當(dāng)我們選擇到了適合的感受態(tài)細(xì)胞裁着,我們又怎么使用轉(zhuǎn)化它呢?
轉(zhuǎn)化是指某一基因型的細(xì)胞從周圍介質(zhì)中吸收來自另一基因型的細(xì)胞DNA拱她,而使它的基因型和表現(xiàn)型發(fā)生相應(yīng)變化的現(xiàn)象二驰。細(xì)菌細(xì)胞轉(zhuǎn)化是非常常見且簡單的分子實(shí)驗(yàn),除了最傳統(tǒng)的化學(xué)轉(zhuǎn)化外秉沼,還有電穿孔轉(zhuǎn)化的方法桶雀。
一、電轉(zhuǎn)化
電轉(zhuǎn)化原理十分簡單唬复,當(dāng)電流穿過細(xì)胞的時(shí)候矗积,會(huì)在細(xì)胞膜上形成臨時(shí)的孔洞,那么攜帶負(fù)電的質(zhì)粒DNA在這個(gè)電勢場中會(huì)被移動(dòng)敞咧,而后恰好穿過孔洞棘捣,進(jìn)入細(xì)胞。這個(gè)過程和電泳類似休建,DNA分子移動(dòng)來移動(dòng)去乍恐,最后掉進(jìn)了細(xì)胞里。
二测砂、化學(xué)轉(zhuǎn)化
正常的大腸桿菌細(xì)胞與CaCl2 溶液混合后茵烈,許許多多的Ca2+(鈣離子)附著在細(xì)胞膜表面,帶正電的鈣離子們有助于引導(dǎo)和輔助帶負(fù)電的DNA質(zhì)粒與細(xì)胞膜結(jié)合邑彪。當(dāng)質(zhì)粒DNA穿膜進(jìn)入細(xì)胞的時(shí)候瞧毙,正電鈣離子也很好的掩蓋了DNA的負(fù)電性,使得通過憎水性磷脂層的過程更加容易寄症。使質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞的方法是短暫42°C的熱擊宙彪。