原話
CARs generally contain two types of domains: antigen recognition and signaling. Antigen recognition domains allow CAR T cells to bind to one or more target antigen(s). We recommend sponsors assess the ability of each domain to specifically bind to its target antigen, as described in section V.B of this guidance. Many antigen recognition domains are derived from murine monoclonal antibodies that may be immunogenic in humans, leading to rejection of the CAR T cells or other safety risks (e.g., anaphylaxis). If approaches to reduce immunogenicity (e.g., “humanization” by Complementarity-Determining Region grafting) are used, we recommend the IND describe these changes and their impact on target binding and biological activity
問題1:這段話在講什么
這段話討論了CAR-T細胞治療中的CAR(嵌合抗原受體)的構(gòu)建。CAR通常包含兩種類型的結(jié)構(gòu)域:抗原識別域和信號傳導(dǎo)域『眩抗原識別域使CAR-T細胞能夠與一個或多個目標(biāo)抗原結(jié)合脚粟。該指南建議贊助商評估抗原識別結(jié)構(gòu)域與其目標(biāo)抗原的特異性結(jié)合能力,具體描述在該指南的V.B部分骇塘。許多抗原識別域源自小鼠單克隆抗體伊履,這些抗體在人體中可能具有免疫原性,導(dǎo)致CAR-T細胞的排斥或其他安全風(fēng)險(例如過敏反應(yīng))绪爸。如果采用減少免疫原性的方法(例如CDR區(qū)進行“人源化”)湾碎,建議IND(新藥投放申請)文件中描述這些變化及其對目標(biāo)結(jié)合和生物活性的影響。
問題2:為什么要評估抗原識別結(jié)構(gòu)域與其目標(biāo)抗原的特異性結(jié)合能力奠货?
確保特異性識別:CAR-T細胞的抗原識別結(jié)構(gòu)域負責(zé)與腫瘤細胞表面的抗原結(jié)合介褥,以實現(xiàn)對癌細胞的特異性識別。通過評估結(jié)構(gòu)域與目標(biāo)抗原的特異性結(jié)合能力递惋,可以確保CAR-T細胞只對癌細胞進行識別和攻擊柔滔,而不對正常細胞造成損傷。
避免副作用:CAR-T細胞治療可能引發(fā)副作用萍虽,如細胞毒性反應(yīng)和細胞因子釋放綜合征睛廊。評估特異性結(jié)合能力有助于降低對非腫瘤細胞的誤識別,從而減少對正常組織的攻擊杉编,最大程度地減少副作用的發(fā)生超全。
治療效果提高:CAR-T細胞治療的效果與CAR的特異性結(jié)合能力密切相關(guān)。優(yōu)化抗原識別結(jié)構(gòu)域的特異性結(jié)合能力可以提高CAR-T細胞對腫瘤細胞的識別和殺傷效率邓馒,從而增強治療的療效嘶朱。
問題3:如何評估抗原識別結(jié)構(gòu)域與其目標(biāo)抗原的特異性結(jié)合能力?
細胞結(jié)合實驗:使用細胞結(jié)合實驗可以評估CAR-T細胞的抗原識別結(jié)構(gòu)域與目標(biāo)抗原之間的特異性結(jié)合能力光酣。這可以通過將CAR結(jié)構(gòu)域與標(biāo)記的目標(biāo)抗原表達在靶細胞表面疏遏,然后觀察CAR-T細胞是否選擇性地與這些靶細胞結(jié)合來進行。這種實驗可以使用流式細胞術(shù)、細胞免疫共沉淀等技術(shù)進行财异。
表面等離子共振(SPR):SPR是一種生物物理學(xué)技術(shù)倘零,可用于測量抗原識別結(jié)構(gòu)域與目標(biāo)抗原之間的親和力和結(jié)合動力學(xué)。在這種實驗中戳寸,目標(biāo)抗原被固定在芯片表面呈驶,然后通過流動的CAR結(jié)構(gòu)域溶液來檢測結(jié)合的特異性和親和力。SPR技術(shù)能夠提供實時的結(jié)合動力學(xué)信息疫鹊,包括關(guān)聯(lián)速率俐东、解離速率和親和力常數(shù)。
生物傳感器技術(shù):生物傳感器技術(shù)订晌,如生物傳感芯片和微流控芯片虏辫,可以用于評估抗原識別結(jié)構(gòu)域與目標(biāo)抗原的特異性結(jié)合能力。這些技術(shù)通承獠Γ基于表面修飾的芯片砌庄,將目標(biāo)抗原固定在表面上,并監(jiān)測與CAR結(jié)構(gòu)域的相互作用奕枢。通過觀察信號變化娄昆,如熒光、電阻或質(zhì)量變化缝彬,可以確定結(jié)合的特異性和親和力萌焰。
其他方法:還有其他方法可用于評估特異性結(jié)合能力,如酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)谷浅、免疫組織化學(xué)染色和免疫共沉淀等扒俯。這些方法可以用于定量或定性評估CAR結(jié)構(gòu)域與目標(biāo)抗原之間的結(jié)合特異性。
在評估抗原識別結(jié)構(gòu)域與目標(biāo)抗原的特異性結(jié)合能力時一疯,重要的是使用適當(dāng)?shù)膶φ諏嶒灪完幮詫φ諄砼懦翘禺愋越Y(jié)合或背景信號的影響撼玄。此外,重復(fù)實驗和統(tǒng)計分析也是確保結(jié)果可靠和可重復(fù)的重要步驟墩邀。
總而言之掌猛,通過結(jié)合細胞結(jié)合實驗、SPR眉睹、生物傳感器技術(shù)和其他相關(guān)方法荔茬,可以評估抗原識別結(jié)構(gòu)域與目標(biāo)抗原的特異性結(jié)合能力,從而確定CAR-T細胞治療中CAR的選擇性和特異性竹海。這些評估可以為CAR-T細胞治療的設(shè)計和優(yōu)化提供重要的指導(dǎo)慕蔚。
問題4:鼠源的scfv如何引起人體的免疫反應(yīng)以及如何應(yīng)對?
