生物信息的傳遞- 從DNA到RNA
轉(zhuǎn)錄是基因表達(dá)的核心步驟
因?yàn)橹挥衜RNA所攜帶的遺傳信息才能被用來(lái)指導(dǎo)蛋白質(zhì)的生物合成虏杰，所以人們一般用U,C,A,G這四種核苷酸的組合來(lái)表示遺傳性狀儡首。
翻譯和轉(zhuǎn)錄的速率基本相等整袁，37℃時(shí)，轉(zhuǎn)錄生成mRNA的速率大約是每分鐘2500個(gè)核苷酸揪垄，即每秒合成14個(gè)密碼子焦影，蛋白質(zhì)合成速率大約是每秒鐘15個(gè)氨基酸优俘。正常情況下，從一個(gè)基因開始表達(dá)到細(xì)胞中出現(xiàn)其mRNA的間隔約為2.5分鐘浊吏，再過(guò)半分鐘左右就能在細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)到相應(yīng)的蛋白質(zhì)而昨。
我們把與mRNA序列相同的那條DNA鏈稱為編碼鏈(coding strand)或稱有意義鏈(sense strand),并把另一條根據(jù)堿基互補(bǔ)原則指導(dǎo)mRNA合成的DNA鏈稱為模板鏈(template strand)或稱反義鏈(antisence strand)
RNA鏈頻繁發(fā)生自身折疊，在互補(bǔ)序列間形成堿基配對(duì)區(qū)找田，所以盡管RNA是單鏈分子歌憨，它仍然具有大量的雙螺旋結(jié)構(gòu)特征。
除了Watson-Crick配對(duì)的堿基墩衙，RNA中還具有額外的非Waston-Crick配對(duì)堿基务嫡，如G-U配對(duì)，該特征使得RNA鏈自我配對(duì)的能力得到增強(qiáng)漆改，更易形成雙螺旋結(jié)構(gòu)心铃，常常出現(xiàn)局部區(qū)域堿基配對(duì)。雙螺旋RNA的小溝寬而淺挫剑，幾乎沒(méi)有序列特異性信息去扣，大溝狹且深，使得與其相互作用的蛋白質(zhì)氨基酸側(cè)鏈難以接近它樊破，因此RNA不適合與蛋白質(zhì)進(jìn)行序列特異性的相互作用愉棱，雖然有一些蛋白質(zhì)可以序列特異性方式結(jié)合在RNA上。
因?yàn)镽NA沒(méi)有形成長(zhǎng)的規(guī)則雙螺旋的限制哲戚，常常形成大量的三級(jí)結(jié)構(gòu)奔滑。由于RNA骨架上未配對(duì)的區(qū)域可以不受限制地自由旋轉(zhuǎn)，所以堿基和核糖磷酸骨架之間的非常規(guī)相互作用使RNA常常折疊成包括不規(guī)則的堿基配對(duì)的復(fù)雜三級(jí)結(jié)構(gòu)顺少，如tRNA中的三堿基配對(duì)以及堿基與骨架的相互作用朋其。利用RNA結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性王浴，研究者可以通過(guò)構(gòu)建含有隨機(jī)序列的RNA文庫(kù)篩選到與特定小分子，多肽等具有高親和力的RNA令宿。RNA各組分在細(xì)胞中的分布見下表：
作為功能分子，RNA在以下幾個(gè)方面發(fā)揮重要的作用：1腕窥，作為細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)生物合成的主要參與者粒没。2，部分RNA可以作為核酶在細(xì)胞中催化一些重要的反應(yīng)簇爆，主要作用于初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的剪接加工癞松。3，參與基因表達(dá)調(diào)控與生物生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)入蛆。4响蓉，在某些病毒中，RNA是遺傳物質(zhì)哨毁。
RNA轉(zhuǎn)錄的過(guò)程
RNA轉(zhuǎn)錄以四種三磷酸核苷(NTPs)為原料枫甲。轉(zhuǎn)錄的基本過(guò)程包括：模板識(shí)別，轉(zhuǎn)錄起始扼褪，通過(guò)啟動(dòng)子想幻，及轉(zhuǎn)錄的延伸和終止。
1话浇，模板識(shí)別
模板識(shí)別( template recognition)階段主要指RNA聚合酶與啟動(dòng)子DNA雙鏈相互作用并與之相結(jié)合的過(guò)程脏毯。啟動(dòng)子( promoter)是基因轉(zhuǎn)錄起始所必需的一段DNA序列，是基因表達(dá)調(diào)控的上游順式作用元件之一幔崖。
真核細(xì)胞中模板識(shí)別與原核細(xì)胞有所不同食店。真核生物RNA聚合酶不能直接識(shí)別基因的啟動(dòng)子區(qū)，所以赏寇，需要被稱為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的輔助蛋白質(zhì)按特定順序結(jié)合于啟動(dòng)子上吉嫩，RNA聚合酶才能與之相結(jié)合并形成復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄前起始復(fù)合物( PIC)，以保證有效地起始轉(zhuǎn)錄嗅定。
2率挣，轉(zhuǎn)錄起始，
轉(zhuǎn)錄起始( initiation)不需要引物露戒。RNA聚合酶結(jié)合于啟動(dòng)子上以后椒功，使啟動(dòng)子附近的DNA雙鏈解旋并解鏈，形成轉(zhuǎn)錄泡以促使底物核糖核苷酸與模板DNA的堿基配對(duì)智什。轉(zhuǎn)錄起始就是RNA鏈上第一個(gè)核苷酸鍵的產(chǎn)生动漾。大致分為3個(gè)階段：
? 1，RNA聚合酶全酶對(duì)啟動(dòng)子的識(shí)別荠锭，聚合酶與啟動(dòng)子可逆性結(jié)合形成封閉復(fù)合物( closed complex)旱眯，此時(shí)DNA鏈仍處于雙鏈狀態(tài)。
? 2，伴隨著DNA構(gòu)象上的重大變化删豺，封閉復(fù)合物轉(zhuǎn)變成開放復(fù)合物( open complex),聚合酶全酶所結(jié)合的DNA序列中有一小段雙鏈被解開共虑。對(duì)于強(qiáng)啟動(dòng)子來(lái)說(shuō)，從封閉復(fù)合物到開放復(fù)合物的轉(zhuǎn)變是不可逆的呀页，是快反應(yīng)妈拌。
