2009-2022腻惠，13年文庫構(gòu)建和篩選經(jīng)驗瓤漏，專業(yè)的文庫構(gòu)建和篩選供應(yīng)商。
提供SMART-Gateway-All direct三種建庫技術(shù)方案堤撵。
即日起，文庫構(gòu)建服務(wù)優(yōu)惠促銷中羽莺，9999元起实昨！
“自1989年Field等人建立了第一個基于酵母的細胞內(nèi)檢測蛋白相互作用的系統(tǒng)以來,酵母雙雜交系統(tǒng)已經(jīng)越來越多的應(yīng)用于鑒定新的蛋白與蛋白相互作用,鑒定蛋白級聯(lián)底物以及鑒定突變對蛋白與蛋白結(jié)合的影響等。有文獻統(tǒng)計,目前已知的蛋白質(zhì)相互作用至少有一半是通過酵母雙雜交實驗發(fā)現(xiàn)的盐固！” 而文庫篩選結(jié)果直接由文庫質(zhì)量的好壞所決定荒给，構(gòu)建出高質(zhì)量的文庫是得到好的篩選結(jié)果的關(guān)鍵因素。
我們擁有13年的文庫構(gòu)建經(jīng)驗刁卜，已完成數(shù)千個各類文庫構(gòu)建志电，所采用的技術(shù)以及試劑盒均為市場上質(zhì)量最好的文庫構(gòu)建試劑，保證所構(gòu)建的每一個文庫各項指標(biāo)均為市場上最高標(biāo)準(zhǔn)蛔趴，我們構(gòu)建文庫的成功率為98%以上挑辆。關(guān)于我們的文庫構(gòu)建產(chǎn)品，我們承諾的指標(biāo)如下夺脾，各項指標(biāo)在國內(nèi)各家公司里是最高的之拨。
上海寶吉結(jié)合多年的文庫構(gòu)建經(jīng)驗，強勢推出“All-Direct”文庫構(gòu)建技術(shù)咧叭，我們的產(chǎn)品較其他構(gòu)建方法（主要有takara的SAMRT方法和invitrogen的gateway方法），技術(shù)和質(zhì)量上都具有極大的優(yōu)勢烁竭。
一菲茬、產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與報價
關(guān)于我們的文庫構(gòu)建產(chǎn)品，我們承諾的指標(biāo)如下，各項指標(biāo)在國內(nèi)各家公司里是最高的:
原始文庫庫容量大于1*10^7CFU婉弹；
平均插入片段大于1200bp睬魂；
克隆陽性率大于95%。
二镀赌、技術(shù)特點與技術(shù)優(yōu)勢:
? 1.我們是采用同源重組的方法構(gòu)建文庫氯哮，沒有經(jīng)過任何的內(nèi)切酶切割和連接過程，確保不會出現(xiàn)基因被酶切切斷的情況商佛，能夠保證基因的完整性喉钢，而Clonetech的是用酶切連接的方式構(gòu)建的。
? 2.由于我們采用的是重組的方式把cDNA重組到載體上良姆，相對clonetech的SMART的T4連接酶的方法效率要高的多肠虽，我們承諾原始庫的庫容量在1*10^7以上。而且重組的方式假陽性很低玛追，我們這里有的客戶一次測3萬個克隆税课，都沒有出現(xiàn)一個空載的情況，我們承諾陽性率大于98%痊剖，這是酶切連接的方法遠遠無法比擬的韩玩。
? 3.Clonetech的SMART方法是用PCR的方法合成第二鏈的，由于PCR的選擇性抑制及競爭性擴增陆馁，這樣就會造成基因冗余度非常高啸如，低豐度的基因PCR擴增不到，會丟失掉氮惯，長片段的基因也會丟失掉叮雳，另外會造成重復(fù)序列非常多，特別是起始的RNA樣本量少的情況（比如5ug RNA以下就需要進行15個循環(huán)以上的PCR擴增妇汗，大大降低文庫質(zhì)量),帘不，大大降低文庫包含的基因數(shù)量，而我們的cDNA合成方法是用多種酶在16度恒溫的條件下直接合成第二鏈的杨箭，這樣就完全忠于樣本自身的基因情況寞焙，不會人為的改變樣本內(nèi)的基因情況以及基因大小，大大提到文庫的質(zhì)量互婿。
