人胚腎細(xì)胞293 [HEK-293]細(xì)胞是經(jīng)人腺病毒5（Ad5）轉(zhuǎn)染而形成的人胚腎細(xì)胞永生化細(xì)胞系十拣，293細(xì)胞包含并表達(dá)轉(zhuǎn)染的Ad5基因叙身。
人胚腎細(xì)胞293T細(xì)胞是293 [HEK-293]細(xì)胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株渔扎，廣泛用于病毒包裝。其有多種衍生株信轿，比如HEK293晃痴，293T/17等，來(lái)源都是人胚胎腎細(xì)胞财忽，其極少表達(dá)細(xì)胞外配體所需的內(nèi)生受體倘核，且比較容易轉(zhuǎn)染，是一個(gè)很常用的表達(dá)研究外源基因的細(xì)胞株即彪。
人胚腎 293 (HEK 293) 細(xì)胞是生物技術(shù)和研究中常用的細(xì)胞系之一紧唱。由于 HEK 293 細(xì)胞具有較高的生長(zhǎng)效率，通常生成用于生物醫(yī)學(xué)和藥物研究的外源性蛋白質(zhì)。HEK 293細(xì)胞 也會(huì)被用于各種轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中漏益。
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%P/S
配套培養(yǎng)基貨號(hào)：TCH-G101
傳代比例：1:4-1:8蛹锰，每2-3天換液一次
傳代周期：24-48 h
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃
凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO遭庶，液氮儲(chǔ)存
推薦海星Hycyte??一步凍存液（即用型宁仔、無(wú)血清、無(wú)需程序降溫）
293T細(xì)胞特性
細(xì)胞貼壁性較差
對(duì)貼壁因子很有要求峦睡，最好進(jìn)行包被翎苫；也可以提高血清比例來(lái)嘗試觀察一下；注意板材的親水性榨了，細(xì)胞貼壁疏松煎谍，可只用EDTA消化，不要用胰蛋白酶過(guò)度消化龙屉。
增殖迅速呐粘，倍增時(shí)間約為20h
細(xì)胞增殖非常快转捕，通常倍增時(shí)間不到一天作岖，隔天即可長(zhǎng)滿，融合率不可過(guò)高五芝，需要及時(shí)傳代痘儡。
細(xì)胞容易聚團(tuán)
293T細(xì)胞培養(yǎng)要點(diǎn)
1. 細(xì)胞貼壁性較差，容易飄起來(lái)枢步，37℃靜置可重新貼壁沉删。換液時(shí)注意不要用力搖晃培養(yǎng)瓶，否則有可能會(huì)把細(xì)胞搖下來(lái)醉途。
2. 細(xì)胞容易消化矾瑰，消化下來(lái)的細(xì)胞容易成團(tuán)，要吹打吹散隘擎。否則傳代后細(xì)胞會(huì)成團(tuán)生長(zhǎng)殴穴，不均勻，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果嵌屎。
3. 當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合率達(dá)到80~90%需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代操作推正，以擴(kuò)大細(xì)胞數(shù)量，維持細(xì)胞良好的生長(zhǎng)狀態(tài)宝惰。
4. 隨著傳代的次數(shù)增加植榕，293T細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)狀態(tài)下降，出現(xiàn)突變等情況尼夺。所以要在細(xì)胞購(gòu)進(jìn)時(shí)就進(jìn)行大量?jī)龃孀鸩校员ＷC實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和持續(xù)性炒瘸。
293T細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題與解決辦法
細(xì)胞聚團(tuán)嚴(yán)重
1.為啥293T細(xì)胞傳代后聚團(tuán)嚴(yán)重？
原因推斷：胰酶消化操作不當(dāng)導(dǎo)致細(xì)胞聚團(tuán)寝衫。
● 消化過(guò)度或吹打過(guò)猛導(dǎo)致細(xì)胞受傷嚴(yán)重顷扩，破損的細(xì)胞碎片容易粘連聚團(tuán)。