? 3，開放復(fù)合物與最初的兩個(gè)NTP相結(jié)合并在這兩個(gè)核苷酸之間形成磷酸二脂鍵后轉(zhuǎn)變成包括RNA聚合酶蓬蝶，DNA和新生RNA的三元復(fù)合物( ternary complex)
一般情況下尘分，形成的三元復(fù)合物可以進(jìn)入兩條不同的反應(yīng)途徑：一是合成并釋放2~9個(gè)核苷酸的短RNA轉(zhuǎn)錄物，即所謂的流產(chǎn)式起始丸氛。轉(zhuǎn)錄起始后直到形成9個(gè)核苷酸短鏈的過(guò)程是通過(guò)啟動(dòng)子階段培愁，此時(shí)RNA聚合酶一直處于啟動(dòng)子區(qū)，新生的RNA聚合酶處于啟動(dòng)子區(qū)缓窜，新生RNA鏈與DNA模板鏈的結(jié)合不夠牢固定续，很容易從DNA鏈上掉下來(lái)并導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄重新開始。一旦RNA聚合酶成功地合成9個(gè)以上核苷酸并離開啟動(dòng)子區(qū)禾锤，轉(zhuǎn)錄就進(jìn)入正常的延伸階段香罐。所以通過(guò)啟動(dòng)子的時(shí)間代表一個(gè)啟動(dòng)子的強(qiáng)弱。通過(guò)啟動(dòng)子的時(shí)間越短时肿，表明該基因轉(zhuǎn)錄起始的頻率也越高庇茫。
? 二是RNA聚合酶聚合新生RNA鏈達(dá)到9~10個(gè)核苷酸時(shí)，σ亞基被釋放螃成，轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物通過(guò)上游啟動(dòng)子區(qū)并生成由核心酶旦签，DNA和新生RNA所組成的轉(zhuǎn)錄延伸復(fù)合物。
除了RNA聚合酶之外寸宏，真核生物轉(zhuǎn)錄起始過(guò)程中至少還需要7種輔助因子參與宁炫，這些蛋白輔助因子統(tǒng)稱為轉(zhuǎn)錄因子( transcription factor , TF)。因?yàn)椴簧佥o助因子本身就包含多個(gè)亞基氮凝，所以轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的相對(duì)分子質(zhì)量特別大羔巢。
3，轉(zhuǎn)錄延伸
當(dāng)RNA聚合酶催化新生的RNA鏈的長(zhǎng)度達(dá)到9~10個(gè)核苷酸時(shí)罩阵，σ因子從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的RNA聚合物全酶上脫落下來(lái)竿秆，RNA聚合酶離開啟動(dòng)子，核心酶沿模板DNA鏈移動(dòng)并使新生RNA鏈不斷伸長(zhǎng)的過(guò)程就是轉(zhuǎn)錄的延伸( elongation)稿壁。
4幽钢，轉(zhuǎn)錄終止
當(dāng)RNA鏈延伸到轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)時(shí)，RNA聚合酶不再形成新的磷酸二脂鍵傅是，RNA-DNA雜合物分離匪燕，轉(zhuǎn)錄泡瓦解蕾羊，DNA恢復(fù)成雙鏈狀態(tài)，而RNA聚合酶和RNA鏈都被從模板上釋放出來(lái)帽驯，這就是轉(zhuǎn)錄的終止( termination)
根據(jù)體外實(shí)驗(yàn)中RNA聚合酶是否需要輔助因子參與才能終止RNA鏈膜延伸龟再，可將大腸桿菌中的終止子分為不依賴ρ因子和依賴ρ因子兩大類。1尼变，不依賴ρ因子的終止利凑，在不依賴ρ因子這類終止反應(yīng)中，沒(méi)有任何其他因子參與享甸，核心酶就能終止轉(zhuǎn)錄〗夭辏現(xiàn)已查明梳侨，模板DNA上存在終止轉(zhuǎn)錄的特殊信號(hào)——終止子蛉威，又稱內(nèi)在終止子( intrinsic terminator)，每個(gè)基因或操縱子都有一個(gè)啟動(dòng)子和一個(gè)終止子走哺。內(nèi)在終止子有兩個(gè)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：1蚯嫌，終止位點(diǎn)上游一般存在一個(gè)富含GC堿基的二重對(duì)稱區(qū)，由這段DNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的RNA容易形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)丙躏。2择示，在終止位點(diǎn)前面一段由4~8個(gè)A組成的序列，所以轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的3'端為寡U,這種結(jié)構(gòu)特征的存在決定了轉(zhuǎn)錄的終止晒旅。新生RNA中出現(xiàn)發(fā)夾結(jié)構(gòu)會(huì)導(dǎo)致RNA聚合酶的暫停破壞RNA-DNA雜合鏈5'端的正常結(jié)構(gòu)栅盲。
2，依賴于ρ因子的終止
有些終止位點(diǎn)的DNA缺乏共性废恋，而且不能形成強(qiáng)的發(fā)夾結(jié)構(gòu)谈秫，因而不能誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄的自發(fā)終止。ρ因子是一個(gè)由6個(gè)相同亞基組成的六聚體鱼鼓，它具有NTP酶和解旋酶活性拟烫，能水解各種核苷酸三磷酸，它通過(guò)催化NTP的水解促使新生RNA鏈從三元轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中解離出來(lái)從而終止轉(zhuǎn)錄迄本。ρ因子的作用機(jī)制可用窮追 (hot pursuit)模型來(lái)解釋硕淑。
抗終止：由于不同的生理需求，在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中有時(shí)即使遇到了終止信號(hào)嘉赎，仍然需要繼續(xù)轉(zhuǎn)錄置媳，于是出現(xiàn)了抗終止現(xiàn)象」酰抗轉(zhuǎn)錄終止主要有兩種方式：1半开，破壞終止位點(diǎn)RNA的莖-環(huán)結(jié)構(gòu)? (學(xué)習(xí)完操縱子后回來(lái)再搞清楚這里的問(wèn)題，page80)
