本次閱讀文獻(xiàn)是2006年發(fā)表在《Nature Cell Biology》上的《GENERATIVE CELL SPECIFIC 1 is essential forangiosperm fertilization》，通訊作者是日本立教大學(xué)理學(xué)院生命科學(xué)系的Tsuneyoshi Kuroiwa教授肿男，第一作者是Toshiyuki Mori统诺，GEX2也是他發(fā)現(xiàn)的颖侄。
科學(xué)問題：找生殖系特異表達(dá)的基因
方法：通過比較第一次有絲分裂之前（小孢子母細(xì)胞）献幔，分裂后早期（生殖細(xì)胞）陆盘，第二次有絲分裂前（生殖細(xì)胞）的基因的表達(dá)经瓷。結(jié)果找到了汤善。RT-PCR該基因特異表達(dá)在花粉發(fā)育的晚期，被稱為GENERATIVE CELL SPECIFIC 1 ( GCS1)
該蛋白是一個(gè)單次跨膜蛋白牧愁，N端有個(gè)預(yù)測和囊泡運(yùn)輸?shù)霓D(zhuǎn)運(yùn)區(qū)素邪，C端有一個(gè)富含HIS的區(qū)域。并且在多個(gè)物種中存在同源基因猪半。
免疫印跡法來鑒定GCS1的表達(dá)pattern兔朦，發(fā)現(xiàn)在生殖細(xì)胞的表面。
要來T-DNA插入的雜合突變體磨确，進(jìn)行常規(guī)的突變體檢測烘绽，然后觀察表型，發(fā)現(xiàn)明顯的敗育情況俐填，做回交發(fā)現(xiàn)是雄方的問題（回補(bǔ)沒有），隨后進(jìn)一步確定表型原因翔忽，苯胺藍(lán)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)花粉管的接收是沒有問題的英融，且種子的發(fā)育存在問題，作者認(rèn)為是在花粉管接收之后的原因歇式。于是乎驶悟，他就用了T-DNA插入突變體的kana抗性，突變體做雄方時(shí)材失，后代沒有抗性痕鳍，說明問題在雄方，是雄方?jīng)]有融合龙巨。
為了進(jìn)一步觀察笼呆，于是在在突變體力表達(dá)了DUO-RFP，在進(jìn)行DAPI旨别，然后切片诗赌，觀察，發(fā)現(xiàn)精細(xì)胞沒有卵細(xì)胞和中央細(xì)胞融合秸弛。確認(rèn)參與精卵融合铭若。
后續(xù)還有文章報(bào)道擬南芥中的HAP2《Arabidopsis HAP2 (GCS1) is a sperm-specific gene requiredfor pollen tube guidance and fertilization》洪碳，是和本次文章同一年發(fā)的，可見競爭激烈叼屠，除了融合的表型瞳腌，還報(bào)道了參與花粉管導(dǎo)向的表型，似乎近期被證偽了镜雨。
近期的結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)表面HAP2可以形成一個(gè)三聚體嫂侍，并通過形成一個(gè)融合環(huán)，來介導(dǎo)融合冷离。文章在此《Evolutionary Diversification of the HAP2 Membrane Insertion Motifs to Drive Gamete Fusion Across Eukaryotes》吵冒。
評(píng)論：領(lǐng)域重大突破，感覺以前人做實(shí)驗(yàn)都好麻煩啊西剥，還是現(xiàn)在方便多了痹栖。
