèn)饼齿，你怎么做過(guò)表達(dá)？蝙搔？候醒？轉(zhuǎn)質(zhì)粒、蛋白杂瘸，No倒淫，作者直接在42℃熱浴1小時(shí)，然后在進(jìn)行erastin誘導(dǎo)败玉，再轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)質(zhì)粒敌土，觀察HSPB1的作用≡艘恚總而言之返干，過(guò)表達(dá)HSPB1可以增加細(xì)胞對(duì)erastin的敏感性。
緊接著就是對(duì)真?zhèn)€蛋白的功能研究血淌，HSPB1磷酸化是發(fā)揮功能的形式矩欠，這個(gè)磷酸化是被PKC作用的财剖，應(yīng)用PKC抑制劑(例如G?6983和Calphostin C)顯著阻斷HSPB1的磷酸化。同時(shí)抑制了HSPB1介導(dǎo)的erastin耐受癌淮。HSPB1的磷酸化正向調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白聚合和重組躺坟，從而限制鐵的攝取乳蓄。為了進(jìn)一步證實(shí)肌動(dòng)蛋白聚合在鐵下垂中的作用，在基因上敲除了哺乳動(dòng)物Wiskott-Aldrich綜合征蛋白的關(guān)鍵成員WAVE2虚倒。在erastin處理后，shRNA抑制HeLa細(xì)胞中WAVE2的表達(dá)增加了細(xì)胞內(nèi)鐵和生長(zhǎng)抑制魂奥。
最后，作者做了一波動(dòng)物耻煤。KRIBB3是HSPB1磷酸化抑制劑，為什么沒(méi)有組化违霞，為什么沒(méi)有動(dòng)物的腫瘤標(biāo)本圖片？為什么沒(méi)有組織的HSP1,鐵买鸽，HSPB1,WAVE2的WB和免疫熒光圖片涧郊。眼五。。為什么看幼？？诵姜？
機(jī)制大概是這個(gè)樣子
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