2赃份，依賴于蛋白質(zhì)因子的轉(zhuǎn)錄抗終止? λ噬菌體中由N基因編碼產(chǎn)生產(chǎn)生的N蛋白具有抗轉(zhuǎn)錄終止作用寂拆，但是其發(fā)揮功能依賴于宿主產(chǎn)生的NusA奢米、NusB、S10等幾種蛋白質(zhì)纠永，這些蛋白結(jié)合到終止子附近的DNA位點(diǎn)是實(shí)現(xiàn)抗轉(zhuǎn)錄終止的必要條件鬓长。
轉(zhuǎn)錄機(jī)器的主要成分——RNA聚合酶
以DNA序列為模板的RNA聚合酶主要以雙鏈DNA為模板(若以單鏈DNA為模板則活性大大降低)，以4種核苷三磷酸作為活性前體尝江，并以Mg2+/ Mn2+為輔助因子涉波，催化RNA鏈的起始，延伸和終止炭序，它不需要任何引物啤覆，催化生成的產(chǎn)物是與DNA模板鏈相互補(bǔ)的RNA。
原核生物的RNA聚合酶：
大腸桿菌RNA聚合酶首先由2個(gè)α亞基惭聂，一個(gè)β亞基窗声，一個(gè)β'亞基和一個(gè)ω亞基組成核心酶，加上一個(gè)σ亞基后則成為聚合酶全酶? ? ? ( holoenzyme)辜纲，相對(duì)分子質(zhì)量為4.65X10^5笨觅。轉(zhuǎn)錄起始過(guò)程需要全酶，由σ因子辨認(rèn)起始位點(diǎn)耕腾，延長(zhǎng)過(guò)程僅需要核心酶的催化见剩。轉(zhuǎn)錄的真實(shí)性取決于有特異的終轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)。核心酶隨可以合成RNA扫俺，但不能找到模板DNA上的起始位點(diǎn)苍苞。帶有σ因子的全酶才能專一地與DNA上的啟動(dòng)子結(jié)合。
σ因子的作用在于幫助轉(zhuǎn)錄起始狼纬，一旦轉(zhuǎn)錄開始它就脫離了起始復(fù)合物羹呵，而由核心酶負(fù)責(zé)RNA鏈的延伸。
真核生物RNA聚合酶：
真核生物共有3類RNA聚合酶畸颅，其結(jié)構(gòu)比大腸桿菌更復(fù)雜担巩，它們?cè)诩?xì)胞核中的位置不同，負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄的基因不同没炒，對(duì)α-鵝膏蕈堿的敏感性也不同涛癌。
啟動(dòng)子與轉(zhuǎn)錄起始
大腸桿菌RNA聚合酶與啟動(dòng)子的相互作用主要包括啟動(dòng)子區(qū)的識(shí)別，酶與啟動(dòng)子的結(jié)合及σ因子的結(jié)合與解離送火。
啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)構(gòu)：?jiǎn)?dòng)子是一段位于結(jié)構(gòu)基因5'端上游區(qū)的DNA序列拳话，能活化RNA聚合酶，使之與模板DNA準(zhǔn)確地相結(jié)合并具有轉(zhuǎn)錄起始的特異性种吸。
轉(zhuǎn)錄單位( transcription unit)是一段從啟動(dòng)子開始至終止子( terminator)結(jié)束的DNA序列弃衍，RNA聚合酶從轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)開始沿著模板前進(jìn)，直到終止子為止坚俗，轉(zhuǎn)錄出一條RNA鏈镜盯。在細(xì)菌中一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位可以是一個(gè)基因也可以是幾個(gè)基因岸裙。轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)是指與新生RNA鏈第一個(gè)核苷酸相對(duì)應(yīng)DNA鏈上的堿基，通常為一個(gè)嘌呤速缆。常把起點(diǎn)前面降允，即5'末端的序列稱為上游序列(upsteam),而把其后面即3'末端序列稱為下游序列( downstream)。在描述堿基的位置時(shí)艺糜，一般用數(shù)字表示剧董，起點(diǎn)為+1，下游方向依次為+2,+3……等破停，上游方向依次為-1翅楼，-2，-3……等真慢。序列的書寫方向通常是固定的毅臊，使轉(zhuǎn)錄從左(上游)向右(下游)進(jìn)行，mRNA同樣按照5'-->3'方向書寫晤碘。
Pribnow設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)褂微，他把RNA聚合酶全酶與模板DNA結(jié)合后功蜓，用DNase I 水解DNA园爷，然后用酚抽提，沉淀純化DNA后得到一個(gè)被RNA聚合酶保護(hù)的DNA片段式撼。
又有人做了50多個(gè)啟動(dòng)子的序列分析后發(fā)現(xiàn)童社，在被保護(hù)區(qū)內(nèi)有一個(gè)由5個(gè)核苷酸組成的共同序列，是RNA聚合酶的緊密結(jié)合點(diǎn)著隆，現(xiàn)在稱為Pribnow區(qū)(Pribnow box)扰楼，這個(gè)區(qū)的中央大約位于起點(diǎn)上游10bp處，所以又稱為-10區(qū)美浦。
提純被保護(hù)的片段后卻發(fā)現(xiàn)弦赖，RNA聚合酶并不能重新結(jié)合或并不能正確選擇起始點(diǎn)，表明在保護(hù)區(qū)外可能還存在與RNA聚合酶對(duì)啟動(dòng)子的識(shí)別有關(guān)的序列浦辨。果然蹬竖，科學(xué)家不久就從噬菌體的左右啟動(dòng)子和SV40啟動(dòng)子的-35bp附近找到了另一段共同序列：TTGACA。經(jīng)過(guò)數(shù)年努力流酬，分析了46個(gè)大腸桿菌啟動(dòng)子序列以后確證絕大部分啟動(dòng)子都存在這兩端共同序列币厕，即位于-10bp處的TATA區(qū)和-35bp處的TTGACA區(qū)。現(xiàn)已查明芽腾，-10區(qū)的TATA區(qū)和-35位的TTGACA區(qū)是RNA聚合酶與啟動(dòng)子的結(jié)合位點(diǎn)旦装，能與σ因子相互識(shí)別而具有很高的親和力。
