Hacat細(xì)胞來源于一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚蚓峦，是在體外培養(yǎng)后自然轉(zhuǎn)化的永生化的人角質(zhì)細(xì)胞昧识，也是第一株永生化的表皮細(xì)胞纵势。Hacat細(xì)胞角蛋白埠偿、角化細(xì)胞交聯(lián)外膜蛋白步清、中間絲相關(guān)蛋自陽性要门，可用于人表皮細(xì)胞角化的研究。
細(xì)胞名稱：人永生化角質(zhì)細(xì)胞(STR鑒定正確)
細(xì)胞簡稱：Hacat
產(chǎn)品貨號：TCH-C388
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
生長特性：貼壁生長
培養(yǎng)體系：DMEM-H +10%FBS +1%P/S
凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO廓啊，液氮儲存
質(zhì)量檢測：細(xì)菌欢搜、真菌、支原體檢測均為陰性
Hacat 細(xì)胞培養(yǎng)注意要點
1. 消化時間長
Hacat細(xì)胞貼壁較緊谴轮，傳代時消化時間較長炒瘟，可能需要5min或者更久，具體時間因胰酶濃度第步、效價疮装、消化條件有所不同，第一次對該細(xì)胞進行消化時要摸索最佳時間粘都。注意消化前一定要用PBS清洗細(xì)胞2-3次廓推，鋪板時一定要均勻，因為HaCat成片生長翩隧，鋪板不勻會存在局部生長過密難以消化樊展，生長稀疏部分容易消化過度的情況。
2. 不可過度生長
如果Hacat細(xì)胞長滿后沒有及時傳代，任其過度生長专缠，可能造成不可逆轉(zhuǎn)的損傷雷酪，導(dǎo)致傳代后細(xì)胞碎片增多，細(xì)胞變形涝婉，不生長等情況哥力。
3. 黑點較多
Hacat細(xì)胞的胞體內(nèi)黑色顆粒較多，這是該細(xì)胞的特性墩弯。同時細(xì)胞外也有少量黑點省骂，這些黑點是細(xì)胞碎片粘附在瓶底，當(dāng)碎片較多時可在換液前用復(fù)溫的PBS輕輕潤洗最住。
4. 培養(yǎng)時存在漂浮細(xì)胞
少量漂浮細(xì)胞不影響細(xì)胞生長,漂浮細(xì)胞較多時可以通過換液清除。
5. 生長較慢
注意控制傳代密度不要過低怠惶，建議細(xì)胞密度到達80%時進行傳代涨缚。
Hacat 細(xì)胞傳代培養(yǎng)
1. 預(yù)熱完全培養(yǎng)基、胰酶和PBS策治；
2. 用PBS洗滌細(xì)胞2次脓魏。洗滌過程中注意動作輕柔。
3.加入胰酶通惫，迅速鋪勻茂翔，確保其充分接觸細(xì)胞表面。
4. 顯微鏡下觀察消化情況履腋，約70%~80%細(xì)胞收縮變圓后珊燎，輕拍培養(yǎng)容器外壁，使?細(xì)胞脫離培養(yǎng)容器底面遵湖。立即加入胰酶雙倍體積的完全培養(yǎng)基悔政，輕搖培養(yǎng)容器，使培養(yǎng)基和胰酶迅速混勻延旧，終止消化谋国。
5.吸取細(xì)胞懸液，吹打培養(yǎng)容器底面數(shù)次迁沫，盡可能將細(xì)胞都吹打下來芦瘾，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中。
6. PBS洗滌培養(yǎng)容器1~2次集畅，收集所有細(xì)胞懸液至離心管中近弟。
7. 收集的所有細(xì)胞懸液250 g離心4 min。
8. 離心后去除上清牡整。加入2 mL預(yù)熱的完全培養(yǎng)基藐吮，輕柔吹打細(xì)胞沉淀，充分吹散、混勻谣辞。
9. 將細(xì)胞按(2.5~4.0) ×10^4個活細(xì)胞/c㎡接種至適宜的培養(yǎng)容器內(nèi)迫摔。
10. “十字法”搖勻細(xì)胞，將培養(yǎng)容器放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中泥从。
Hacat 細(xì)胞凍存
1. 待細(xì)胞生長至可傳代的密度句占，即可準(zhǔn)備凍存。
2. 消化細(xì)胞躯嫉，取少量細(xì)胞懸液計數(shù)纱烘。細(xì)胞懸液經(jīng)250 g離心4 min。
3. 離心后去除上清祈餐，用適量4℃預(yù)冷的凍存液重懸細(xì)胞擂啥。將細(xì)胞按比例或數(shù)量分裝至凍存管中。一般凍存密度為(1.0~2.0)×10^6個/mL帆阳。
注意：細(xì)胞長時間在非培養(yǎng)條件下放置會嚴(yán)重影響細(xì)胞的狀態(tài)哺壶。如離心后用凍存液重懸計數(shù)，請將細(xì)胞放置于4℃冰箱內(nèi)蜒谤，以減弱細(xì)胞代謝山宾，較好的保持細(xì)胞狀態(tài)。
4. 如使用海星一步凍存液鳍徽，凍存管直接豎直放入-80℃冰箱即可完成“一步”凍存资锰。如使用程序凍存液，需將凍存管放入提前預(yù)冷的程序降溫盒后放入-80℃冰箱阶祭。
5. 24小時后可將凍存管轉(zhuǎn)移到液氮進行長期保存绷杜。
注意：細(xì)胞不可長期保存在-80℃冰箱中。建議24 h后盡快轉(zhuǎn)移至液氮中濒募。
