1、培養(yǎng)基配方的選定

同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別阳似。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法铐伴，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外撮奏，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料俏讹，加以比較核對，再依據(jù)自己的使用目的畜吊，加以選用泽疆，記錄其來源。

2玲献、培養(yǎng)基的制備記錄

每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄殉疼，包括培養(yǎng)基名稱，配方及其來源捌年，和各種成份的批號瓢娜，最終pH值、消毒的溫度和時間礼预，制備的日期和制備者等恋腕，記錄應(yīng)復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳槟嫒穑瑥?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂伙单。

3获高、培養(yǎng)基成分的稱取

培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂，最好一次完成吻育，不要中斷念秧。可將配方置于傍側(cè)布疼，每稱完一種成分即在配方處做出記號摊趾，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)游两，每種稱取完畢后砾层，即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后贱案，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查肛炮。

4、培養(yǎng)基各成份的混合和溶化

培養(yǎng)基所用化學(xué)試劑均應(yīng)是化學(xué)純的宝踪。使用的滅菌鍋不得為銅鍋或鐵鍋侨糟，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長瘩燥。最好使用不銹鋼鍋加熱溶化秕重，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時厉膀、可先用溫水加熱并隨時擾動溶耘、以防焦化二拐、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用汰具，應(yīng)重新制備卓鹿。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化留荔，直至煮沸吟孙。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分聚蝶，然后將兩溶液充分混合杰妓。在加熱溶化過程中，因蒸發(fā)而丟失的水分碘勉，最后必須加以補(bǔ)足巷挥。

5、培養(yǎng)基pH的初步調(diào)正

因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中验靡、pH會有所變化倍宾，培養(yǎng)基各成分完全溶解后，應(yīng)進(jìn)行PH的初步調(diào)正胜嗓。例如高职，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會有顯著的升高辞州。因此怔锌，對這個步驟，操作者應(yīng)隨時注意探索經(jīng)驗(yàn)变过、以期能掌握培養(yǎng)基的最終PH埃元，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。PH調(diào)整后媚狰，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘岛杀，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。

6崭孤、培養(yǎng)基的過濾澄清

液體培養(yǎng)基必須絕對澄清楞件，瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無顯著沉淀，因此裳瘪，須要采用過濾或其它澄清方法以達(dá)到此項(xiàng)要求土浸。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法，濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形彭羹，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂黄伊。

瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾派殷。新制肉还最、肝墓阀、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去拓轻，再用濾紙反復(fù)過濾斯撮。如過濾法不能達(dá)到澄清要求、則須用蛋清澄清法扶叉。即將冷卻至55~60°C的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶內(nèi)勿锅，裝入量不得超過燒瓶容量的1/2，每1000ml培養(yǎng)基加入1~2個雞蛋的蛋白枣氧，強(qiáng)力振搖3~5分鐘溢十，置高壓蒸汽滅菌器中、121°C加熱20分鐘达吞、取出趁熱以絨布過濾即可张弛。

7、培養(yǎng)基的分裝

培養(yǎng)基的分裝酪劫，應(yīng)按使用的目的和要求吞鸭，分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)覆糟。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3瞒大。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎（現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者）搪桂。分裝時最好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時盯滚，分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為宜踢械。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒，以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌魄藕。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中内列，隨該批培養(yǎng)基同時滅菌，以為測定該批培養(yǎng)基最終pH之用背率。

8话瞧、培養(yǎng)基的滅菌

一般培養(yǎng)基可采用121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種培養(yǎng)基制備方法中寝姿，如無特殊規(guī)定交排，即可用此法滅菌。

某些畏熱成分饵筑，如糖類埃篓，應(yīng)另行配成20%或更高的濃液，以過濾或間歇滅菌法消毒根资，以后再用無菌操作技術(shù)架专、定量加于培養(yǎng)基同窘。明膠培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌。血液部脚、體液和抗生素等則應(yīng)以無菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50°C左右的培養(yǎng)基中想邦。

瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出，冷至55℃-60℃時委刘，擺置成適當(dāng)斜面丧没，待其自然凝固。

9钱雷、培養(yǎng)基的質(zhì)量測試

每批培養(yǎng)基制備好以后骂铁，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂罩抗、水分浸入拉庵、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等套蒂、均應(yīng)挑出棄去钞支。并測定其最終pH。

將全部培養(yǎng)基放入36±1°C恒溫箱培養(yǎng)過夜操刀，如發(fā)現(xiàn)有菌生長烁挟，即棄去。

用有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)菌株接種1~2管或瓶培養(yǎng)基骨坑，培養(yǎng)24~48小時撼嗓，如無菌生長或生長不好。應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次欢唾，如結(jié)果仍同前且警，則該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄去，不能使用礁遣。

10斑芜、培養(yǎng)基的保存

培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，最好能放于普通冰箱內(nèi)祟霍。放置時間不宜超過一周杏头，傾注的平板培養(yǎng)基不宜超過3天。每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁或明顯標(biāo)簽沸呐。