啟動(dòng)子區(qū)的識(shí)別：
摊滔，阴绢，店乐，，呻袭，响巢，
在細(xì)菌中常見兩種啟動(dòng)子突變，一種叫下降突變(down mutation)棒妨，如果把Pribnow區(qū)從TATAAT變成AATAAT就會(huì)大大降低其結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄水平踪古；另一種突變叫上升突變? ? (up mutation)，即增加Pribnow區(qū)共同序列的同一性券腔。例如伏穆，在乳糖操縱子的啟動(dòng)中，將Pribnow區(qū)從TATGTT變成TATATT,就會(huì)提高啟動(dòng)子的效率纷纫。
增強(qiáng)子及其功能：
除了啟動(dòng)子以外枕扫，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)還有另一序列與轉(zhuǎn)錄起始有關(guān)。在SV40的轉(zhuǎn)錄單位上發(fā)現(xiàn)它的轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)上游約200bp處有兩段72bp長(zhǎng)的重復(fù)序列辱魁，它們不是啟動(dòng)子的一部分烟瞧，但能增強(qiáng)或促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的起始除去這兩段序列會(huì)大大降低這些基因的轉(zhuǎn)錄水平，若保留其中一段或?qū)⒅〕霾逯罝NA分子的任何部位染簇，就能保持基因的正常轉(zhuǎn)錄参滴。因此，稱這種能強(qiáng)化轉(zhuǎn)錄起始的序列為增強(qiáng)子或強(qiáng)化子(enhancer)锻弓。
無(wú)論把這段72bp序列放在轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)上游1400bp處還是下游3300bp處砾赔，它都有轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)作用。增強(qiáng)子很可能通過(guò)影響染色質(zhì)DNA-蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)或改變超螺旋的密度而改變模板的整體結(jié)構(gòu)青灼，從而使得RNA聚合酶更容易與模板DNA相結(jié)合暴心，起始基因轉(zhuǎn)錄。
增強(qiáng)子具有以下特點(diǎn)：
1杂拨，遠(yuǎn)距離效應(yīng)? 一般位于上游-200bp處专普，但可增強(qiáng)遠(yuǎn)處啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄祥款，即使相距十多個(gè)千堿基對(duì)也能發(fā)揮作用倾剿。
2，無(wú)方向性? 無(wú)論位于靶基因的上游伐坏，下游或內(nèi)部都可發(fā)揮增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄的作用贷币。
3击胜，順式調(diào)節(jié)? 只調(diào)節(jié)位于同一染色體上的靶基因，而對(duì)其他染色體上的基因沒(méi)有作用役纹。
4偶摔，無(wú)物種和基因的特異性? 可以連接到異源基因上發(fā)揮作用。
5促脉，具有組織特異性? SV40的增強(qiáng)子在3T3細(xì)胞中比多瘤病毒的增強(qiáng)子要弱辰斋。
6策州，有相位性? 其作用和DNA的構(gòu)象有關(guān)
7，有的增強(qiáng)子可以對(duì)外部信號(hào)產(chǎn)生反應(yīng)
真核生物啟動(dòng)子對(duì)轉(zhuǎn)錄的影響：
真核基因的啟動(dòng)子在-25~-35區(qū)含有TATA序列宫仗，在-70~-80區(qū)含有CCAAT序列(CAAT區(qū)够挂，CAAT box)，在-80~-100含有GCCACACCC或GGGCGGG序列(GC區(qū)藕夫，GC box)孽糖。習(xí)慣上，將TATA區(qū)上游的保守序列稱為上游啟動(dòng)子元件(upatream promoter element,UPE)或稱上游激活序列(upstream activating sequence毅贮，UAS)
原核和真核生物基因轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)上游區(qū)的結(jié)構(gòu)比較：
TATA區(qū)和上游啟動(dòng)子元件(CAAT區(qū)或GC區(qū))的作用不同办悟。前者主要作用是使轉(zhuǎn)錄精確地起始，如果除去TATA區(qū)或進(jìn)行堿基突變滩褥，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物下降的相對(duì)值不如CAAT區(qū)或GC區(qū)突變后明顯病蛉，但發(fā)現(xiàn)所獲得的RNA產(chǎn)物起始點(diǎn)不固定。研究SV40晚期基因啟動(dòng)子發(fā)現(xiàn)瑰煎，上游激活序列的存在與否铺然，對(duì)該啟動(dòng)子的生物活性有著根本性的影響。若將該基因5'上游-21~-47核苷酸序列切除酒甸，基因完全不表達(dá)魄健。下圖為SV40基因啟動(dòng)子上TATAAA及臨近區(qū)域?qū)蜣D(zhuǎn)錄活性的影響。
CAAT區(qū)和GC區(qū)主要控制轉(zhuǎn)錄起始頻率烘挫，基本不參與起始位點(diǎn)的確定诀艰。CAAT區(qū)對(duì)轉(zhuǎn)錄起始頻率的影響最大柬甥，該區(qū)任一堿基的改變都將極大地影響靶基因的轉(zhuǎn)錄強(qiáng)度饮六，而啟動(dòng)子區(qū)其他序列中一二個(gè)堿基的置換則沒(méi)有太大影響。此外苛蒲，在TATA區(qū)和相鄰的UPE(上面有解釋卤橄，上游啟動(dòng)子元件)之間插入核苷酸也會(huì)使轉(zhuǎn)錄減弱。