● 消化時(shí)細(xì)胞融合率太高慰毅，成片脫落隘截，將不容易被吹散，容易聚團(tuán)汹胃。
● 鑒于該細(xì)胞貼壁疏松婶芭，普通0.25%胰酶消化時(shí)間控制30s-60s；吹打動(dòng)作輕柔着饥，充分分散犀农；細(xì)胞融合率達(dá)到80%-90%即可傳代，不可長(zhǎng)的太滿宰掉。
解決辦法：鑒于該細(xì)胞貼壁疏松呵哨，普通0.25%胰酶消化時(shí)間控制15s-30s；吹打動(dòng)作輕柔轨奄，控制在10-20次孟害；細(xì)胞融合率達(dá)到80%傳代即可傳代，不可長(zhǎng)的太滿挪拟。
2.為啥293T換了血清批次后聚團(tuán)嚴(yán)重纹坐？
原因推斷：血清來(lái)源于動(dòng)物，其組成成分有1000種左右舞丛，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏哪挲g、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件而異果漾。每個(gè)批號(hào)的組分百分比含量都是不固定的球切，所以批間差異是存在的。293T細(xì)胞本身有聚團(tuán)生長(zhǎng)特性绒障，但嚴(yán)重聚團(tuán)可能受到血清里的某些因子刺激吨凑。
解決辦法：先用血清試用裝，試用效果好户辱，可購(gòu)買(mǎi)和血清試用裝批次相同的正裝鸵钝，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對(duì)細(xì)胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達(dá)5年）庐镐。
貼壁性差
1. 為什么用了新批號(hào)的血清恩商，293T細(xì)胞貼壁性變差？
原因推斷：血清存在批間差異必逆，而293T細(xì)胞本身特點(diǎn)就是貼壁性差怠堪，對(duì)不同批次的血清適應(yīng)性不同揽乱，就容易出現(xiàn)貼壁疏松現(xiàn)象。
解決辦法：可適當(dāng)加高血清比例（最高不超過(guò)20%）粟矿；建議試好一個(gè)血清批次多囤一些凰棉，可以避免血清批間差對(duì)細(xì)胞的影響。
2. 為啥293T細(xì)胞從瓶里（例如T25）鋪板到孔里（96孔板）陌粹，貼壁性變差撒犀？
原因推斷：排除掉瓶和孔板本身材質(zhì)或TC（親水處理）處理因素外，293T細(xì)胞貼壁性變差極有可能是因?yàn)榭臻g的隔離導(dǎo)致細(xì)胞自分泌或旁分泌產(chǎn)生的信號(hào)分子濃度太低掏秩，不利于細(xì)胞的貼壁或增殖或舞。
解決辦法：在鋪板前，對(duì)孔板進(jìn)行明膠（BI：01-944）包被哗讥，可有效促進(jìn)細(xì)胞貼壁嚷那。
轉(zhuǎn)染病毒后細(xì)胞凋亡嚴(yán)重
1. 為啥293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染病毒后凋亡嚴(yán)重？
原因推斷：在排查了方法步驟和轉(zhuǎn)染試劑杆煞，依然沒(méi)有改善的情況下魏宽，可排查一下轉(zhuǎn)染前的營(yíng)養(yǎng)體系，尤其是血清批間差帶來(lái)的影響决乎。很多同學(xué)說(shuō)前期培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)正常呀队询，其實(shí)細(xì)胞形態(tài)學(xué)只是鑒別細(xì)胞是否健康的一個(gè)外在指標(biāo)，還要結(jié)合細(xì)胞其它指標(biāo)對(duì)細(xì)胞健康進(jìn)行評(píng)定（比如倍增時(shí)間构诚，存活率）蚌斩。
解決辦法：通過(guò)更換血清批次，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)并觀察轉(zhuǎn)染后的效果范嘱，比較分析出原因送膳。
293T細(xì)胞優(yōu)勢(shì)
1.具有一致的結(jié)果和細(xì)胞具有高度可重復(fù)性
2.可以高效地大量生產(chǎn)重組蛋白，使其成為新藥開(kāi)發(fā)的主流貢獻(xiàn)者丑蛤。
3.可用于穩(wěn)定和瞬時(shí)基因表達(dá)
4.HEK 293 細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)染有明顯的反應(yīng)叠聋，并且可以在轉(zhuǎn)染中使用不同的化學(xué)和物理方法。
