HK-2細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞映皆，通過導入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2帽氓；Psi-2細胞產生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317损痰，最后將PA317細胞產生的病毒顆粒導入正常的腎皮質近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性填具，但未用G418篩選轉導克隆偷办。Southern和FISH分析顯示艰额，HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實椒涯，HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因柄沮。
細胞名稱：人腎皮質近曲小管上皮細胞(STR鑒定正確)
細胞簡稱：HK-2
細胞別稱：Hk-2; HK2; Human Kidney-2
產品貨號：TCH-C400
種屬來源：人
組織來源：腎
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
生長特性：貼壁生長
培養(yǎng)體系：MEM＋10% FBS＋1% P/S
配套培養(yǎng)基貨號：TCH-G400
傳代比例：1:3-1:4，每2-3天換液一次
傳代周期：24-48 h
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO?废岂，溫度：37℃
凍存條件：60%基礎培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO祖搓，液氮儲存
質量檢測：細菌、真菌泪喊、支原體檢測均為陰性
HK-2細胞培養(yǎng)步驟
1. 復蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍棕硫，加入4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘袒啼，棄去上清液哈扮，補加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻纬纪。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養(yǎng)基滑肉，培養(yǎng)過夜）包各。第二天換液并檢查細胞密度。
2. 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%靶庙，即可進行傳代培養(yǎng)问畅。
（1）直接棄去培養(yǎng)容器中的培養(yǎng)上清。用PBS洗滌細胞2次六荒，洗滌后的PBS直接棄去护姆，無需保留。
（2）PBS洗滌培養(yǎng)容器1~2次掏击，收集所有細胞懸液至離心管中卵皂，250 g離心4 min。
（3）離心后去除上清砚亭。加入2 mL預熱的完全培養(yǎng)基灯变，輕柔吹打細胞沉淀，充分吹散捅膘、混勻添祸。
（4）將細胞按(2.5~4.0) ×10^4個活細胞/cm2接種至適宜的培養(yǎng)容器內。
注意：如未計數(shù)寻仗，也可按照適宜比例進行傳代刃泌，首次傳代建議按照1：2進行，后續(xù)可根據(jù)細胞實際生長情況參考說明書傳代比例范圍靈活調整愧沟。
3. 細胞凍存：待細胞生長至可傳代的密度蔬咬，即可準備凍存鲤遥。
（1）消化細胞沐寺，取少量細胞懸液計數(shù)。細胞懸液經(jīng)250 g離心4 min盖奈。
（2）離心后去除上清混坞，用適量4℃預冷的凍存液重懸細胞。將細胞按比例或數(shù)量分裝至凍存管中钢坦。一般凍存密度為(1.0~2.0)×106個/mL究孕。
注意：細胞長時間在非培養(yǎng)條件下放置會嚴重影響細胞的狀態(tài)。如離心后用凍存液重懸計數(shù)爹凹，請將細胞放置于4℃冰箱內厨诸，以減弱細胞代謝，較好的保持細胞狀態(tài)禾酱。
（3）如使用海星一步凍存液微酬，凍存管直接豎直放入-80℃冰箱即可完成“一步”凍存绘趋。如使用程序凍存液，需將凍存管放入提前預冷的程序降溫盒后放入-80℃冰箱颗管。
（4）24小時后可將凍存管轉移到液氮進行長期保存陷遮。
注意：細胞不可長期保存在-80℃冰箱中。建議24 h后盡快轉移至液氮中垦江。
HK-2細胞常見問題
在培養(yǎng)HK-2細胞的時候帽馋，常會出現(xiàn)一些細節(jié)問題，不可掉以輕心比吭。以下是小海星為大家準備培養(yǎng)HK-2細胞常見的問題绽族，以及解決方案。
1.出現(xiàn)拉絲
細胞伸出細長的絲有兩種情況：
第一種情況是細胞遷移造成的衩藤，細胞在培養(yǎng)皿上并不是靜態(tài)的项秉，也會出現(xiàn)遷移。遷移時細胞的一部分滯留在原處慷彤，遷移的過程中會拉出一條細長的絲娄蔼。這種情況下拉絲的細胞占少數(shù)，細胞整體的生長狀態(tài)是正常的底哗，不用特殊處理岁诉。
第二種情況是營養(yǎng)不良，拉絲的細胞占大多數(shù)跋选，同時細胞生長緩慢涕癣，此時可以提高血清比例（不超過20%）或添加5 ng/mL EGF。
2.形態(tài)不對
正常的HK-2呈鋪路石狀生長前标，如果細胞呈鐮刀狀或不規(guī)則狀（如下圖）坠韩，可能是因為培養(yǎng)環(huán)境發(fā)生了較大的改變，比如從有血清到無血清的轉換炼列，此時換回原來的培養(yǎng)條件細胞可逐漸恢復只搁；如果細胞變得細長，這時候可能是營養(yǎng)不良俭尖。
3.出現(xiàn)空泡
空泡問題需要結合生長速度和形態(tài)來看：如果生長速度和形態(tài)正常氢惋，空泡可能是正常的細胞活動，傳代后空泡即可減輕稽犁。
如果生長較慢焰望，形態(tài)異常，空泡可能是自噬行為已亥，可加大血清比例（不超過20%）或更換血清品牌改善細胞狀態(tài)熊赖。
4.生長緩慢
在標準培養(yǎng)條件（MEM+10%FBS+1%PS），以及1：3傳代條件下虑椎，HK-2的傳代周期約為3天震鹉；
當細胞生長緩慢的妖，一周無法傳代時，需要考慮培養(yǎng)基特別是血清是否合適足陨；
選擇合適的培養(yǎng)基及血清嫂粟，同時加大細胞接種密度可以改善；
血清質量差異可能引起細胞狀態(tài)變化墨缘，建議選用高質量的胎牛血清星虹。
培養(yǎng)基選擇：
HK-2最初建系使用無血清培養(yǎng)，眾多文獻以及實踐證明MEM镊讼、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的條件下宽涌，HK-2也能良好生長。但胎牛血清的質量是關鍵蝶棋，胎牛血清品質越高卸亮，HK-2狀態(tài)越好。
若使用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)玩裙，需要使用多聚賴氨酸或者明膠包被培養(yǎng)瓶兼贸，以促使貼壁。