研究發(fā)現(xiàn)臂外，真核細(xì)胞中存在大量特異性或組成型表達(dá)的窟扑，能夠與不同基因啟動(dòng)子區(qū)UPE相結(jié)合的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子÷┙。基因轉(zhuǎn)錄實(shí)際上是RNA聚合酶嚎货，轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子和啟動(dòng)子區(qū)各種調(diào)控元件相互作用的結(jié)果。
轉(zhuǎn)錄的抑制
RNA轉(zhuǎn)錄的抑制劑根據(jù)其作用性質(zhì)主要可以分為兩大類：第一類是DNA模板功能抑制劑蔫浆，通過(guò)與DNA結(jié)合而改變模板的功能殖属；第二類是RNA聚合酶的抑制物，它們與RNA聚合酶結(jié)合而抑制其活力瓦盛。
1洗显，DNA模板功能抑制劑
放線菌素D(actinomycin D)是DNA模板功能的抑制物外潜，可與DNA形成非共價(jià)復(fù)合物。還有一些烷化劑
2挠唆，RNA聚合酶抑制劑
利福霉素(rifamycin)处窥，利迪鏈霉素(streptolydigin)和α-鵝膏蕈堿都是RNA聚合酶的抑制物。
原核生物與真核生物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物比較：
1玄组，只有一種RNA聚合酶參與所有類型的原核生物基因轉(zhuǎn)錄滔驾，而真核生物有3種以上的RNA聚合酶來(lái)負(fù)責(zé)不同類型的基因轉(zhuǎn)錄，合成不同類型的俄讹，在細(xì)胞核內(nèi)有不同定位的RNA嵌灰。
2，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物有差別颅悉。原核生物的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物大多數(shù)是編碼序列沽瞭，與蛋白質(zhì)的氨基酸序列呈線性關(guān)系；而真核生物的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物很大剩瓶，含有內(nèi)含子序列驹溃，成熟的mRNA只占初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的一小部分。
3延曙，原核生物的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物幾乎不需要剪接加工豌鹤，就可直接作為成熟的mRNA行使翻譯模板功能；真核生物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物需要經(jīng)過(guò)剪接枝缔，修飾等轉(zhuǎn)錄后加工成熟過(guò)程才能成為成熟的mRNA布疙。
4，原核生物細(xì)胞中愿卸，轉(zhuǎn)錄和翻譯不僅發(fā)生在同一個(gè)細(xì)胞空間里灵临，而且這兩個(gè)過(guò)程幾乎是同步進(jìn)行的，蛋白質(zhì)合成往往在mRNA剛開始轉(zhuǎn)錄時(shí)就被引發(fā)了趴荸。
真核生物mRNA需要經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄后加工儒溉。只有成熟的，相對(duì)分子質(zhì)量明顯變小并經(jīng)化學(xué)修飾的mRNA才能進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)发钝，參與蛋白質(zhì)的合成顿涣。
原核生物常以AUG(有時(shí)GUG,甚至UUG)作為起始密碼子，而真核生物幾乎永遠(yuǎn)以AUG作為起始密碼子酝豪。
原核生物mRNA的特征
1涛碑，原核生物mRNA的半衰期短
當(dāng)一個(gè)mRNA的5'端開始降解時(shí)，其3'端部分有可能仍在合成或被翻譯孵淘。
2蒲障，許多原核生物mRNA可能以多順?lè)醋拥男问酱嬖? 把只編碼一個(gè)蛋白質(zhì)的mRNA稱為單順?lè)醋印０丫幋a多個(gè)，晌涕，滋捶，稱為多順?lè)醋印６囗樂(lè)醋觤RNA是一組相鄰或相互重疊基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物余黎，這樣的一組基因可被稱為一個(gè)操縱子(operon),是生物體內(nèi)的重要遺傳單位重窟，如大腸桿菌乳糖操縱子轉(zhuǎn)錄稱編碼3條多肽的多順?lè)醋觤RNA，經(jīng)過(guò)翻譯生成? β-半乳糖苷酶惧财，透過(guò)酶及乙跹采龋基轉(zhuǎn)移酶。
幾乎所有mRNA都可以被分成3部分：編碼區(qū)和位于AUG之前的5'端上游非編碼區(qū)以及位于終止密碼子以后不翻譯的3'端下游非編碼區(qū)垮衷。對(duì)多順?lè)醋觼?lái)說(shuō)厅翔，后面幾個(gè)順?lè)醋拥姆g起始受上游順?lè)醋咏Y(jié)構(gòu)的調(diào)控。
一種情況是搀突，第一個(gè)蛋白質(zhì)合成終止以后刀闷，核糖體分解成大，小亞基仰迁，脫離mRNA模板甸昏，第二個(gè)蛋白質(zhì)的翻譯必須等到新的小亞基和大亞基與該蛋白質(zhì)起始密碼子相結(jié)合后才能開始。當(dāng)然徐许，前一個(gè)多肽翻譯完成以后施蜜，核糖體大，小亞基分離雌隅，小亞基也可能不離開mRNA模板翻默，而是迅速與游離的大亞基結(jié)合，啟動(dòng)第二個(gè)多肽合成恰起。
3修械，原核生物mRNA的5'端無(wú)帽子結(jié)構(gòu)，3'端沒(méi)有或只有較短的多(A)結(jié)構(gòu)
