H9C2(2-1)細(xì)胞是一株由Kimes·B和Brandt·B從BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細(xì)胞株亞克隆得到的細(xì)胞株；H9c2(2-1)細(xì)胞表現(xiàn)出許多骨骼肌的特性。H9C2(2-1)細(xì)胞中的成肌細(xì)胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應(yīng)。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%盅称，H9c2(2-1)細(xì)胞融合發(fā)生得很快淮捆。
H9C2細(xì)胞基本信息
細(xì)胞名稱：大鼠心肌細(xì)胞（H9C2）
細(xì)胞別名：H9c2 (2-1); H9c2; H9C2
產(chǎn)品貨號：TCR-C607
種屬來源：大鼠
組織來源：心臟/心肌層
細(xì)胞形態(tài)：成肌細(xì)胞樣
生長特性：貼壁生長
培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1%P/S
傳代比例：1:3-1:4，每2-3天換液一次
傳代周期：48-72 h
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2躯护，溫度：37℃
凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO惊来，液氮儲存
質(zhì)量檢測：細(xì)菌、真菌棺滞、支原體檢測均為陰性
參考文獻(xiàn)：
Kimes BW, Brandt BL. Properties of a clonal muscle cell line from rat heart. Exp. Cell Res. 98: 367-381, 1976. PubMed: 943302
Levy AP, et al. Post-transcriptional regulation of vascular endothelial growth factor by hypoxia. J. Biol. Chem. 271: 2746-2753, 1996. PubMed: 8576250
H9C2細(xì)胞復(fù)蘇
推薦使用海星生物H9C2細(xì)胞配套專用培養(yǎng)基貨號：TCR-G607
(1) 開啟37℃水浴鍋裁蚁。預(yù)熱完全培養(yǎng)基，提前將細(xì)胞從液氮中取出继准，放于-80℃冰箱枉证，讓凍存管中液氮揮發(fā)。
(2)?潔凈工作臺內(nèi)準(zhǔn)備15 mL離心管移必，加入5 mL預(yù)熱的完全培養(yǎng)基室谚。
(3)?從-80℃冰箱中取出細(xì)胞〈薇茫快速將凍存管置于37℃水浴鍋內(nèi)秒赤，快速晃動，使凍存液迅速融化憎瘸。
注意: ① 融化過程必須晃動凍存管入篮，保證凍存液融化均勻』细剩晃動時應(yīng)避免水沒過管蓋增加污染風(fēng)險崎弃。
? ? ? ? ② 管內(nèi)凍存液融化至只剩一個約2mm直徑的冰晶時，可停止水浴含潘。繼續(xù)晃動凍存管至冰晶融化。
(4)?用75%酒精消毒凍存管表面线婚。在潔凈工作臺內(nèi)小心開蓋遏弱，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次塞弊，轉(zhuǎn)移至預(yù)先準(zhǔn)備的離心管內(nèi)漱逸。用少量完全培養(yǎng)基洗滌凍存管1~2次，一并收集至離心管內(nèi)游沿。
(5)?250 g離心4 min饰抒。離心后去除上清。加入2 mL完全培養(yǎng)基诀黍，輕柔吹打細(xì)胞沉淀袋坑，充分吹散、混勻眯勾。（如有臺盼藍(lán)可取少量細(xì)胞懸液進(jìn)行染色計數(shù)）
(6)?將細(xì)胞平均接種到1個T25培養(yǎng)瓶或底面積相當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)容器中枣宫，加入足量完全培養(yǎng)基婆誓，搖勻細(xì)胞，將培養(yǎng)容器放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)也颤。
(7)?復(fù)蘇次日洋幻，觀察細(xì)胞狀態(tài)并換液。
H9C2細(xì)胞傳代
細(xì)胞密度達(dá)80%-90%翅娶，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)文留。
(1) 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣竭沫、鎂離子的PBS潤洗H9C2細(xì)胞1-2次燥翅。
(2) 加入1 mL 0.25%Trypsin-0.02%EDTA 消化液于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞输吏，棄去消化液权旷，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min，然后在顯微鏡下觀察H9C2細(xì)胞消化情況贯溅，若細(xì)胞大部分變圓并脫落拄氯，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化它浅。
(3) 按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基译柏，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min姐霍，棄去上清液鄙麦，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
(4) 將H9C2細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中镊折，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)胯府。
H9C2細(xì)胞凍存
推薦使用海星一步凍存液（即用型、無血清恨胚、無需程序降溫）貨號：GUCP-R201
待H9C2細(xì)胞生長狀態(tài)良好時骂因，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例
(1) 收集H9C2細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液赃泡，裝入無菌離心管中寒波，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液升熊，用PBS清洗一遍俄烁，棄盡PBS，然后進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)级野。
(2) 據(jù)H9C2細(xì)胞數(shù)量對應(yīng)加入無血清細(xì)胞凍存液页屠，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液卷中，注意凍存管做好標(biāo)識矛双。
(3) 將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存蟆豫。記錄凍存管位置以便下次拿取议忽。
常見問題
(1) H9C2細(xì)胞可以傳幾代?
H9C2細(xì)胞系理論上是可以無限傳代的，但是研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞系也會有老化的十减；收到細(xì)胞后自己具體可以傳多少代栈幸，會受到客戶自己養(yǎng)細(xì)胞的操作水平技術(shù)，操作環(huán)境帮辟，用的試劑耗材的質(zhì)量等因素影響速址。
(2) 為什么H9c2細(xì)胞培養(yǎng)長得慢？
這些因素都會影響細(xì)胞長得慢
①可能是細(xì)胞接種得太少由驹，細(xì)胞密度太低芍锚。可以先培養(yǎng)蔓榄，然后消化重新鋪瓶并炮，提高密度培養(yǎng)
②操作時力度沒控制好，將細(xì)胞吹碎甥郑，狀態(tài)變差
③血清質(zhì)量不好逃魄，影響細(xì)胞生長
(4) 為什么H9c2細(xì)胞培養(yǎng)會出現(xiàn)空泡？
①可能是鋪板時鋪得不夠均勻澜搅，局部過于密集伍俘，密集地方的細(xì)胞就開始狀態(tài)變差、空泡增多
②也可能是血清差勉躺，需要更換優(yōu)質(zhì)血清癌瘾，及時換液。
(5) 為什么會出現(xiàn)細(xì)胞表面顆粒較多的現(xiàn)象饵溅？
可能是培養(yǎng)環(huán)境有問題柳弄，可以改用DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)，傳三代后會恢復(fù)平整細(xì)胞表面概说。
(6) 為什么細(xì)胞狀態(tài)變差，容易漂嚣伐？
①可能是血清問題糖赔，建議換血清，并注意血清要程序解凍轩端，不能水浴化開
②也有可能是細(xì)胞生長密集放典，需要及時傳代，并不是細(xì)胞長滿才傳代，當(dāng)有個別地方長得過于密集奋构，容易疊加的時候應(yīng)該就要傳代了
