?Western Blot之實(shí)驗(yàn)介紹
? ? ? ?Western Blotting对湃，即免疫印跡，是在蛋白質(zhì)電泳分離和抗原抗體檢測(cè)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)檢測(cè)蛋白質(zhì)的技術(shù)，它結(jié)合了 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳的高分辨率與抗原抗體反應(yīng)的特異性。
? ? ? ?其基本原理是：通過(guò)電泳將蛋白組分分開，然后將電泳后凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至載體膜上溶推，用封閉試劑封閉載體膜上未吸附蛋白質(zhì)的區(qū)域，最后通過(guò)免疫學(xué)檢測(cè)來(lái)分析特定的蛋白質(zhì)表達(dá)水平奸攻。
? ? ? ?免疫印跡克服了聚丙烯酰胺凝膠電泳后直接在凝膠上進(jìn)行免疫學(xué)分析的弊端蒜危， 極大地提高了其分辨率和靈敏度，廣泛地應(yīng)用于檢測(cè)特定基因表達(dá)產(chǎn)物的正確性睹耐，或者比較表達(dá)產(chǎn)物的相對(duì)變化量辐赞。
Western Bolt之實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
? ? ? ?實(shí)驗(yàn)開始前，需準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需的各種試劑和耗材硝训，主要包括：各種凝膠配置液响委、各種緩沖液新思、相關(guān)抗體、PVDF 膜赘风，賽默飛公司的 QSP 盒裝吸頭及 Nunc冰盒夹囚，芬蘭百得的各個(gè)量程單通道移液器等。
? ? ? ?主要儀器有：Thermo Scientific 全波長(zhǎng)掃描式多功能讀數(shù)儀邀窃、離心機(jī)荸哟、電泳儀等。
? ? ? ? 接下來(lái)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)部分瞬捕，本實(shí)驗(yàn)操作流程為：首先制備蛋白樣品鞍历，然后進(jìn)行SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳，將電泳后凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至 PVDF 膜上肪虎，接著對(duì)含有蛋白質(zhì)的 PVDF 膜進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)劣砍，X-膠片顯影定影后，掃描圖片扇救，最后用 IPWIN6.0 軟件分析結(jié)果刑枝。
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