高通量測(cè)序中的接頭(adapter)到底是什么

首先放一張測(cè)序示意圖阅嘶,在DNA片段兩端所加的序列即接頭序列,也就是我們今天要講述的主角魂迄。

image

1 基本概念

1.1 adapter

接頭,為一段已知的短核苷酸序列湿酸,用于鏈接未知的目標(biāo)測(cè)序片段

1.2 index或barcode

幾個(gè)堿基組成的寡核苷酸鏈稿械,用于在混合測(cè)序時(shí),區(qū)分不同樣本

1.3 insert

待測(cè)序的目標(biāo)序列厢呵,位于兩個(gè)adapter之間

image

測(cè)序片段包括幾個(gè)部分:universal_adapter-insert-indexed_adapter。

測(cè)序由5'端開(kāi)始寒砖,最開(kāi)始的幾個(gè)堿基無(wú)法測(cè)得,第一個(gè)adapter在數(shù)據(jù)輸出時(shí)去除漠嵌,由于測(cè)序讀長(zhǎng)的限制儒鹿,第二個(gè)adapter通常測(cè)不到约炎。

但是如果插入片段本身較短掠手,測(cè)序會(huì)測(cè)穿,即會(huì)得到 insert-部分adapter 這樣的read府寒,這里的adapter便是我們常常提到的需要去除的接頭部分。

2 序列信息

2.1 接頭序列(示例)

universal adapter:

5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’

indexed adapter:

5’-GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC(barcode)ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’

仔細(xì)看上面這對(duì)接頭序列纤房,universal adapter的3'末端的T與待測(cè)片段新增的A配對(duì)炮姨,那么剩余序列的反向互補(bǔ)鏈為
GATCGGAAGAGCGTCGTGTAGGGAAAGAGTGTAGATCTCGGTGGTCGCCGTATCATT

與 indexed adapter 的前面12個(gè)堿基一致
GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC,即兩段接頭序列部分互補(bǔ)蛾派,形成Y型的結(jié)構(gòu)洪乍。

2.2 index序列

可根據(jù)fastq序列中的信息獲取

@HWI-ST1276:71:C1162ACXX:1:1101:1208:2458 1:N:0:CGATGT

fastq的格式信息不再贅述,第一行最末的 CGATGT 即本次測(cè)序所使用的index钾埂。

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