原核生物起始密碼子AUG上游7~12個(gè)核苷酸處有一被稱為SD序列(ShineDalgarno sequence)的保守區(qū)村缸，因?yàn)樵撔蛄信c16S rRNA 3'端反向互補(bǔ)祠肥，所以被認(rèn)為在核糖體與mRNA的結(jié)合過(guò)程中起作用。如果把16sRNA 3'末端的6個(gè)保守核苷酸反過(guò)來(lái)寫梯皿，則為3'-UCCUCC-5'。所有已知大腸桿菌mRNA的翻譯起始區(qū)都含有4~5個(gè)(至少3個(gè))對(duì)應(yīng)于SD序列的核苷酸县恕。所有已知大腸桿菌mRNA的翻譯起始區(qū)都含有4~5個(gè)(至少3個(gè))對(duì)應(yīng)于SD序列的核苷酸东羹。
細(xì)菌16S rRNA的3'末端既非常保守，又高度自我互補(bǔ)忠烛，能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)属提。與mRNA互補(bǔ)的部分也參與這個(gè)發(fā)夾的形成。表面上看這似乎是一對(duì)矛盾，一個(gè)序列不可能在形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的同時(shí)又與mRNA相結(jié)合冤议。事實(shí)上斟薇，這正好說(shuō)明序列配對(duì)是動(dòng)態(tài)的，可變的恕酸，翻譯起始復(fù)合物的生成很可能包含了rRNA3'末端發(fā)夾結(jié)構(gòu)的改變堪滨。
真核生物mRNA的特征
凡是編碼功能蛋白的真核基因都通過(guò)RNA聚合酶Ⅱ進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，真核基因幾乎都是單順?lè)醋尤镂拢话粋€(gè)蛋白質(zhì)的信息袱箱，其長(zhǎng)度在幾百到幾千個(gè)核苷酸之間。一個(gè)完整的基因义矛，不但包括編碼區(qū)(coding region)发笔，還包括5'和3'端長(zhǎng)度不等的特異序列，它們雖然不編碼氨基酸凉翻，卻在基因表達(dá)的過(guò)程中起著重要作用了讨。所以，基因的分子生物學(xué)定義是：產(chǎn)生一條多肽鏈或功能RNA所必需的全部核苷酸序列制轰。真核生物mRNA結(jié)構(gòu)上最大的特征是5'端的帽子及3'的多A結(jié)構(gòu)量蕊。
1，真核生物mRNA的5'端存在帽子結(jié)構(gòu)
真核生物mRNA(不包括葉綠體和線粒體)5'端都是經(jīng)過(guò)修飾的艇挨，基因轉(zhuǎn)錄一般從嘌呤(主要是A残炮，也可能是G)起始，第一個(gè)核苷酸保留了5'端的三磷酸基團(tuán)并能通過(guò)其3'-OH位與下一個(gè)核苷酸的5'磷酸基團(tuán)形成二脂鍵缩滨，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的起始序列為pppApNpNp……势就。然而，如果在體外用核酸酶處理成熟mRNA脉漏，其5'端并不產(chǎn)生預(yù)期的核苷酸三磷酸苞冯，而產(chǎn)生以5'——>5'三磷酸基團(tuán)相連的二核苷酸，5'終端是一個(gè)在mRNA轉(zhuǎn)錄后加上去的甲基化鳥嘌呤侧巨。
mRNA? 5'端加"G"的反應(yīng)是由鳥苷酸轉(zhuǎn)移酶完成的舅锄，這個(gè)反應(yīng)非常迅速，很難在體外或體內(nèi)測(cè)得5'自由三磷酸基團(tuán)的存在司忱。帽子結(jié)構(gòu)很早就被加上了皇忿。一般認(rèn)為，帽子結(jié)構(gòu)是GTP和原mRNA? 5'三磷酸腺苷(或鳥苷)縮合反應(yīng)的產(chǎn)物坦仍，新加上的G與mRNA鏈上所有其他核苷酸方向正好相反鳍烁，像一頂帽子倒扣在mRNA鏈上，故而得名繁扎。
零號(hào)帽子幔荒，1號(hào)帽子糊闽，2號(hào)帽子。
帽子結(jié)構(gòu)可能使mRNA免遭核酸酶的破壞爹梁。
2右犹，絕大多數(shù)真核生物mRNA具有多A尾巴
除組蛋白基因外，真核生物mRNA的3'末端都有多A序列姚垃，其長(zhǎng)度因mRNA種類不同而變化念链，一般為40~200個(gè)。多A序列是在轉(zhuǎn)錄后加上去的莉炉，可能在細(xì)胞核中核內(nèi)不均一RNA階段就已經(jīng)加上了多A钓账。目前還不清楚RNA聚合酶Ⅱ所轉(zhuǎn)錄基因的精確終止位點(diǎn)，但研究發(fā)現(xiàn)絮宁，幾乎所有真核基因的3'末端轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)上游15~30bp處的保守序列AAUAAA對(duì)于初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的準(zhǔn)確切割及加多A是必需的梆暮。實(shí)驗(yàn)證明，盡管多A位點(diǎn)及AATAAA的存在對(duì)于基因的轉(zhuǎn)錄和成熟意義重大绍昂，但RNA聚合酶Ⅱ卻不在多A位點(diǎn)終止啦粹，而往往繼續(xù)轉(zhuǎn)錄，因此窘游，大部分已知基因的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物擁有多A位點(diǎn)下游0.5~2kb核苷酸序列唠椭。
加多A時(shí)需要由內(nèi)切酶切開mRNA 3'端的特定部位，然后由多A合成酶催化多腺苷酸的反應(yīng)忍饰。如果將上述保守序列切除贪嫂，該基因組合的轉(zhuǎn)錄活性就會(huì)消失。點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)將AAUAAA變?yōu)锳AGAAA,雖然維持了該基因的轉(zhuǎn)錄活性艾蓝，卻發(fā)現(xiàn)mRNA的剪接加工受阻力崇，因而沒(méi)有功能性mRNA產(chǎn)生。
多A是mRNA由細(xì)胞核進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)所必需的形式赢织，它大大提高了mRNA在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的穩(wěn)定性亮靴。當(dāng)mRNA剛從細(xì)胞核進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)時(shí)，其多A尾巴一般比較長(zhǎng)于置，隨著mRNA在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)逗留時(shí)間延長(zhǎng)茧吊，多A逐漸變短消失，mRNA進(jìn)入降解過(guò)程八毯。此外搓侄，翻譯起始因子eIF4F和包繞在多A尾的poly-A尾結(jié)合蛋白之間相互作用使真核mRNA保持環(huán)狀，因而多A還能增強(qiáng)mRNA的可翻譯能力宪彩。
