1.用于慢病毒感染的細(xì)胞接種量是多少？
根據(jù)細(xì)胞增殖的速度調(diào)整細(xì)胞接種量冲秽，以保證在感染后4天左右細(xì)胞剛好快長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿底部為宜。
針對(duì)大部分細(xì)胞系：傳代周期在2-3天，感染時(shí)細(xì)胞鋪板的密度保持在20-30%左右玉吁，則72h后細(xì)胞增殖后鋪板密度約在90%左右；
針對(duì)某些原代細(xì)胞： 由于細(xì)胞增長(zhǎng)緩慢腻异，可以在接種時(shí)提高匯合度到50%～60%进副，但要確保在感染后4天時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到90%～100%；
針對(duì)非分裂細(xì)胞：?如神經(jīng)元細(xì)胞，接種后不再增殖影斑，此時(shí)可以按照100%的匯合度進(jìn)行接種给赞。
2.如何確定向細(xì)胞中加入慢病毒的最佳時(shí)間？
慢病毒感染細(xì)胞后需要4天的時(shí)間才能觀察到慢病毒攜帶的基因表達(dá)矫户，應(yīng)在細(xì)胞匯合度20~40%時(shí)且細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)加入慢病毒片迅，確保在感染后4天時(shí)細(xì)胞增長(zhǎng)達(dá)到90%～100%的匯合度。
3.加入慢病毒病毒后皆辽，細(xì)胞死亡很厲害柑蛇，該如何處理？
這種情況是由于慢病毒對(duì)該細(xì)胞有一定的毒性作用驱闷，需要調(diào)整并降低感染的MOI值耻台，并且在感染后4小時(shí)、8小時(shí)空另、12小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行觀察盆耽，若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)變差時(shí)，則需要立刻對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液操作扼菠，使用新鮮的完全培養(yǎng)液替換病毒感染培養(yǎng)液摄杂。
4.慢病毒感染細(xì)胞后什么時(shí)候基因表達(dá)到達(dá)峰值？
慢病毒感染后大部分細(xì)胞4天左右GFP或目的基因表達(dá)達(dá)到峰值娇豫，但是對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞匙姜，達(dá)到峰值的時(shí)間會(huì)更長(zhǎng)。
5.細(xì)胞能被慢病毒感染冯痢，但為何GFP熒光很弱氮昧？
GFP慢病毒感染細(xì)胞后，細(xì)胞中熒光強(qiáng)度取決于病毒進(jìn)入到細(xì)胞的顆粒數(shù)浦楣、細(xì)胞本身的增殖狀態(tài)袖肥、細(xì)胞類型、觀察時(shí)間振劳、GFP基因前面的啟動(dòng)子活性等因素椎组。
通常目的細(xì)胞感染慢病毒顆粒數(shù)越多，細(xì)胞本身增殖越快历恐，GFP熒光會(huì)較強(qiáng)寸癌。慢病毒在增殖較快的細(xì)胞中感染96~120小時(shí)后，GFP蛋白表達(dá)才達(dá)到峰值弱贼；在增殖較慢的細(xì)胞中感染后蒸苇，GFP蛋白表達(dá)達(dá)到峰值需要更長(zhǎng)的時(shí)間。GFP基因接在強(qiáng)啟動(dòng)子后面時(shí)熒光表達(dá)強(qiáng)吮旅；GFP接在弱啟動(dòng)子后面時(shí)熒光表達(dá)較弱溪烤。
6.如何提高慢病毒對(duì)細(xì)胞的感染效率？
慢病毒對(duì)細(xì)胞的感染效率受多個(gè)因素影響，如細(xì)胞自身生長(zhǎng)的狀態(tài)檬嘀，細(xì)胞數(shù)量槽驶，細(xì)胞被慢病毒感染的難易程度等。因此保證細(xì)胞正常增殖鸳兽，輪廓清晰掂铐，合適的細(xì)胞密度，選擇最優(yōu)的感染條件可以更好的保證感染效率贸铜。對(duì)于懸浮細(xì)胞堡纬，可采用離心感染方法，減少病毒感染時(shí)的體積蒿秦，從而提高感染效率烤镐。如將細(xì)胞培養(yǎng)板密封后，用平角轉(zhuǎn)子離心機(jī)1000g離心1h棍鳖，再放回培養(yǎng)箱中正常培養(yǎng)炮叶。