? ? 4.我們是采用的一種高質(zhì)量的反轉(zhuǎn)錄酶捣郊，該反轉(zhuǎn)錄酶是公認的最好的反轉(zhuǎn)錄酶，較clonetech的反轉(zhuǎn)錄酶具有反轉(zhuǎn)錄溫度高（55攝氏度反轉(zhuǎn)慈参，clonetech的反轉(zhuǎn)錄酶是使用42度反轉(zhuǎn)呛牲，較高的溫度可以打開RNA的二級結(jié)構(gòu)，可以獲得更長的cDNA）驮配，反轉(zhuǎn)錄效率和cDNA長度要好的多娘扩。我們承諾文庫的平均插入片段在1.3Kbp以上着茸，最低長度也在1Kbp以上，而clonetech的SMART方法構(gòu)建出來的文庫一般只有幾百BP琐旁。
文庫構(gòu)建流程:
1.RNA提取
2.mRNA提取
3.cDNA的酶促法合成
4.cDNA連接接頭
5.cDNA按長度分離
6.cDNA與酵母雙雜交文庫載體(pGADT7或者pDEST22)進行all-direct重組
7.重組產(chǎn)物電轉(zhuǎn)化
8.文庫檢測以及質(zhì)粒提取
三涮阔、All-direct方法的技術(shù)優(yōu)勢和對比
3.1 All-direct方法與SMART方法的比較與優(yōu)勢
3.2? All-direct方法與Gateway方法的比較與優(yōu)勢
四、交付內(nèi)容
五灰殴、服務(wù)時間:
25個工作日內(nèi)敬特，如需轉(zhuǎn)化酵母延長15個工作日。
備注1：該酵母文庫可以選擇增加均一化處理步驟牺陶，我們使用DSN法均一化方法伟阔，可以構(gòu)建出高質(zhì)量的均一化酵母雜交文庫，可以大大減少后續(xù)酵母篩選的工作量和篩選效率等义图。
六减俏、材料要求:
客戶構(gòu)建指定的酵母雙雜交cDNA文庫，由客戶提供組織碱工、細胞或總RNA給我們即可：
細胞樣本：細胞數(shù)量大于1*10^7
動物樣本：大于1g
植物樣本：大于2g
總RNA：大于200ug
七娃承、客戶案例:
目前我們已經(jīng)成功完成數(shù)千個不用樣本的文庫構(gòu)建，主要客戶為中國科學(xué)院上海植物生理生態(tài)研究所怕篷、上海交通大學(xué)历筝、浙江大學(xué)、浙江省農(nóng)科院廊谓、山東省農(nóng)科院等多家單位完成酵母雙（單）雜交文庫構(gòu)建服務(wù)梳猪，物種包括人、小鼠蒸痹、大鼠春弥、水稻、擬南芥叠荠、牡丹匿沛、稻飛虱、蘋果榛鼎、油菜逃呼、小麥、貝殼者娱、葡萄抡笼、真菌等。
八黄鳍、文庫篩選:
我們是國內(nèi)極少數(shù)能同時提供文庫構(gòu)建和文庫篩選的公司推姻，對于酵母雙雜交篩選服務(wù)，您只需要提供誘餌基因序列即可际起，我們會進行以下工作拾碌，篩選的報價為3萬元整:
1.誘餌載體的測序驗證以及構(gòu)建到雙雜交篩選載體上
2.誘餌基因的自激活檢測吐葱，檢測通過后繼續(xù)下一步實驗街望。
3.誘餌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母細胞校翔，驗證合格后再轉(zhuǎn)化文庫質(zhì)粒
4.酵母篩選和3AT條件優(yōu)化
5.篩選結(jié)果的測序
6.篩選結(jié)果的回轉(zhuǎn)驗證
