細(xì)胞培養(yǎng)基（cell culture medium）是人工模擬動物細(xì)胞的體內(nèi)生長環(huán)境，維持體外細(xì)胞存活和增殖的營養(yǎng)物質(zhì)基礎(chǔ)处坪，其主要功能是為細(xì)胞提供適宜的pH和滲透壓避乏，以及細(xì)胞本身不能合成的各種營養(yǎng)物質(zhì)谅阿。是細(xì)胞培養(yǎng)中不可缺少的營養(yǎng)成分销凑，但是最基礎(chǔ)的培養(yǎng)基卻給實驗者帶來了一系列的問題。
1.怎樣查一個特定細(xì)胞株的相關(guān)知識和培養(yǎng)條件渺绒？
ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料贺喝。打開ATCC網(wǎng)頁的Cells and hybridomas鏈接，輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫宗兼。數(shù)據(jù)庫中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述躏鱼，包括細(xì)胞的來源，培養(yǎng)和凍存條件针炉，以及相關(guān)文獻(xiàn)等資料挠他。
2.如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？
培養(yǎng)某類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件篡帕。MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞殖侵，很可能在DMEM或M199中同樣容易生長×眨總之拢军，首選MEM、DMEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng)怔鳖；RPMI1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)茉唉；新的細(xì)胞培養(yǎng)時要詳查資料。
3.新配制的液體培養(yǎng)基能保存多久？
我們建議將新配制的培養(yǎng)基放置于4℃度陆，避光保存盡量在一周內(nèi)使用完畢艾凯。培養(yǎng)基越新鮮越好。
4.培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后懂傀，可長期保存嗎趾诗？
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在一到兩周內(nèi)使用它蹬蚁。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解恃泪。
5.培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？
除了特殊篩選系統(tǒng)外犀斋，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下贝乎，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。
為防止細(xì)菌叽粹、真菌污染览效，可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液，其培養(yǎng)基中的濃度為青霉素100U/ml球榆，鏈霉素為100ug/ml朽肥。?
6.培養(yǎng)基可以放-20℃保存嗎禁筏？
不可以持钉！因為在-20℃下，培養(yǎng)基中的鹽容易析出篱昔，培養(yǎng)基融化后每强，有的鹽可能無法重新溶解，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基滲透壓降低州刽，培養(yǎng)細(xì)胞時空执，細(xì)胞容易破裂而死亡。
7.為何培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中穗椅，顏色會偏暗紅色辨绊，且pH值越來越偏堿性？
培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中匹表，?培養(yǎng)基內(nèi)之CO?會逐漸溢出门坷，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red)?的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅袍镀。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果默蚌，?將造成細(xì)胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時苇羡，?可以通入無菌過濾之CO?绸吸，?以調(diào)整pH 值。
8.為什么購買的液體培養(yǎng)基1640顏色發(fā)黃，是pH值不對嗎锦茁？
不是攘轩。因為配方原因，1640為堿酚紅型码俩，其中酚紅的濃度只有DMEM的四分之一撑刺，所以是因為酚紅濃度低，而非PH值低握玛。
9.培養(yǎng)液pH是怎樣影響細(xì)胞生長的够傍？
由于大多數(shù)細(xì)胞適宜PH值為7.2-7.4，偏離此范圍對細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響挠铲。各種細(xì)胞對PH值要求也不完全相同冕屯，原代細(xì)胞培養(yǎng)一般對PH值變動耐受差，無限細(xì)胞系耐受力強拂苹。?但總體來說安聘，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環(huán)境中更有利于細(xì)胞的生長瓢棒。因此浴韭，配制培養(yǎng)用液時可把液體的PH值稍微調(diào)的偏酸一些。液體在經(jīng)過0.1um或0.2um濾膜過濾時脯宿，PH值會向上浮動0.2左右念颈。
10.培養(yǎng)液滲透壓是怎樣影響細(xì)胞生長的？
當(dāng)細(xì)胞內(nèi)连霉、外環(huán)境的分子濃度不同時就會產(chǎn)生滲透壓榴芳。這種情況下，水分通過滲透流入或流出細(xì)胞跺撼，從而改變細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境窟感。高滲透壓迫使水分從細(xì)胞中擴散出來導(dǎo)致細(xì)胞收縮，這種情況會使DNA和蛋白遭到破壞歉井，細(xì)胞周期停滯以及最終使細(xì)胞死亡柿祈；反之，低滲透壓使水分流入細(xì)胞內(nèi)哩至，使細(xì)胞腫脹破裂躏嚎。
