人巨細(xì)胞病毒感染期間宿主蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性分析揭示抗病毒因子和病毒逃逸機制
High-Definition Analysis of HostProtein Stability during Human Cytomegalovirus Infection Reveals AntiviralFactors and Viral Evasion Mechanisms
全文
Cell Host & Microbe
人巨細(xì)胞病毒（HCMV）是一種臨床上廣泛存在的病原體，一旦感染則終身潛伏凿滤，當(dāng)機體免疫力低下時沾瓦，病毒激活則會導(dǎo)致多種疾病隅肥。HCMV 具有多種免疫逃避策略，包括促進(jìn)宿主抗病毒限制因子（ARFs）的降解。在 HCMV 感染早期會通過蛋白酶體和溶酶體激活宿主蛋白降解途徑寻定。
本研究使用蛋白質(zhì)組和轉(zhuǎn)錄組的方法識別與先天免疫功能相關(guān)的關(guān)鍵蛋白辖源，鑒定到35種富集于抗病毒限制因子的蛋白蔚携，最后通過一種病毒突變子 panel 預(yù)測到靶向250多種人類蛋白的病毒基因。
研究表明：在DNA修復(fù)過程中起重要作用的解旋酶樣轉(zhuǎn)錄因子（HLTF）能夠有效抑制早期病毒的基因表達(dá)克饶，但在感染期間會由功能未知的HCMV蛋白UL145通過招募Cullin4 E3連接酶復(fù)合體促進(jìn)其快速降解酝蜒。
本研究的方法和數(shù)據(jù)預(yù)示了先天抗病毒免疫分子的重要性，能夠進(jìn)一步識別HCMV或其他病毒靶向的宿主先天免疫途徑矾湃。
取樣：細(xì)胞系不同病毒感染時間點
方法：蛋白組+RNA-seq
分析：蛋白種類亡脑，蛋白降解，DAVID細(xì)胞通路，聚類分析
1. 基于抑制劑的TMT定量蛋白質(zhì)組篩選HCMV感染早期靶向的宿主蛋白降解
為了全面發(fā)現(xiàn)HCMV感染早期靶向的宿主蛋白霉咨，在永生化原代人胎兒包皮成纖維細(xì)胞（HFFF-TERTs）感染早期的3個時間點加入蛋白酶體抑制劑MG132或溶酶體蛋白酶抑制劑亮抑酶肽leupeptin蛙紫。
2. pSILAC/TMT定量蛋白質(zhì)組全面分析感染期間蛋白的合成與降解
3. RNA-seq及蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)聯(lián)合分析轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控表達(dá)
4. HCMV感染降解靶標(biāo)蛋白的機制研究
總結(jié)
通過蛋白質(zhì)組學(xué)+轉(zhuǎn)錄組學(xué)關(guān)聯(lián)分析揭示“病毒感染-免疫逃避-靶向宿主蛋白并降解”
在DNA修復(fù)過程中起重要作用的解旋酶樣轉(zhuǎn)錄因子（HLTF）能夠有效抑制早期病毒的基因表達(dá)躯护，但在感染期間會由功能未知的HCMV蛋白UL145通過招募Cullin4 E3連接酶復(fù)合體促進(jìn)其快速降解惊来。