當(dāng)鼠源的單鏈抗體變量區(qū)域(scFv)用于CAR-T細胞治療時站削,它們可能會引發(fā)人體的免疫反應(yīng)坊萝。這主要是由于以下幾個方面的原因:
免疫原性:鼠源的蛋白質(zhì)在人體中被視為外源性物質(zhì)孵稽,可能觸發(fā)免疫系統(tǒng)的應(yīng)答许起。人體的免疫系統(tǒng)會識別鼠源的scFv作為外來抗原十偶,導(dǎo)致免疫細胞產(chǎn)生抗體來攻擊這些外來蛋白質(zhì)。
抗體相關(guān)的不良反應(yīng):免疫系統(tǒng)對鼠源蛋白質(zhì)的免疫反應(yīng)可能導(dǎo)致一系列的不良反應(yīng)园细,包括過敏反應(yīng)和過敏性休克惦积。當(dāng)患者接受CAR-T細胞治療時,免疫系統(tǒng)可能會釋放炎性介質(zhì)猛频,引發(fā)嚴重的炎癥反應(yīng)和組織損傷狮崩。
為了減輕鼠源scFv引起的免疫反應(yīng),科學(xué)家采取了一些策略來改進CAR-T治療的安全性:
人源化(humanization):通過將鼠源scFv的某些區(qū)域替換為人源的序列鹿寻,可以減少免疫系統(tǒng)對scFv的識別睦柴。這一過程被稱為親和區(qū)域移植(affinity maturation),可以在保持特異性的同時降低免疫原性毡熏。
序列優(yōu)化:對scFv的序列進行優(yōu)化可以減少其免疫原性坦敌。通過對特定區(qū)域進行改變,例如框架區(qū)和互補決定區(qū)(CDR)痢法,可以提高抗原結(jié)合能力并減少免疫原性狱窘。
引入輔助因子:CAR-T治療中可以引入輔助因子,如免疫抑制劑财搁,以減輕免疫反應(yīng)蘸炸。這些輔助因子可以抑制免疫細胞的活性,降低炎癥反應(yīng)的嚴重程度尖奔。
綜上所述搭儒,通過人源化、序列優(yōu)化和引入輔助因子等策略提茁,可以減少鼠源scFv引起的免疫反應(yīng)仗嗦,提高CAR-T治療的安全性。
問題5:CDR區(qū)進行“人源化”具體是怎樣的一個原理和過程甘凭?
在人源化過程中稀拐,針對CDR(Complementarity-Determining Region,互補決定區(qū))進行改造是一種常見的策略丹弱。CDR是單鏈抗體變量區(qū)域(scFv)中最關(guān)鍵的區(qū)域德撬,負責(zé)與目標(biāo)抗原結(jié)合。
人源化的目標(biāo)是將鼠源的CDR序列替換為人源的序列躲胳,以降低免疫系統(tǒng)對鼠源抗原的識別并減少免疫反應(yīng)蜓洪。該過程可以通過以下步驟實現(xiàn):
鼠源CDR序列的分析:首先,對鼠源抗體的CDR序列進行分析坯苹,確定其在抗原結(jié)合中的重要性和功能隆檀。
人源CDR序列的選擇:從人體免疫庫或已知人源抗體中,篩選出與鼠源CDR序列具有類似功能和結(jié)構(gòu)的人源CDR序列。
序列比對和設(shè)計:將鼠源CDR序列與人源CDR序列進行比對恐仑,找到相似的區(qū)域泉坐,并進行適當(dāng)?shù)男蛄性O(shè)計。在設(shè)計過程中裳仆,需要考慮保留重要的抗原結(jié)合位點和關(guān)鍵的氨基酸殘基腕让。
重組和合成:使用基因重組技術(shù),將經(jīng)過設(shè)計的人源CDR序列與其他變量區(qū)域進行連接歧斟,構(gòu)建人源化的scFv序列纯丸。隨后,可以通過化學(xué)合成方法來合成人源CDR序列静袖。
功能驗證和優(yōu)化:將人源化的scFv進行功能驗證觉鼻,檢測其與目標(biāo)抗原的結(jié)合能力和特異性。如果需要队橙,可以對人源化的序列進行進一步的優(yōu)化滑凉,以改善其結(jié)合性能。
通過這些步驟喘帚,可以將鼠源CDR序列替換為人源CDR序列畅姊,實現(xiàn)CDR的人源化焰盗。這樣做的目的是降低CAR-T細胞治療中鼠源scFv引起的免疫反應(yīng)寄疏,提高治療的安全性和耐受性春寿。