真核生物mRNA大多具有多A尾巴休讳，這一特性被廣泛用于分子克隆。常用寡dT片段與mRNA上多A相匹配尿孔，作為反轉(zhuǎn)錄酶合成第一條cDNA鏈的引物。
盡管大部分真核mRNA有多(A)尾巴，細(xì)胞中仍可有多達(dá)1/3沒(méi)有多(A)的mRNA活合。我們把帶有多(A)的mRNA稱為多(A)+? 雏婶，而把沒(méi)有多(A)的mRNA稱為多(A)-? #多(A)-應(yīng)該位于核內(nèi)吧。
RNA剪接( splicing),內(nèi)含子( intron),外顯子( exon)
真核生物tRNA前體的轉(zhuǎn)錄加工(朱玉賢分子生物學(xué)第四版100頁(yè))
真核生物rRNA前體的轉(zhuǎn)錄后加工(同上)
真核生物mRNA的剪接：
RNA剪接一般有三種(不包括tRNA的加工過(guò)程)：pre-mRNA剪接白指，Ⅰ類和Ⅱ類自剪接內(nèi)含子留晚。
由DNA轉(zhuǎn)錄生成的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物——核內(nèi)不均一RNA( hnRNA)，即mRNA的前體告嘲，經(jīng)過(guò)5'加帽和3'酶切加多腺苷酸错维，再經(jīng)RNA的剪接，編碼蛋白質(zhì)的外顯子部分就連接成為一個(gè)連續(xù)的可讀框( open read frame , ORF),通過(guò)核孔進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)橄唬，就能作為蛋白質(zhì)合成的模板了赋焕。
不同生物細(xì)胞內(nèi)含子的邊界處存在相似的核苷酸序列，表明內(nèi)含子剪接過(guò)程在進(jìn)化上是保守的仰楚，比較同源基因的進(jìn)化過(guò)程發(fā)現(xiàn)內(nèi)含子的異化大于外顯子隆判，特定的內(nèi)含子還可能在進(jìn)化過(guò)程中丟失，因此僧界，內(nèi)含子的"功能"及其在生物進(jìn)化中的地位是一個(gè)引人注目的問(wèn)題侨嘀。另外，許多人類疾病是內(nèi)含子剪接異常引起的捂襟，邊界保守序列突變咬腕。
RNA序列決定了剪接的發(fā)生位點(diǎn)
比較不同基因的核苷酸序列發(fā)現(xiàn)，mRNA前體中內(nèi)含子的兩端邊界存在共同序列葬荷，這些共同序列結(jié)構(gòu)可能是產(chǎn)生mRNA前體剪接的信號(hào)涨共。多數(shù)mRNA前體內(nèi)含子序列5'端邊界序列為GU,3'端邊界序列為AG。把這種保守序列模式稱為GU-AG法則闯狱，又稱為chambon法則煞赢。
除了邊界序列之外，外顯子與內(nèi)含子交界處的序列哄孤，內(nèi)含子內(nèi)部的部分序列也可能參與內(nèi)含子的剪接照筑。在3'端剪接位點(diǎn)AG的附近有一段富含嘧啶的區(qū)域，含有10~20個(gè)嘧啶核苷酸瘦陈，5'端有一保守序列(5'-GUPuAGU-3')? 此外許多發(fā)生分叉剪接的核mRNA內(nèi)含子3'端上游18~50個(gè)核苷酸處凝危，存在一個(gè)序列為Py80NPy75APy95的保守區(qū)，其中A為百分之百保守晨逝，且具有2'-OH蛾默，是參與形成分叉剪接中間物的特定腺嘌呤，稱為分支點(diǎn)捉貌。上述保守序列都是mRNA前體剪接過(guò)程中各種核糖核蛋白剪接調(diào)節(jié)因子的結(jié)合位點(diǎn)支鸡，對(duì)于有效和準(zhǔn)確的剪接非常重要冬念。
RNA剪接中的兩步轉(zhuǎn)酯反應(yīng)
RNA剪接是由兩步轉(zhuǎn)酯反應(yīng)完成的，這兩步轉(zhuǎn)酯反應(yīng)使得mRNA前體中原有的某些磷酸二脂鍵斷開并形成一些新的磷酸二脂鍵牧挣。第一步轉(zhuǎn)酯反應(yīng)是由位于分支位點(diǎn)的保守腺苷酸的2'-OH引發(fā)的急前。它作為親核基團(tuán)攻擊5'剪接位點(diǎn)保守鳥苷酸的磷酰基團(tuán)瀑构。結(jié)果裆针，外顯子3'端的核糖與內(nèi)含子5'端磷酸之間的磷酸二脂鍵被斷開，游離出來(lái)的5'磷酸則與分支點(diǎn)保守腺苷酸的2'-OH連接寺晌。因此世吨，除了5'——>3'骨架磷酸二脂鍵，新的磷酸二脂鍵從保守腺苷酸的2'-OH伸出來(lái)呻征，產(chǎn)生一個(gè)三叉交匯點(diǎn)耘婚。
第二步轉(zhuǎn)酯反應(yīng)中，5'外顯子作為親核基團(tuán)怕犁，攻擊3'剪接位點(diǎn)的磷醣呃海基團(tuán)，導(dǎo)致兩個(gè)結(jié)果：一是把5'和3'外顯子連接起來(lái)了奏甫，二是把內(nèi)含子作為離去基團(tuán)釋放出去戈轿。因?yàn)閮?nèi)含子的5'端已經(jīng)在第一次轉(zhuǎn)酯反應(yīng)中與分支點(diǎn)腺苷酸相連接，所以新釋放出來(lái)的內(nèi)含子形狀像一個(gè)套索( lariat form)阵子。
RNA剪接大多發(fā)生在剪接體上思杯，轉(zhuǎn)酯反應(yīng)是由一個(gè)被稱為剪接體的大型復(fù)合體介導(dǎo)的。這個(gè)復(fù)合物包含約150種蛋白質(zhì)和5種RNA挠进，大小與核糖體差不多色乾。研究表明，許多相對(duì)分子質(zhì)量較小(106~185bp)的核小RNA(smll nuclear RNA, snRNA)以及與這些RNA相結(jié)合的核蛋白(被稱為核小核糖核蛋白顆粒领突，small nuclear ribonucleo-protein particle, snRNPs)參與RNA的剪接暖璧。剪接體中有5種核小RNA(U1,U2,U4,U5, U6)每種長(zhǎng)100~300核苷酸，與幾種蛋白質(zhì)形成復(fù)合物君旦。這些RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物被稱為核小核糖核蛋白(small nuclear ribonuclear protein, snRNP)澎办。剪接體就是由這些snRNP形成的巨型復(fù)合體。但是金砍，每種snRNP執(zhí)行的任務(wù)不同局蚀，因此，在剪接反應(yīng)的不同時(shí)期恕稠，剪接體中含有不同的snRNP琅绅。剪接體中可能還有一些與剪接體松散結(jié)合的不屬于snRNP的蛋白質(zhì)。
