進(jìn)行體外哺乳動物的細(xì)胞培養(yǎng)扬卷，其要點(diǎn)之一是在培養(yǎng)器皿中營造一種生理環(huán)境和特殊細(xì)胞類型的特異性反應(yīng)。液態(tài)培養(yǎng)基至少要為細(xì)胞提供生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)酸钦、能量怪得、恒定的pH 和適當(dāng)?shù)臐B透壓。此外卑硫，培養(yǎng)的外環(huán)境汇恤，尤其隔水式CO2培養(yǎng)箱，一定要達(dá)到穩(wěn)定的溫度和濕度拔恰，以防培養(yǎng)液蒸發(fā)因谎，還要供給呼吸所需的O2和維持培養(yǎng)液中碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)的CO2。目前普遍使用的培養(yǎng)基一般由兩部分組成：基礎(chǔ)營養(yǎng)和補(bǔ)充成分颜懊。它們的組成可有相當(dāng)大的差別财岔。無論怎樣，完全培養(yǎng)基的這兩組成分都是細(xì)胞存活和增殖所不可缺少的河爹。
注意：用于細(xì)胞培養(yǎng)的所有溶液和培養(yǎng)液匠璧，均應(yīng)使用反向滲透系統(tǒng)生產(chǎn)的純凈水配制；用后的培養(yǎng)器皿要用水沖洗咸这，不要用消毒劑處理夷恍。
注意：所有與活細(xì)胞接觸的試劑與器械一定要滅菌，同時采用相應(yīng)的無菌技術(shù)媳维。
如何制備含血清的培養(yǎng)基酿雪？
許多細(xì)胞類型，尤其是成纖維細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞侄刽，其生存和增殖都要在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加5%~20% (v/v) 的血清指黎。值得注意的是，如果培養(yǎng)的組織標(biāo)本中有多種細(xì)胞類型州丹，則成纖維細(xì)胞占有生長優(yōu)勢醋安。此外杂彭，培養(yǎng)基還可有選擇性地對抗某些類型細(xì)胞的增殖。除了正處于修復(fù)的細(xì)胞外吓揪，添加血清成分的培養(yǎng)基并不真正接近于細(xì)胞的生理環(huán)境亲怠。
材料
基礎(chǔ)營養(yǎng)培養(yǎng)基，如DMEM
HEPES
NaHCO3
谷氨酰胺和丙酮酸
青霉素G 和硫酸鏈霉素
5mol/L NaOH
血清
除菌濾器
0.2μm 微孔濾器
步驟
1.用1.8~0.9 倍體積的水溶解粉末狀培養(yǎng)基柠辞，不斷攪拌赁炎。
?如果是商品化液體培養(yǎng)基，直接加青霉素钾腺、鏈霉素儲存液徙垫，進(jìn)入步驟8 。
2.加一定量HEPES 溶液放棒，在終體積培養(yǎng)基中為15mmol/L 姻报。
3.按生產(chǎn)商推薦劑量添加NaHCO3（例如， 5 % CO2壓力下间螟， NaHCO3的濃度為14~36mmol/L) 吴旋。
4.加谷氨酰胺，終濃度為0. 01% (w/ v) 厢破；加丙酮酸荣瑟，終濃度為0. 01% (w/v) 。
5.加青霉素G, 終濃度為100IU/ ml; 加硫酸鏈霉素摩泪，終濃度為50μg/ml 笆焰。
6.5mol/L NaOH 溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH 至7. 4, 補(bǔ)足水至終體積(1 X ) 。如果需要见坑，再調(diào)整pH 嚷掠。
7.用0. 2μm 微孔濾器過濾培養(yǎng)基， 4°C 避光存放荞驴。
8.用時按需加入血清不皆。
