一抡砂、 基本介紹
IGV(Integrative Genomics Viewer)是一款本地即可使用的基因組瀏覽器。支持BAM恬涧、SAM注益、GOBY、VCF溯捆、PSL丑搔、BED、TDF等格式提揍。
目前支持的格式包括:
- 序列比對:bam啤月、cram
- 基因組注釋:bed、gtf劳跃、gff3谎仲、psl、bigbed
- 信號數(shù)據(jù):wig刨仑、bedgraph郑诺、bigwig、tdf
- 拷貝數(shù):seg
二杉武、 使用方法
(1) 安裝IGV
安裝IGV注意事項:不要安裝在有空格的文件夾下辙诞;IGV需要java,可以先安裝java在默認位置轻抱,然后安裝IGV飞涂。
(2) 導入文件
- 導入?yún)⒖蓟蚪Mfa文件(Genomes -> Load Genomes From Files),一定要是fa文件十拣》馀。可能需要索引:samtools faidx input.fa。
- 導入gtf注釋(Tools -> Run igvtools -> commond=sort, input file=gtf, Run ->> File -> Load from file ->> GO-index)夭问。
- 導入bam或bw文件(File -> Load from File)泽西,bam一定要sort,同時在bam文件所在的目錄下一定要有bam文件對應的.bai索引文件缰趋。
- 選擇感興趣的染色體捧杉,或者輸入感興趣的基因組位置(格式:染色體:起始位置-終止位置)。
- 修改顯示格式秘血。在測序深度區(qū)域或者read覆蓋區(qū)域單擊右鍵味抖,會彈出一個下拉菜單。右鍵單擊選擇Save image灰粮。
(3) 查看BAM文件
載入bam文件后會產生3個相關的tracks仔涩,一般情況下,前兩個tracks會自動出現(xiàn)粘舟。這些設置可以通過右鍵進行修改熔脂。
- Alignment track:顯示每個的reads的比對情況佩研。
- Coverage track:顯示覆蓋率和測序深度。
- Splice Junction Track:提供一個可選的橫跨剪切位點(spanning splice junctions)的reads視圖霞揉。
※ Coverage Track:默認情況下旬薯,IGV能動態(tài)計算和顯示比對文件的覆蓋率和測序深度。當IGV窗口放大到reads 可視化閾值大惺手取(默認為30KB)時绊序,這個track會以灰色條形圖顯示每個位點的測序深度。如果某核苷酸與參考序列不同(超過20% reads)時秽荞,IGV會標出不同的顏色骤公。A→綠色;C→藍色蚂会;G→橙色淋样;T→紅色。將鼠標懸停在你需要查看的位點處可以看到詳細的信息胁住,右鍵可以復制趁猴。
※ Alignment Track:當IGV窗口放大到30KB(默認)時,就會顯示出各個reads的情況彪见。當窗口放大到一定程度時儡司,IGV的窗口中心會出現(xiàn)一條線,再繼續(xù)放大余指,中心線會變?yōu)閮蓷l捕犬,剛好可以框住一個堿基。IGV使用reads透明度來表示其質量酵镜〉锏铮灰色表示和參考基因能比對上的reads。注意:那些透明或者白色的reads有著亮灰色邊框的其比對質量(MQ)為0淮韭。
※ 結構變異(Structural Variants):IGV使用顏色和其他的標記來顯示變異垢粮,如SNP、SV靠粪、aneuploidy蜡吧。紫色(I):插入,鼠標懸空在此處能顯示插入的堿基信息占键。黑色橫線(-):缺失昔善。
可通過 View >>Preferences >>Alignments 面板設置相關參數(shù)。默認情況下 Track Alignments 區(qū)以緊湊的單個 reads 的形式展示畔乙,通過 View as pairs 可成對顯示君仆,且中間以細線連接。Sort alignments by 可對Track區(qū)域進行排序,如想返回最初結果則選擇 Re-pack alignments 即可返咱。