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文章：FAF1 Regulates Antiviral Immunity by Inhibiting MAVS but is Antagonized by Phosphorylation upon Viral Infection.
期刊：《Cell Host Microbe》
影響因子：17.872
該文章研究的是支架蛋白（FAF1）與線粒體抗病毒信號蛋白（MAVS）和抗病毒免疫之間的聯(lián)系，我們來看文章的具體內(nèi)容：
1 索守、首先作者通過質(zhì)譜（MS）分析將FAF1鑒定為MAVS相關(guān)蛋白晕窑，利用免疫共沉淀來驗(yàn)證FAF1和MAVS之間的相互作用關(guān)系。
通過將FAF1蛋白的結(jié)構(gòu)域（C末端的UBX結(jié)構(gòu)域蕾盯、N末端的UBA結(jié)構(gòu)域和或泛素樣結(jié)構(gòu)域）敲除，探究FAF1與MAVS的作用位點(diǎn)蓝丙，結(jié)果表明FAF1與MAVS結(jié)合不需要UBA和UBX結(jié)構(gòu)域级遭，而UBL結(jié)構(gòu)域的喪失完全消除了FAF1與MAVS的相互作用。
接著經(jīng)SeV病毒處理后渺尘，細(xì)胞內(nèi)FAF1聚集體和FAF1蛋白的總水平顯著下降挫鸽，表明FAF1的聚集體結(jié)合并拮抗線粒體上的MAVS，其可以通過病毒感染而減弱鸥跟。
【這些結(jié)果表明丢郊，通過其UBL結(jié)構(gòu)域，F(xiàn)AF1形成大的SDS抗性復(fù)合物医咨，可與MAVS結(jié)合并抑制先天抗病毒免疫】
2 枫匾、CRISPR-Cas9介導(dǎo)的基因組編輯構(gòu)建Faf1fl/fl小鼠模型（Faf1+/+和Faf1-/-），制備了原代腹膜巨噬細(xì)胞拟淮，并用SeV病毒或VSV刺激它們干茉。
與野生型巨噬細(xì)胞相比，用SeV處理后很泊，在Faf1-/-巨噬細(xì)胞中Ifnb1角虫、Cxcl10和Ccl5基因以及IFN-b蛋白的表達(dá)顯著上調(diào)沾谓。。
經(jīng)VSV感染后戳鹅，與Faf1+/+小鼠相比均驶，F(xiàn)af1-/-小鼠的肺，脾和肝中Ifnb1 mRNA水平和血清中IFN-b蛋白水平顯著增加枫虏，而VSV特異性mRNA妇穴、VSV-G蛋白表達(dá)和VSV滴度則顯著下降，表明Faf1-/-小鼠對VSV感染的抵抗力更強(qiáng)模软。伟骨。
為了說明FAF1對先天抗病毒免疫的影響，作者通過用LysM-Cre小鼠繁殖Faf1 floxed（Faf1fl / fl）小鼠來條件性消除巨噬細(xì)胞中的FAF1燃异。結(jié)果表明Faf1fl/fl?Lyz-2-Cre+巨噬細(xì)胞中VSV-G蛋白和病毒滴度遠(yuǎn)低于野生型巨噬細(xì)胞携狭。其他與前文Faf1-/-小鼠結(jié)果一致。
【這些體內(nèi)數(shù)據(jù)表明FAF1是針對RNA病毒的抗病毒免疫應(yīng)答的重要負(fù)調(diào)節(jié)物】
3 回俐、作者進(jìn)一步研究了FAF1抑制先天免疫的機(jī)制逛腿。
FAF1 WT的過表達(dá)，可以抑制Faf1-/-細(xì)胞中IFN-b蛋白的上調(diào)仅颇。除此之外单默，MAVS下游的關(guān)鍵病毒誘導(dǎo)的分子事件（TBK1和IRF3磷酸化和IRF3二聚體形成）在Faf1-/-型巨噬細(xì)胞中都被加強(qiáng)，并且在異位表達(dá)FAF1的細(xì)胞中被抑制忘瓦。所有這些結(jié)果都表明FAF1通過MAVS水平的干擾抑制IFN-b信號傳導(dǎo)搁廓。。耕皮。
接下來分析了FAF1對MAVS與RIG-1和TRIM31之間結(jié)合的影響境蜕，發(fā)現(xiàn)FAF1對RIG-1和MAVS之間結(jié)合的影響，但是MAVS和TRIM31之間的結(jié)合降低凌停。Sev病毒感染的時程分析顯示MAVS和FAF1之間相互作用的減少伴隨著MAVS與TRIM31結(jié)合的增加粱年，表明這些事件是偶聯(lián)的。罚拟。
此外台诗，F(xiàn)AF1對MAVS和TRIM31之間相互作用的抑制作用表明FAF1通過TRIM31干擾MAVS的賴氨酸63-連接的多泛素化。缺乏FAF1的MEF顯示SeV感染后MAVS的賴氨酸63多聚泛素化增加赐俗。
【這些結(jié)果表明FAF1通過破壞病毒誘導(dǎo)的TRIM31和K63連接的多泛素化結(jié)合來抑制MAVS水平的先天免疫信號傳導(dǎo)】
4拉队、 接下來作者發(fā)現(xiàn)MAVS的聚集被FAF1 WT，d_UBA或d_UBX的異位表達(dá)抑制阻逮，而不是通過FAF1 d_UBL抑制氏仗。此外，在病毒感染后，與Faf1+/+?MEF和Faf1fl/fl?Lyz2-Cre-相比皆尔，F(xiàn)af1-/- MEFs和Faf1fl/fl Lyz2-Cre+巨噬細(xì)胞顯示出內(nèi)源性MAVS的聚集增加呐舔。