11.為什么有客戶要求培養(yǎng)基中不含酚紅？
研究表明憨募，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）紧索。為避免固醇類反應(yīng)，細(xì)胞培養(yǎng)菜谣，尤其是哺乳類細(xì)胞時珠漂，用不加酚紅的培養(yǎng)基晚缩。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時媳危，不使用加酚紅的培養(yǎng)基荞彼。
12.酚紅的作用是什么？
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值指示劑：中性時為紅色待笑，酸性時為黃色鸣皂，堿性時為紫色。
13.干粉培養(yǎng)基里含NaHCO3嗎暮蹂？
所有的干粉培養(yǎng)基中都不含NaHCO3 寞缝。請依據(jù)說明書或包裝袋上的標(biāo)注，在干粉培養(yǎng)基完全溶解后添加NaHCO3 仰泻。
14.NaHCO3的作用是什么荆陆？
與CO?一起形成緩沖系統(tǒng)，保持培養(yǎng)基PH值穩(wěn)定集侯。
15. 實驗室培養(yǎng)箱CO?濃度一直以來都是5%被啼，這樣可以嗎？
不可以棠枉，不同的培養(yǎng)基要求添加NaHCO3的量不一樣浓体，如DMEM要求添加3.7g/L，為了保持PH值穩(wěn)定辈讶，必須用高濃度的CO?平衡命浴，一般不低于8%，而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L荞估，還有些培養(yǎng)基要求添加更少咳促，那么這些培養(yǎng)基就要求較低的濃度平衡，一般是5%勘伺。
16.培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？
丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源褂删，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源飞醉，但是如果沒有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉屯阀。丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM缅帘，-20℃保存，培養(yǎng)基中的終濃度為1mM.
17.谷氨酰胺的作用是什么难衰？
幾乎所有的細(xì)胞對谷氨酰胺都有較高的要求钦无。谷氨酰胺脫掉氨基后，可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源盖袭，參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝失暂。在缺少谷氨酰胺時彼宠，細(xì)胞生長不良而死亡。所以弟塞，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺凭峡。
谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20℃冰凍保存决记，用前加入培養(yǎng)基中摧冀。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲存兩周以上時，應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺系宫。
18.在培養(yǎng)基中加入HEPES有何好處索昂？
培養(yǎng)基中最常用的Buffer system是碳酸氫鹽，它可提供營養(yǎng)扩借，但卻在生理PH值條件下會降低緩沖能力楼镐。而HEPES是一種很強的Buffer，加入HEPES能使細(xì)胞培養(yǎng)基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強往枷。
Hepes的貯存液濃度一般為1M框产，常溫保存。培養(yǎng)基中的終濃度為25mM错洁，即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培養(yǎng)基中秉宿。
19.GlutaMAX-Ⅰ是什么？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ屯碴？這個二肽有多穩(wěn)定描睦？
GlutaMAX-Ⅰ是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的a-氨基用L-丙氨酸來保護(hù)导而。一種肽酶逐漸裂解二肽忱叭，釋放L-谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-Ⅰ二肽非常穩(wěn)定今艺，即使在121℃滅菌20min韵丑， GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最小的降解；而在相同條件下虚缎，L-谷氨酰胺幾乎完全降解撵彻。
?L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時是重要的，但其在溶液中不穩(wěn)定实牡，經(jīng)過一段時間后會降解陌僵，確切的降解率一直沒有最終確定。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成创坞，而氨對于一些細(xì)胞具有毒性碗短。因此GlutaMAX-Ⅰ是細(xì)胞培養(yǎng)中谷氨酰胺的替代品。
20.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基题涨？
不能偎谁。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基总滩，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基，細(xì)胞大多無法立即適應(yīng)搭盾，造成細(xì)胞無法存活咳秉。
