安徽師范大學(xué)首屆大學(xué)生生物聯(lián)賽學(xué)科競賽團(tuán)隊

本文參加#感悟三下鄉(xiāng)瘫析,青春筑夢行#活動,本人承諾默责,文章內(nèi)容為原創(chuàng)贬循,且未在其他平臺發(fā)表過。

時光匆匆桃序,轉(zhuǎn)眼間為期一個月的暑期社會實踐已經(jīng)落下帷幕杖虾。由于我們的暑期社會實踐主要是以實驗為主,所以我們沒有像其他團(tuán)隊一樣奔波在外媒熊。每天都能看到隊友們在實驗室里忙碌的身影奇适。在這一個月里,我們大家都受益匪淺芦鳍,也真真切切體會到 科研人員工作的辛勞嚷往。

(圖為團(tuán)隊的隊旗)

一、我們的實踐日常

我們的實驗是研究8種雁形目鳥類nrDNA進(jìn)化柠衅,雖然每天 重復(fù)一樣的實驗步驟皮仁,但我們并不感到厭煩,相反,我們很享受這個過程贷祈。每當(dāng)實驗成功后趋急,大家在一起歡呼。我想這大概是我們在一起最幸福的時刻了吧付燥!實驗失敗了宣谈,我們不氣餒不放棄,我們始終堅信著一定會成功的键科,勝利就在前面闻丑。大家互相鼓勵著,督促著勋颖。很幸運(yùn)嗦嗡,擁有這些隊友。下面我想簡單回憶下過去的一個月的點點滴滴饭玲,那些屬于我們的實驗夢侥祭。

(一)DNA的提取

總DNA的提取采用改進(jìn)的CTAB(Cetyl-trimethy-Ammonium Bromide;中文名,十六烷基-三甲基-溴化銨)法茄厘,材料為鳥類臟腑矮冬。

主要步驟如下:

⑴向2mlEP管中加入1300μl已加巰基乙醇CTAB提取液,靜置待用次哈;

⑵ 取上述鳥類臟腑少許胎署,剪碎,放入研缽窑滞,加少許研磨劑琼牧,研磨至粉末狀,倒入提取液中哀卫,混勻巨坊,65℃保溫一個小時左右(保溫過程中需混勻幾次);

⑶ 將EP管放在普通離心機(jī)中此改,12000rpm趾撵,離心10min;

⑷ 取上清液,加CI(氯仿:異戊醇=24:1)至滿管带斑,振蕩10min;

⑸再次離心鼓寺,10℃,12000rpm,10min;

⑹再取上清液于2ml EP管中勋磕,加入等體積CI(氯仿:異戊醇=24:1),振蕩10min;

⑺再次進(jìn)行步驟⑸敢靡;

⑻取上清液于2ml EP管中挂滓,加入2/3體積冰異丙醇,于-20℃環(huán)境下沉淀半個小時至一個小時;

⑼在4℃環(huán)境下離心啸胧,12000rpm赶站,10min,棄上清液幔虏,去沉淀;

⑽用75%乙醇洗滌兩次以上贝椿,風(fēng)干想括;

⑾再用200μl 0.5×TE溶液溶解。

以上即DNA的總提取過程烙博。


(二)瓊脂糖電泳

⑴ 用電子天平稱取0.3g瓊脂糖瑟蜈,加30ml1×TAE溶液,并搖勻渣窜;

⑵將配置好的溶液放在微波爐中加熱兩分鐘至溶液澄清铺根;

⑶稍冷卻后,取少許EB加入溶液中乔宿,振蕩均勻位迂;

⑷將溶液加入準(zhǔn)備好的制膠槽內(nèi),冷卻详瑞;

⑸待其凝固后掂林,小心拔去梳齒,使點樣孔保持完好坝橡;

⑹點樣后泻帮,于120V電壓下進(jìn)行半小時左右的電泳,后取出置于紫外分析儀下觀察驳庭,拍照刑顺。

(三)PCR擴(kuò)增

(1)通過瓊脂糖凝膠電泳的過程將目的DNA片段與其他的雜帶盡量的分開,然后用干凈的手術(shù)刀割下含目的DNA瓊脂塊饲常,放入1.5ml離心管中蹲堂;

(2)加入Binding BufferII 溶液700ul/管,60oC水浴10分鐘贝淤,使膠塊融化柒竞。水浴時,每2min振蕩一次(動作不能太劇烈)播聪;

(3)將融化的膠溶液轉(zhuǎn)移至UNIT-10柱中并套放在2ml收集管內(nèi)朽基,室溫放置2min后,室溫離心一分鐘离陶,8000rpm稼虎;

(4)取下UNIT-10柱,倒掉收集管中的廢液后招刨,再次將UNIT-10柱放入收集管中霎俩,加入500ul Wash Solution,室溫離心一分鐘,8000rpm打却;

(5)重復(fù)上一步杉适;

(6)取下UNIT-10柱,倒掉收集管中的廢液柳击,將UNIT-10柱放入同一個收集管中猿推,12000rpm室溫離心兩分鐘,自然晾干至無酒精味捌肴;

(7)將UNIQ-10柱放入1.5ml離心管中蹬叭,在柱子膜中央加60oC的Elution Buffer,40ul哭靖,靜置5min具垫;

(9)在離心機(jī)中室溫離心1min,12000rpm试幽,離心管中的液體即為回收的目的DNA片斷筝蚕,標(biāo)上標(biāo)簽,放入冰箱中待用铺坞。

?(四)PCR反應(yīng)體系

94oC 5分鐘起宽;94oC變性30秒, 54oC退火30秒, 72oC延伸2分鐘, 30個循環(huán)济榨;72oC終延伸10分鐘坯沪。


(五)測序

將做好的克隆(每個樣品一個)送到上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行測序工作擒滑。

二腐晾、總結(jié)

一個月的時間磨礪了我們的意志,鍛煉了我們的動手能力丐一,讓我們把課本上學(xué)的知識 原理運(yùn)用到了實踐中藻糖。經(jīng)過這次實踐也更加堅定了我們對未來的信念。生物界中有太多的奧妙库车,等著我們?nèi)グl(fā)現(xiàn)去體會巨柒。

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