RNA轉(zhuǎn)染注意事項(xiàng)
為保證RNA轉(zhuǎn)染的高效率淘讥，在轉(zhuǎn)染過程中應(yīng)注意：
純化RNA
在轉(zhuǎn)染前要確認(rèn)RNA的大小和純度甚带。為得到高純度的RNA鸟召，推薦用玻璃纖維結(jié)合扣草，洗脫或通過15-20%丙烯酰胺膠除去反應(yīng)中多余的核苷酸了牛，小的寡核苷酸，蛋白和鹽離子辰妙。注意：化學(xué)合成的RNA通常需要跑膠電泳純化（即PAGE膠純化）鹰祸。
避免RNA酶污染
微量的RNA酶將導(dǎo)致RNA實(shí)驗(yàn)失敗。由于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中RNA酶普遍存在密浑，如皮膚蛙婴，頭發(fā)，所有徒手接觸過的物品或暴露在空氣中的物品等尔破，此保證實(shí)驗(yàn)每個步驟不受RNA酶污染非常重要街图。
健康的細(xì)胞培養(yǎng)物和嚴(yán)格的操作確保轉(zhuǎn)染的重復(fù)性
通常浇衬，健康的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較高。此外餐济，較低的傳代數(shù)能確保每次實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞的穩(wěn)定性耘擂。為了優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，推薦用50代以下的轉(zhuǎn)染細(xì)胞颤介，否則細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率會隨時間明顯下降梳星。
選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑
針對RNA制備方法以及靶細(xì)胞類型的不同赞赖，選擇好的轉(zhuǎn)染試劑和優(yōu)化的操作對RNA實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要滚朵，如Entranster試劑。
siRNA轉(zhuǎn)染注意事項(xiàng)
為了達(dá)到高的轉(zhuǎn)染效率前域，在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)過程中辕近，需要注意以下幾點(diǎn)：
純化siRNA
siRNA的濃度和純度對轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)非常重要。為得到高純度的siRNA匿垄，推薦用玻璃纖維結(jié)合移宅，洗脫或通過15-20%丙烯酰胺膠除去反應(yīng)中多余的核苷酸，小的寡核苷酸椿疗，蛋白和鹽離子漏峰。注意：化學(xué)合成的RNA通常需要跑膠電泳純化（即PAGE膠純化）。
避免RNA酶污染
微量的RNA酶將導(dǎo)致siRNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)失敗届榄。由于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中RNA酶普遍存在浅乔，如皮膚，頭發(fā)铝条，所有徒手接觸過的物品或暴露在空氣中的物品等靖苇，因此保證實(shí)驗(yàn)中的每個環(huán)節(jié)不受RNA酶污染非常重要。
健康的細(xì)胞培養(yǎng)物和嚴(yán)格的操作確保轉(zhuǎn)染的重復(fù)性
通常班缰，健康的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率較高贤壁。此外，較低的傳代數(shù)能確保每次實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞的穩(wěn)定性埠忘。為了優(yōu)化實(shí)驗(yàn)脾拆，推薦用50代以下的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，否則細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率會隨時間明顯下降莹妒。
選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑
針對siRNA制備方法以及靶細(xì)胞類型的不同名船，選擇好的轉(zhuǎn)染試劑和優(yōu)化的操作對siRNA實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要。如Entranster試劑动羽。
通過合適的陽性對照優(yōu)化轉(zhuǎn)染和檢測條件
對大多數(shù)細(xì)胞包帚，看家基因是較好的陽性對照。將不同濃度的陽性對照的siRNA轉(zhuǎn)入靶細(xì)胞（同樣適合實(shí)驗(yàn)靶siRNA）运吓，轉(zhuǎn)染48小時后統(tǒng)計(jì)對照蛋白或mRNA相對于未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的降低水平渴邦。過多的siRNA將導(dǎo)致細(xì)胞毒性以至死亡疯趟。
通過標(biāo)記siRNA來優(yōu)化實(shí)驗(yàn)
熒光標(biāo)記的siRNA能用來分析siRNA穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)染效率。標(biāo)記的siRNA還可用作siRNA胞內(nèi)定位及雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)（配合標(biāo)記抗體）來追蹤轉(zhuǎn)染過程中導(dǎo)入了siRNA的細(xì)胞谋梭，將轉(zhuǎn)染與靶蛋白表達(dá)的下調(diào)結(jié)合起來信峻。
