質(zhì)譜流式細(xì)胞術(shù)通常被認(rèn)為是基于熒光流式細(xì)胞術(shù)的改良技術(shù)踊沸，其用不同重金屬穩(wěn)定同位素（圖1）代替熒光基團(tuán)來標(biāo)記不同抗體浇揩。然后將單個(gè)細(xì)胞霧化電離，僅保留與相應(yīng)抗體一一對(duì)應(yīng)的金屬離子信息。最后用TOF探測器對(duì)單個(gè)細(xì)胞的離子云進(jìn)行分析辑鲤，還原其細(xì)胞marker信息纹因。
您是否對(duì)質(zhì)譜流式抗體選擇感到困惑喷屋？
在科研領(lǐng)域中，抗體的選擇至關(guān)重要瞭恰，尤其是在流式細(xì)胞術(shù)/質(zhì)譜流式技術(shù)中屯曹。質(zhì)譜流式技術(shù)結(jié)合了質(zhì)譜和流式細(xì)胞術(shù)的優(yōu)勢，為我們提供了在細(xì)胞層面深入研究細(xì)胞蛋白質(zhì)組的能力惊畏。然而恶耽，正確選擇適用的抗體對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。
在本文中颜启，我們將分享一些關(guān)于質(zhì)譜流式抗體選擇的小妙招偷俭，幫助您在研究中取得更可靠、更精確的數(shù)據(jù)农曲。
1. BSA free
一般情況下社搅，溶解抗體的PBS 緩沖液通常含有牛血清白蛋白(BSA)、甘油乳规、疊氮化鈉形葬。其中蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑BSA能防止抗體降解，減少非特異性結(jié)合暮的。但BSA會(huì)干擾利用金屬穩(wěn)定同位素標(biāo)簽（圖 2）標(biāo)記抗體時(shí)所用還原劑的效果笙以，且BSA可能與目標(biāo)抗競爭性結(jié)合金屬穩(wěn)定同位素標(biāo)簽，以至大幅度降低金屬穩(wěn)定同位素與抗體的偶聯(lián)效率冻辩。并且干擾后續(xù)標(biāo)記效率檢測的電泳結(jié)果猖腕。
2. 單克隆抗體（monoclonal antibodies, mAb）
存在于抗原表面的拆祈，決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)稱為抗原決定簇，又稱抗原表位倘感。一個(gè)抗原可以有一種或多種不同的抗原表位放坏，每種表位只有一種抗原特異性。
多克隆抗體（polyclonal antibody, pAb）：由多種抗原決定簇刺激機(jī)體老玛，相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體淤年，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，機(jī)體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體蜡豹。
單克隆抗體：由一種抗原決定簇刺激機(jī)體麸粮，由一個(gè)B淋巴細(xì)胞接受該抗原刺激所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體。
質(zhì)譜流式應(yīng)選擇單克隆抗體進(jìn)行試驗(yàn)镜廉，其特異性地檢測單個(gè)表位弄诲，不易與其它蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)〗课ǎ可以高效結(jié)合抗原齐遵，提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性和標(biāo)準(zhǔn)化水平。
3. 抗體類型——IgG
用于質(zhì)譜流式的抗體應(yīng)具有以下特征：
易獲取视乐，較穩(wěn)定：根據(jù)重鏈可將免疫球蛋白G(Immunoglobulin G洛搀，IgG)分為IgM敢茁、IgD佑淀、IgG、IgA和IgE五類彰檬。其中伸刃，IgG的分子量小且半衰期長，分解比較慢逢倍，所以是血清中含量最多的免疫球蛋白(占Ig量的75%)捧颅。
易于設(shè)置同型對(duì)照：質(zhì)譜流式、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)有必要選擇與待測抗體Panel同種屬來源,同亞型,同金屬同位素標(biāo)記的抗體用于消除由于抗體非特異性結(jié)合到細(xì)胞表面而產(chǎn)生的背景染色,相當(dāng)于實(shí)驗(yàn)的陰性對(duì)照较雕。
4. 非同種屬來源抗體
為了降低非特異性結(jié)合碉哑，應(yīng)用于質(zhì)譜流式的抗體應(yīng)選取與反應(yīng)物種非同物種來源的抗體。例如亮蒋，檢測人相關(guān)蛋白時(shí)應(yīng)選取非人（鼠源扣典，兔源，羊源等）物種來源的抗體慎玖。
5. 抗體規(guī)格——100 μg
此規(guī)格為金屬同位素標(biāo)記抗體的標(biāo)記效率和回收得率良好的一般抗體規(guī)格贮尖。
6. 應(yīng)用
質(zhì)譜流式的抗體應(yīng)優(yōu)先選用已經(jīng)在流式細(xì)胞術(shù)得到驗(yàn)證的抗體。
7. 標(biāo)記
質(zhì)譜流式的抗體應(yīng)選擇沒有任何標(biāo)記的裸抗趁怔。
質(zhì)譜流式(Mass Cytometry)細(xì)胞儀是跨時(shí)代的高通量流式細(xì)胞儀湿硝，可在單次實(shí)驗(yàn)中獲得40余種蛋白的表達(dá)信息薪前。不僅僅是細(xì)胞表面Marker,還可以獲得胞內(nèi)蛋白，例如蛋白磷酸化通路和代謝相關(guān)的信息关斜。質(zhì)譜流式利用飛行時(shí)間質(zhì)譜(TOF)作為檢測手段示括，具有檢出限低、動(dòng)態(tài)線性范圍廣(ng/L~mg/L)痢畜、干擾少例诀、分析精密度高等優(yōu)點(diǎn),可以同時(shí)測定多種元素,并且同一樣品不同時(shí)間檢測結(jié)果間的變異系數(shù)值小于3%。質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)可以在單細(xì)胞層面對(duì)樣本進(jìn)行更多的參數(shù)檢測裁着，使細(xì)胞的研究更具深度和廣度繁涂，是流式細(xì)胞技術(shù)一個(gè)新的發(fā)展方向。它能夠?qū)崿F(xiàn)更為精確全面的免疫分型及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)網(wǎng)絡(luò)分析二驰，在外部感染扔罪、自身免疫、腫瘤研究等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用前景桶雀。
參考文獻(xiàn)：
Guojun Han, Matthew H. Spitzer, Sean C. Metal-isotope-tagged monoclonal antibodies for high-dimensional mass cytometry [J]. Nature protocols 13, 2121–2148 (2018).
