學(xué)習(xí)內(nèi)容:
- 一代、二代原环、三代測序
- 二代測序的大體流程
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NGS組學(xué)都包含哪些分類
原理理解
一代測序(桑格爾-雙脫氧鏈終止法):利用一種DNA聚合酶來延伸結(jié)合待定序列模板上的引物掸绞,直到參入一種鏈終止核苷酸為止昵宇,反應(yīng)體系1-4---引物爷光、DNA聚合酶柱徙、四種dNTP雹食。
二代測序(循環(huán)陣列合成測序法):將基因組DNA的隨機(jī)片段附著到光學(xué)透明的玻璃表面(Flowcell)畜普,這些DNA片段經(jīng)過延伸和橋式擴(kuò)增后,在Flow cell上形成數(shù)以億計Cluster群叶,每一個Cluster是具有數(shù)千份相同模板的單分子簇吃挑,然后利用帶熒光基團(tuán)的四種特殊脫氧核糖核苷酸,通過可逆性終止的邊合成邊測序技術(shù)對待測的模板DNA進(jìn)行測序街立。
二代測序流程(illumina測序)
1舶衬、DAN文庫構(gòu)建(sample preparation),利用超聲波把DNA樣本打斷成小片段赎离,小片段兩端加上不同的接頭逛犹,構(gòu)建單鏈DNA文庫。
2、Flowcell, 用于吸附DNA片段的槽道虽画,文庫中的DNA在通過Flowcell的時候會隨機(jī)附著在Flowcell的表面的泳道上舞蔽,泳道表面都附著有很多接頭,能和建庫過程中加載DNA片段的兩端接頭相互配對码撰,并能支持DNA在其表面進(jìn)行橋式PCR擴(kuò)增渗柿。
3、橋式PCR擴(kuò)增與變性脖岛,橋式PCR以Flowcell表面所固定的接頭為模板朵栖,進(jìn)行橋形擴(kuò)增,通過不斷的擴(kuò)增和變性柴梆,最終每個DNA片段都將在各自的位置上集中成束陨溅。
4、測序轩性,邊合成邊測序声登,反應(yīng)體系(DNA聚合酶、接頭引物揣苏、帶有堿基特異熒光標(biāo)記的4種dNTP)悯嗓,收集熒光信號,最后利用計算機(jī)分析將熒光信號轉(zhuǎn)化為測序堿基卸察。
今天學(xué)習(xí)測序相關(guān)的知識脯厨,也是一直想學(xué)的,但是沒有好好認(rèn)真去學(xué)習(xí)的坑质,可能真正理解還需要一些時間合武。