snRNP在剪接中的功能如下：1鹅巍，識(shí)別5'剪接位點(diǎn)和分支點(diǎn)千扶。2料祠，按需要把這兩個(gè)位點(diǎn)集結(jié)到一起。3县貌，催化或協(xié)助催化RNA的剪接和連接反應(yīng)术陶。只有參與剪接反應(yīng)的RNA與RNA之間凑懂，蛋白質(zhì)與RNA之間以及蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間具備很好的協(xié)同作用煤痕，才能完成復(fù)雜的剪接反應(yīng)。
剪接過(guò)程如下：
mRNA鏈上每個(gè)內(nèi)含子的5'和3'端分別與不同的snRNA相結(jié)合接谨，形成RNA和RNP復(fù)合物摆碉。
一般情況下，由U1snRNA以堿基互補(bǔ)的方式識(shí)別mRNA前體5'剪接點(diǎn)脓豪，由結(jié)合在3'剪接點(diǎn)上游富嘧啶區(qū)的U2 AF(U2 auxiliary factor)識(shí)別3'剪接并引導(dǎo)U2 snRNP與分支點(diǎn)相結(jié)合巷帝，形成剪接前體(pre-spliceosome)，并進(jìn)一步與U4扫夜，U5, U6-snRNP三聚體相結(jié)合楞泼，形成60S的剪接體，進(jìn)行RNA前體分子的剪接笤闯。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞中堕阔，mRNA前體上的snRNP是從5'向下游"掃描"，選擇在分支點(diǎn)富嘧啶區(qū)3'下游的第一個(gè)AG作為剪接的3'位點(diǎn)颗味。AG前一位核苷酸可以影響剪接效率超陆，一般來(lái)說(shuō)，CAG=UAG>AAG>GAG浦马。如果mRNA前體上同時(shí)存在幾個(gè)AG时呀，可能發(fā)生剪接競(jìng)爭(zhēng)。
RNA可變剪接：
在高等生物中晶默，內(nèi)含子通常是有序或組成型地從mRNA前體中被剪接谨娜，然而，在個(gè)體發(fā)育或細(xì)胞分化時(shí)可以有選擇性地越過(guò)某些外顯子或某個(gè)剪接點(diǎn)進(jìn)行變位剪接磺陡，產(chǎn)生出組織或發(fā)育階段特異性mRNA趴梢，稱為內(nèi)含子的可變剪接或變位剪接，產(chǎn)生出組織或發(fā)育階段特異性的mRNA仅政，稱為內(nèi)含子的可變剪接或變位剪接垢油。如上圖3-29。
Ⅰ類和Ⅱ類自剪接內(nèi)含子
與前面所述的mRNA前體中主要(GU-AG類)和次要( AU-AC類)內(nèi)含子的剪接方式不同的是Ⅰ類圆丹，Ⅱ類自剪接內(nèi)含子滩愁，因?yàn)閹в羞@些內(nèi)含子的RNA本身具有催化活性，能進(jìn)行內(nèi)含子的自我剪接辫封，而無(wú)須借助于形成剪接體硝枉。如下圖總結(jié)了存在于生物體內(nèi)的各種內(nèi)含子廉丽。
1，Ⅰ類自剪接內(nèi)含子? Ⅰ類自剪接內(nèi)含子的剪接主要是轉(zhuǎn)酯反應(yīng)(trans-esterification),即剪接反應(yīng)實(shí)際上是發(fā)生了兩次磷酸二脂鍵的轉(zhuǎn)移妻味。在Ⅰ類自剪接內(nèi)含子切除體系中正压，第一個(gè)轉(zhuǎn)酯反應(yīng)由一個(gè)游離的鳥苷或鳥苷酸( GMP,GDP或GTP)介導(dǎo)，鳥苷或鳥苷酸的? 3'-OH作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子5'端的磷酸二脂鍵责球，從上游切開RNA鏈焦履。在第二個(gè)轉(zhuǎn)酯反應(yīng)中，上游外顯子的自由3'-OH作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子3'位核苷酸上的磷酸二酯鍵使內(nèi)含子被完全切開雏逾，上嘉裤，下游兩個(gè)外顯子通過(guò)新的磷酸二酯鍵相連。Ⅰ類自剪接內(nèi)含子釋放出線性內(nèi)含子栖博，而不是一個(gè)探索狀結(jié)構(gòu)屑宠。
2，Ⅱ類自剪接內(nèi)含子? 這類內(nèi)含子主要存在于真核生物的線粒體和葉綠體rRNA基因中仇让。在Ⅱ類自剪接內(nèi)含子切除體系中典奉，轉(zhuǎn)酯反應(yīng)無(wú)須游離鳥苷酸或鳥苷，而是由內(nèi)含子本身的靠近3'端的腺苷酸2'-OH作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子5'端的磷酸二酯鍵丧叽，從上游切開RNA鏈后形成套索狀結(jié)構(gòu)卫玖。再由上游外顯子的自由3'-OH作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子3'位核苷酸上的磷酸二酯鍵，使內(nèi)含子被完全切開蠢正，上下游外顯子通過(guò)新的磷酸二酯鍵相連骇笔。
Ⅲ類自剪接內(nèi)含子與Ⅱ類相似，只是邊界序列的保守性和次級(jí)結(jié)構(gòu)有所不同嚣崭。
RNA的編輯笨触，再編碼和化學(xué)修飾
RNA的編輯是某些RNA，特別是mRNA前體的一種加工方式雹舀，如插入芦劣，刪除過(guò)取代一些核苷酸殘基，導(dǎo)致DNA所編碼的遺傳信息的改變说榆。介導(dǎo)RNA編輯的機(jī)制有兩種：位點(diǎn)特異性脫氨基作用和引導(dǎo)RNA指導(dǎo)的尿嘧啶插入或刪除虚吟。
RNA的再編碼：
RNA的化學(xué)修飾：
核酶：有催化作用的RNA