此外，SeV病毒感染顯著降低了FAF1表達(dá)慷蠕，并將MAVS和TRAF2/6從低分子量片段轉(zhuǎn)移至高分子量片段聚集珊拼，以及Faf1-/-巨噬細(xì)胞裂解物中的MAVS和TRAF2/6蛋白更大程度上聚集在高分子片段中。流炕。
與此相符澎现，SeV病毒感染后，F(xiàn)af1-/-巨噬細(xì)胞中Il-6每辟，Tnf-a剑辫，Il-1b和Nos2的分泌顯著升高。
【所有這些表明FAF1抑制MAVS介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)】
5 渠欺、作者進(jìn)一步研究了病毒感染后FAF1蛋白水平降低的機(jī)制妹蔽。
作者發(fā)現(xiàn)溶酶體抑制劑（NH4Cl或氯喹）抵消了FAF1的減少，而MG132或lactasystin的蛋白酶體抑制則沒有挠将。在免疫熒光分析中也顯示出同樣的結(jié)果胳岂。。
【這些結(jié)果表明FAF1靶向病毒感染后的溶酶體降解】
接著通過CRISPR/Cas9技術(shù)分析了TBK1和/或IKBKE（編碼IKK?）中單或雙缺陷的HEK293T細(xì)胞中FAF1的表達(dá)舔稀。結(jié)果發(fā)現(xiàn)IKK?的缺失完全阻止了由SeV感染引起的FAF1的降解乳丰。。
【這些數(shù)據(jù)一起表明病毒感染可以通過IKK?介導(dǎo)的磷酸化誘導(dǎo)FAF1的溶酶體降解】
隨后利用質(zhì)譜分析了IKK?靶向的特異性磷酸化位點(diǎn)内贮，發(fā)現(xiàn)Ser556是IKK?誘導(dǎo)遷移變化的最關(guān)鍵殘基产园。。此外夜郁，F(xiàn)AF1突變體S556A顯著地抑制了MAVS和IKK?誘導(dǎo)的IFN-b啟動子活性什燕。。
接著通過敲除IKK?來驗(yàn)證Ser556是否為特異性磷酸位點(diǎn)拂酣，結(jié)果發(fā)現(xiàn)敲除IKK?完全阻斷由SeV或VSV感染引起的FAF1的Ser556磷酸化秋冰。仲义。
【這些結(jié)果表明內(nèi)源性IKK?在體內(nèi)介導(dǎo)SeV誘導(dǎo)的Ser556處FAF1的磷酸化】
6 婶熬、然后進(jìn)一步研究了IKK?介導(dǎo)的Ser556磷酸化的具體機(jī)制。
通過質(zhì)譜分析顯示Lys139埃撵，Lys143赵颅，Lys146和Lys221在IKK?共表達(dá)時作為特異性乙酰化位點(diǎn)暂刘，并且所有這些賴氨酸殘基位于FAF1 UBL結(jié)構(gòu)域中饺谬，暗示IKK ?介導(dǎo)的Ser556磷酸化可能在UBL結(jié)構(gòu)域中觸發(fā)FAF1乙酰化。
為了進(jìn)一步檢查UBL乙跄颊化是否依賴于Ser556磷酸化族展，作者通過在不存在或存在4KR突變（S556D / 4KR）的情況下將Ser556突變?yōu)锳sp（S556D）來構(gòu)建磷模擬構(gòu)建體。結(jié)果表明S556D突變體聚集顯著降低拔鹰，但是同時突變UBL結(jié)構(gòu)域中的四個賴氨酸乙跻歉祝化位點(diǎn)可以改善這一現(xiàn)象。
【IKK?介導(dǎo)的Ser556磷酸化通過誘導(dǎo)FAF1的UBL結(jié)構(gòu)域中四個特定賴氨酸殘基的乙趿兄化而不是阻斷FAF1-MAVS相互作用來促進(jìn)FAF1去聚集恰画。】
好了瓷马，文章就到這結(jié)束了拴还，做個總結(jié)：
1>?FAF1形成負(fù)調(diào)節(jié)MAVS和先天抗病毒免疫應(yīng)答的聚集體；
2>?FAF1破壞MAVS和TRIM31之間的關(guān)聯(lián)以抑制MAVS活化欧聘；
3>?FAF1聚集取決于抑制MAVS所需的UBL結(jié)構(gòu)域片林；
4>?活化的IKK?在Ser556處磷酸化FAF1，其使FAF1解聚并降解树瞭。
總的來說就是：FAF1形成聚集體并抑制賴氨酸63-連接的多泛素化和MAVS聚集拇厢，從而抑制先天抗病毒免疫。然而晒喷，在病毒感染后孝偎，F(xiàn)AF1被IKK?直接磷酸化，阻止其聚集并因此激活抗病毒免疫凉敲。
文章中涉及到的實(shí)驗(yàn)技術(shù)很全面（包括質(zhì)譜分析衣盾、CRISPR-Cas9基因編輯、免疫熒光爷抓、半變性瓊脂糖凝膠電泳势决、Faf1fl/fl小鼠模型構(gòu)建等），可以說是環(huán)環(huán)相扣蓝撇，引人入勝果复。當(dāng)初小博看的時候是根本停不下來。各位看官渤昌，有什么想法歡迎評論下方留言溝通哦Ｋ涑！独柑！
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