載體線性化的驗(yàn)證

Q1:怎樣判斷載體是否完全線性化?
Q2:怎樣根據(jù)電泳圖確定載體線性化酶切是否完全硬毕?

A:點(diǎn)膠檢測(cè)的時(shí)候可以點(diǎn)一個(gè)原始質(zhì)粒呻引。質(zhì)粒是環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu),跑膠的時(shí)候會(huì)快一些昭殉,所以會(huì)比整個(gè)片段稍低苞七,酶切的話會(huì)切掉一部分片段藐守,線性化之后會(huì)比質(zhì)粒跑的慢挪丢。所以會(huì)出現(xiàn)兩種情況蹂风,一種是酶切后的線性化片段剛好和質(zhì)粒跑在了一個(gè)位置,一種是質(zhì)粒位置稍低乾蓬。但一般是后一種情況惠啄,也就是線性化載體比質(zhì)粒位置高。

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