酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定enzyme linked immunos orbent assay（簡(jiǎn)寫ELISA）是指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上屹逛，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法断国。
ELISA的基本原理是：1.使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性鱼鸠；2.是抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體猛拴，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性羹铅，又保留酶的活性蚀狰；3.在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗原或抗體）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)职员；4.用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分開麻蹋，最后結(jié)合在固相載體上的酶量和標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定比例；5.加入酶反應(yīng)的底物后焊切，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物扮授，產(chǎn)物的量和受檢物質(zhì)的量成一定的比例，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺有無定性或定量分析专肪。
ELISA目前分為三種方法學(xué)：
夾心法
夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原刹勃，一般的操作步驟是將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體嚎尤；
加入待測(cè)檢體荔仁，若檢體中若含有待測(cè)的抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)，然后洗去多余待測(cè)檢體乏梁；
洗去多余未鍵結(jié)一次抗體次洼，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)遇骑；
洗去多余未鍵結(jié)二次抗體卖毁，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果落萎。
間接法
間接法常用于檢測(cè)抗體亥啦，一般的操作步驟為：
將已知的抗原故著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗原模暗；
加入待測(cè)檢體禁悠，檢體中若含有待測(cè)的一次抗體，則其會(huì)與塑膠盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)兑宇；
洗去多余待測(cè)檢體碍侦，加入帶有酶的二次抗體，與待測(cè)的一次抗體鍵結(jié)隶糕；
洗去多余未鍵結(jié)的二次抗體瓷产，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測(cè)定塑膠盤中的吸光值（OD值）枚驻，以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗體的含量濒旦。
競(jìng)爭(zhēng)法
競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制，一般用于檢測(cè)小分子抗原再登，其操作步驟為：
將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上尔邓，完成后洗去多余抗體；
加入待測(cè)檢體锉矢，使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)梯嗽；
加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)沽损，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限灯节，因此，當(dāng)檢體中的抗原量越多绵估，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少炎疆，亦即，兩種抗原皆可競(jìng)相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)国裳，即所謂競(jìng)爭(zhēng)法的由來形入；
洗去檢體帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色缝左，當(dāng)檢體中抗原量越多亿遂，代表塑膠孔盤內(nèi)留有酶的抗原越少螟蒸，顯色也就越淺。
當(dāng)需要偵查無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原崩掘，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時(shí)七嫌，一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。
定性測(cè)定的結(jié)果判讀是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出有或無的簡(jiǎn)單回答苞慢，分別用陽性诵原、陰性表示。
陽性表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)挽放，陰性則無反應(yīng)绍赛。
用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度辑畦，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)吗蚌。
在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)纯出，呈陽性反應(yīng)的最高稀釋度即為滴度蚯妇。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱暂筝，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性箩言、弱陽性更具有定量意義。
在間接法和夾心法ELISA中焕襟，陽性孔呈色深于陰性孔陨收。
在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽性孔鸵赖。
