1.5 mol/L Tris (PH8.8)
1．稱(chēng)量181.7gTris置于1L燒杯中羡滑。
2．加入約800 ml去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/span>
3．用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8恕曲。
4．定容至1L.
5．高壓滅菌后褥影，室溫保存灼捂。
注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值离例，因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1oC纵东，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位粘招。
（參照kara公司Catalog-N1）
1 mol/L Tris (PH6.8)
1．稱(chēng)量121.1gTris置于1L燒杯中。
2．加入約800 ml去離子水偎球，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/span>
3．按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需的pH值洒扎。
pH值 |
濃HCl |
6.8 |
|
7.4 |
約70 ml |
7.6 |
約60 ml |
8.0 |
約42 ml |
4．定容至1L.
5．高壓滅菌后辑甜，室溫保存。
注意：1.溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值袍冷，因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大磷醋，溫度每升高1oC，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位胡诗。2. 如1 mol/L溶液呈現(xiàn)黃色邓线，應(yīng)予丟棄，并置備質(zhì)量更好的Tris煌恢。
（參照kara公司Catalog-N1）
30％丙稀酰胺（100ml）
1．稱(chēng)量下列試劑置于燒杯中骇陈。
丙烯酰胺（Acrylamide） |
29 g |
雙丙烯酰胺?(BIS) |
1 g |
2．加入約60 ml去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/span>
3．定容至100 ml,用0.45 μm濾膜濾去雜質(zhì)瑰抵。
5．于棕色瓶中4?oC保存你雌。
注意：1. 丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性，并可通過(guò)皮膚吸收二汛，其作用具有積累性婿崭，配制時(shí)應(yīng)戴手套等。聚丙烯酰胺無(wú)毒肴颊，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作氓栈，因?yàn)橛锌赡芎猩倭康奈淳酆铣煞帧?/span>
（參照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924）
30％SDS
1．稱(chēng)量10 g高純度（電泳級(jí)）的SDS置于100~200 ml燒杯中。
2．加入約800 ml去離子水婿着，68oC加熱溶解授瘦。
3．滴加數(shù)滴濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2。
4．定容至100 ml祟身，室溫保存奥务。
（參照kara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924）
10％過(guò)硫酸銨
1．稱(chēng)量1 g過(guò)硫酸銨。
2．加入約10 ml去離子水后攪拌溶解袜硫。
3．儲(chǔ)存于4oC。
注意：10％過(guò)硫酸銨溶液在4oC保存時(shí)可使用兩周左右挡篓，超過(guò)期限會(huì)失去催化作用婉陷。
（參照Takara公司Catalog-N1和《分子克隆》二版P924）
1×SDS凝膠加樣緩沖液
50 mmol/L |
Tris·Cl (pH 6.8) |
100 mmol/L |
DTT |
2% |
SDS?（電泳級(jí)） |
0.1% |
溴酚藍(lán) |
10% |
甘油 |
不含DTT的1×SDS凝膠加樣緩沖液可保存于室溫，臨用前必須從1 mol/L DTT儲(chǔ)存液中現(xiàn)用現(xiàn)加于上述緩沖液中官研。
（參照《分子克隆》二版P884）
本人將參照此配方秽澳，配成5×或6×，各成分濃度均擴(kuò)大5倍戏羽。
另:Takara公司Catalog-N5上的5×SDS－PAGE Loading Buffer配方：
組分濃度：
250 mmol/L |
Tris·Cl (pH 6.8) |
10% (W/V) |
SDS?（電泳級(jí)） |
0.5% (W/V) |
溴酚藍(lán)（BPB） |
50% (V/V) |
甘油 |
5% (W/V) |
β-巰基乙醇（2-ME） |
配制量5 ml
配制方法
1．稱(chēng)量下列試劑置于10ml塑料離心管中担神。
1 M?Tris·Cl (pH 6.8) |
1.25 ml |
SDS?（電泳級(jí)） |
0.5 g |
溴酚藍(lán)（BPB） |