7.篩選結(jié)果遞交:包括篩選報告，篩選結(jié)果的測序結(jié)果和blast結(jié)果灾前，篩選結(jié)果克隆的質(zhì)粒實物防症。
九、FAQ:
9.1.如何選擇合適的文庫構(gòu)建方法進行建庫哎甲？
※ 我們是市場上唯一可以同時提供3種文庫構(gòu)建方法的公司蔫敲，這也足以看出我們公司的技術(shù)實力。
※ 3種方法的比較如下：
? 1) Clonetech 的SMART方法炭玫，該方法基本是被淘汰的奈嘿，我們上文有詳細的技術(shù)比較，其唯一的好處就是RNA的起始量可以很小吞加，一般只需要幾ug即可裙犹，該方法成本很低，一般不建議選擇衔憨。
? 2) Invitrogen的方法叶圃，該方法質(zhì)量上較SMART方法要好很多，其對試劑的質(zhì)量要求也很高践图，必須全部使用invitrogen的原廠試劑。我們?nèi)渴褂胕nvitrogen公司試劑進行構(gòu)建，且做了一些技術(shù)改進囤躁，提高了文庫質(zhì)量常潮。該方法對起始的RNA要求較高，建議起始用量是大于200ug揖盘。但該方法有一個嚴重的缺點眉厨，就是需要進行兩次重組才能得到酵母文庫，而多一次重組就會多一次文庫擴增過程扣讼，會嚴重影響文庫質(zhì)量缺猛。在上文中有詳細的技術(shù)比較和介紹。
? 別的使用該方法建庫的公司椭符，只能完全使用商業(yè)化的試劑盒構(gòu)建文庫荔燎，沒有做任何改進。且由于進貨渠道的原因销钝，試劑盒內(nèi)的有些試劑他們是買不到的有咨，質(zhì)量就會大打折扣。比如DH10B 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞蒸健，這個感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)化效率比國產(chǎn)的高出100倍以上座享。這個感受態(tài)細胞需要具有很多的海關(guān)批文才能買到婉商，其他公司由于沒有相關(guān)資質(zhì)，是無法進口的渣叛。
? 3) All-Direct專利方法丈秩，這個是我們的獨家專利方法，是在invitrogen方法上做了重要改進淳衙，保留了其優(yōu)點（不用PCR擴增蘑秽，文庫保真度高），去除了其需要經(jīng)過兩次重組的缺點箫攀，大大提高文庫質(zhì)量肠牲。平均長度較invitrogen方法可以提高200bp，庫容量可以提高10倍以上靴跛。該方法對RNA的要求量和invitrogen方法一樣缀雳。
9.2.寶吉生物提供的酵母雙雜文庫有哪些產(chǎn)品內(nèi)容？
※ 我們提供的文庫產(chǎn)品梢睛，包含了文庫質(zhì)量（大于200ug）以及大腸桿菌文庫甘油菌肥印。同時可以選擇提供轉(zhuǎn)化到酵母細胞的文庫甘油菌，我們會提供100只轉(zhuǎn)化到酵母細胞的文庫甘油菌扬绪，可以做100次的文庫篩選竖独。
※ 其中文庫質(zhì)粒可以使用共轉(zhuǎn)的方法進行文庫篩選挤牛，酵母細胞文庫甘油菌可以使用maiting的方法進行文庫篩選莹痢，根據(jù)老師的實驗習(xí)慣可以自由選擇，結(jié)果沒有任何差異的墓赴。
9.3.如何檢測文庫質(zhì)量竞膳？
※ 對于文庫的質(zhì)量，一個簡單的金標(biāo)準(zhǔn)就是诫硕，樣本內(nèi)的所有基因都在文庫里坦辟，且基因要有一半以上的全長基因，這個文庫就是合格的章办。
※ 對于文庫的檢測锉走，可以針對我們交付的產(chǎn)品，做以下幾個方面的檢測：
