人輸尿管上皮永生化細(xì)胞(SV-HUC-1)培養(yǎng)要點

SV-HUC-1 (人輸尿管上皮永生化細(xì)胞),是由猿猴空泡病毒40轉(zhuǎn)染至1名11歲男孩的泌尿道上皮細(xì)胞面哼,而建立起來的永生化細(xì)胞系歌殃。其分化特性與正常細(xì)胞相似,培養(yǎng)簡單辞嗡,可無限傳代捆等。

SV-HUC-1細(xì)胞是正常輸尿管組織用SV40病毒轉(zhuǎn)染建株的。反復(fù)用非洲綠猴腎細(xì)胞平板測試檢測傳染性SV40的生成续室,結(jié)果都呈陰性栋烤;SV-HUC-1細(xì)胞在脅迫(如曝露于化學(xué)試劑)下可能激活病毒。

細(xì)胞名稱:人輸尿管上皮永生化細(xì)胞(STR鑒定正確)

細(xì)胞別名:HUC-1; SV-HUC; SVHUC

產(chǎn)品貨號:TCH-C341

種屬來源:人

組織來源:輸尿管

細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣

生長特性:貼壁生長

培養(yǎng)體系:Ham's F-12K+10% FBS+1% P/S

配套培養(yǎng)基貨號:TCH-G341

傳代比例:1:3-1:4挺狰,每2-3天換液一次

傳代周期:24-48 h

培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%CO2明郭,溫度:37℃

凍存條件:60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO,液氮儲存

SV-HUC-1細(xì)胞

培養(yǎng)傳代

1. 從培養(yǎng)容器中吸出用過的細(xì)胞培養(yǎng)基并丟棄她渴;

2. 用PBS沖洗細(xì)胞(每10cm2培養(yǎng)表面積約2mL 溶液)达址。從與貼壁細(xì)胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液,以避免攪動細(xì)胞層趁耗,前后輕柔搖晃容器數(shù)次沉唠;

從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄,向培養(yǎng)瓶中加入0.25%胰酶(試劑量應(yīng)足以覆蓋細(xì)胞層)苛败;

3. 輕輕搖晃容器满葛,使試劑完全覆蓋細(xì)胞層径簿,T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶留 200 μL左右即可;

4. 將培養(yǎng)容器放在培養(yǎng)箱中孵育5分鐘左右嘀韧,在顯微鏡下觀察細(xì)胞解離情況篇亭;

5. 當(dāng)細(xì)胞解離程度≥ 90%時,傾斜培養(yǎng)容器锄贷,使細(xì)胞上液體盡快流盡译蒂,加入所用胰酶兩倍體積的完全培養(yǎng)基,吹打細(xì)胞層表面數(shù)次谊却,使培養(yǎng)基分散柔昼;

6. 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無菌離心管中,以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘炎辨;

7. 用最少體積的完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀捕透,將細(xì)胞懸液按照推薦比例稀釋,并將適量體積的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細(xì)胞培養(yǎng)容器中碴萧,再將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱乙嘀。

SV-HUC-1細(xì)胞培養(yǎng)注意事項

1.該細(xì)胞密度越高越難消化,細(xì)胞匯合度高于80%時破喻,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)虎谢,一般0.25%胰酶消化3-5min。

2. 當(dāng)細(xì)胞難以消化時低缩,可通過延長消化時間或分次消化嘉冒。

3. 分次消化步驟,棄去舊培養(yǎng)液咆繁,加入1mL左右預(yù)熱的PBS,輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞2次顶籽,吸出PBS丟棄玩般;加入1mL左右胰酶,輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞礼饱;放入培養(yǎng)箱消化坏为,消化3-5分鐘(根據(jù)具體細(xì)胞稍作延長或縮短),顯微鏡下看到細(xì)胞開始漂浮镊绪,可以加入2mLPBS匀伏,晃動培養(yǎng)瓶使細(xì)胞懸浮,不要吹打剩下的貼壁細(xì)胞蝴韭;吸出培養(yǎng)瓶內(nèi)的PBS和細(xì)胞懸液够颠,轉(zhuǎn)移到無菌離心管中,在離心管中加入3mL含血清的培養(yǎng)基終止消化并吹散細(xì)胞榄鉴,使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液履磨;原培養(yǎng)瓶中加入0.5mL胰酶蛉抓,晃動培養(yǎng)瓶浸潤細(xì)胞,放入培養(yǎng)箱繼續(xù)消化剃诅,直到細(xì)胞塊中間全部收縮變圓巷送,晃動培養(yǎng)瓶可脫落;用3mL含血清的培養(yǎng)基終止消化矛辕,將瓶底的細(xì)胞全部吹下笑跛,并輕輕吹吸分散細(xì)胞呈單顆;收集細(xì)胞懸液與第一次消化下來的細(xì)胞合并到一個離心管聊品。第一次消化可在顯微鏡下觀察飞蹂,待消化70%-80%細(xì)胞收縮變圓,輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)邊杨刨,細(xì)胞可以滑落方可終止消化晤柄。

4. 血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化建議選用高質(zhì)量胎牛血清。

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