25 mg |
甘油 |
2.5 ml |
2．加去離子水溶解后定容至5 ml。
3．小份（500 ul/份）分裝后于室溫保存始花。
4．使用前將25 ul的2-ME加到每小份中妄讯。
5．加入2-ME的Loading Buffer可在室溫下保存一個(gè)月左右孩锡。
1 mol/L DTT(20 ml)
1．稱(chēng)取3.09 gDTT，加入到50 ml塑料離心管中亥贸。
2．加20 ml的0.01 M NaOAc (pH5.2)躬窜，溶解后使用0.22μm濾器過(guò)濾除菌。水配
3．分裝后－20oC保存炕置。
（參照《分子克隆》二版P884）
3 M醋酸鈉（NaOAc）（100 ml）
1．稱(chēng)取40.8 gNaOAc·3H2O置于100～200ml燒杯中荣挨，加入約40ml的去離子水后攪拌溶解。
2．加冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.2朴摊。
3．定容至100 ml默垄，高壓滅菌后室溫保存。
（參照《分子克隆》二版P884）
0.01 MNaOAc (pH5.2)?參照此配方配制甚纲。
5×Tris-Glycine Buffer（SDS-PAGE電泳緩沖液）
組分濃度：0.125 M Tris, 1.25 M Glycine, 0.5%(W/V) SDS
1．稱(chēng)量下列試劑置于燒杯中口锭。
Tris |
15.1 g |
Glycine |
94 g |
10%(W/V) SDS（電泳級(jí)） |
50 ml 或5g SDS |
2．加入約900 ml去離子水?dāng)嚢枞芙狻?/span>
3．定容至1L，室溫保存贩疙。
（參照《分子克隆》二版P884）
Transfer Buffer:
[自配]Transfer Buffer:500ml
25mMTris base,?0.2M?glycine（甘氨酸）, 20% methanol(甲醇PH8.5)
先配制1M Tris base (MW:121.1) 100ml: 12.1g Tris base + ddH2O至100ml,調(diào)PH8.5（1L約加22ml濃鹽酸）
1M12.5ml Tris base +?7.5g?glycine(MW:75.05) +100ml methanol??+ ddH2O?至400ml,調(diào)好PH值讹弯，再加ddH2O至500ml.??
先置于4oC保存?zhèn)溆谩?/span>
（參照吳興軍給Protoco,據(jù)說(shuō)優(yōu)于《分子克隆》配方）
麗春紅S儲(chǔ)存液（10×）
麗春紅S |
2 g |
三氯乙酸 |
30 g |
磺基水楊酸 |
30 g |
加水至100 ml。 |
用1份上述儲(chǔ)存液加9份去離子水即成麗春紅S使用液这溅，使用后應(yīng)予廢棄组民。
10X TBS (Tris-buffered saline):
To prepare 1 liter of 10X TBS:24.2 g?Tris base,?80 g?NaCl; adjust pH to 7.6 with HCl (use at 1X).
（參照Cell signal Technology Protoco）
Wash Buffer TBS/T:（0.05%吐溫）可用PBST代替
1X TBS, 0.1% Tween-20
[自配] Wash Buffer TBS/T:1000ml
1×TBS,0.1%Tween-20,100ml 10×TBS+ 1ml Tween-20+ 900ml ddH2O
（參照Cell signal Technology Protoco）
Blocking Buffer:（3%BSA的TBST或PBST）封閉
1X TBS, 0.1% Tween-20 with 5% w/v nonfat dry milk。
[自配]Blocking buffer:150ml
for 150ml, add 15ml 10×TBS to 135 ml water,mix.Add7.5g?nonfat milk and mix well.While strirring,add 0.15ml Tween-20(100%).
(現(xiàn)用現(xiàn)配悲靴，4oC儲(chǔ)存?zhèn)溆?
（參照Cell signal Technology Protoco）
Primary Antibody Dilution Buffer:抗體稀釋?zhuān)?/span>1%BSA TBST或PBST臭胜，不加BSA也可）
1X TBS, 0.1% Tween-20 with 5% blocking agent;
for 20 ml, add 2 ml 10X TBS to 18 ml water, mix. Add1.0 g?BSA and mix well. While stirring, add 20 μl Tween-20 (100%).
（參照Cell signal Technology Protoco）
顯色液（好用）
5mg DAB；200ul 1M Tris（PH=8.5癞尚，常用作純化液母液）耸三；9.5ml水，靜置5min（加入Tris緩沖液會(huì)變渾濁）浇揩，加入3.5ul 雙氧水仪壮，現(xiàn)用現(xiàn)配，可配好無(wú)雙氧水的10X母液分裝胳徽，-20℃保存积锅，1ml/支，用時(shí)稀釋到10ml并加入3.5ul雙氧水即可使用养盗。
?本實(shí)驗(yàn)室SDS-PAGE電泳凝膠配方如下：
本文使用 文章同步助手 同步