根據(jù)老師的樣本信息藕届，選擇3-5個低拷貝的基因挪蹭，設(shè)計合成引物，以我們提供的文庫質(zhì)粒為模板休偶，進行PCR擴增梁厉，如果低拷貝的基因都能擴增出來，高拷貝的就不會丟失踏兜，文庫質(zhì)量即可以判斷為合格词顾。
※ 對于我們提供的大腸桿菌文庫甘油菌八秃，可以進行梯度稀釋后鋪板培養(yǎng)，第二天計算庫容量肉盹，同時挑取單克隆進行PCR擴增和測序檢測昔驱，以判斷插入片段長度和空載率。
9.4.如何評價文庫質(zhì)量垮媒？
※ 文庫質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)舍悯，主要是文庫庫容航棱、空載率及插入片段平均長度睡雇。
※ 文庫的原始庫容肯定是越高越好，我們公司承諾的是大于1*10^7的庫容量饮醇，這個是原始庫容量它抱，也就是沒有經(jīng)過任何擴增過程，直接轉(zhuǎn)化出來的庫容量朴艰。比其他公司承諾的1*10^6的庫容量要高10倍以上观蓄，下面詳細解釋下庫容量的高低對文庫質(zhì)量的影響:
※ 生物樣本，除了低等生物祠墅，目前研究比較多的物種侮穿，比如人，大鼠毁嗦，小鼠亲茅，其基因數(shù)在5*10^4左右，文庫至少得100倍覆蓋狗准，也就是庫容至少需要5*10^6以上克锣。
※ 對于植物樣本，其基因數(shù)量比人的大很多腔长，比如水稻樣本袭祟，其基因數(shù)量為人的2-3倍，小麥樣本捞附，其基因數(shù)量為人的5-6倍巾乳，這樣就需要更多的文庫庫容量。對于水稻樣本鸟召，需要覆蓋100倍的基因數(shù)胆绊，要求的文庫原始庫容量是大于1*10^7以上。市場上別的公司提供的文庫最多只能覆蓋10倍左右药版，這么低的覆蓋度辑舷，必然造成大量基因的丟失。
※ 對于有的公司宣傳的槽片，庫容量不是越高越好何缓，這絕對是不負責(zé)任的忽悠肢础，為自己的文庫質(zhì)量不合格找不合理的借口。
※ 對于插入基因長度碌廓，別的公司一般平均長度就在800bp左右传轰，我們公司可以承諾做到1200bp以上，這個差距是巨大的谷婆，下面再? ? 詳細介紹下插入片段長度對文庫質(zhì)量的影響：
※ 一般的一個功能基因慨蛙，其一般長度會在200個氨基酸以上，也就是編碼區(qū)在600bp堿基以上纪挎，裝入文庫的基因期贫，除了編碼區(qū)，還會有5’UTR區(qū)异袄，3‘UTR區(qū)以及polyA區(qū)域通砍，這幾個部分加起來，基因的長度一般至少會在1000bp以上烤蜕。由于文庫是個混合物封孙，會存在競爭性抑制，短的基因過多讽营，勢必會影響長度基因的比例虎忌，以及長的基因的表達豐度。
※ 我們的文庫產(chǎn)品橱鹏，插入片段平均長度會在1200bp以上膜蠢，最短的會在1000bp左右。對于文庫篩選蚀瘸，不是說只要有基因的一個片段就可以了狡蝶，蛋白質(zhì)的功能需要多種因素的參與，如果插入基因過短贮勃，篩選到的結(jié)果只是一個基因片段贪惹，甚至是靠近polyA的一小段基因，這個結(jié)果的可行度在哪里寂嘉？基本都可以認為是假陽性的結(jié)果的奏瞬。
※ 對于有些公司宣稱的，文庫的基因插入片段不是越長越好泉孩，其實是對客戶的極其不負責(zé)任和不合理的忽悠硼端，只是因為自己沒有技術(shù)做到更長的片段長度，而找的理由寓搬。
9.5. Mating和共轉(zhuǎn)兩種篩庫方法哪種好珍昨？
共轉(zhuǎn)和maiting兩種方法，結(jié)果是一樣的，只是一個文庫質(zhì)粒轉(zhuǎn)到酵母細胞的方法镣典，對于后續(xù)的文庫篩選沒有任何區(qū)別的兔毙，可以根據(jù)老師的實驗習(xí)慣，自由選擇的兄春。
十澎剥、客戶文章示例
