240 發(fā)簡信
IP屬地:江蘇
  • 可以對比一下BIOG的操作:1.請自行準備:無水乙醇、15mL離心管浩考。
    2.取出洗滌液,按以下操作:
    a) 洗滌液A:31.5mL加入13.5mL無水乙醇被盈;63mL加入27mL無水乙醇。
    b) 洗滌液B:13.5mL加入31.5mL無水乙醇只怎;27mL加入63mL無水乙醇。
    c) 配制好的洗滌液如出現沉淀尝盼,可在37℃溶解吞滞,搖勻后使用盾沫。
    3.取15mL離心管裁赠,加入1500μL樣本赴精,30μLDNA Carrier混合均勻佩捞,加入1500μL 裂解液及150μL 消化液蕾哟,振蕩混勻一忱,56℃水浴10 分鐘。
    4.加入6000μL無水乙醇帘营,輕輕顛倒混勻票渠,如有半透明懸浮物芬迄,不影響DNA的提取與后續(xù)實驗问顷。
    5.將吸附柱放入收集管內,將4590μL上述溶液轉入吸附柱內杜窄,靜置2 分鐘,5,000 rpm 離心2分鐘塞耕,棄收集管內廢液;
    6.將吸附柱放回收集管內嘴瓤,將剩余4590μL溶液轉移至吸附柱內,重復步驟5纱注。
    7.將吸附柱放回收集管內,加3750μL 洗滌液A至吸附柱內狞贱,5,000 rpm 離心1 分鐘,棄收集管內廢液瞎嬉。
    8.將吸附柱放回收集管內,加3750μL 洗滌液B至吸附柱內厚柳,5,000 rpm 離心1 分鐘,棄收集管內廢液别垮。
    9.將吸附柱放回收集管內便监,5,000 rpm 離心2 分鐘碳想,離去殘留的洗滌液烧董。
    10.取出吸附柱,放入新的15 mL離心管內胧奔,加入250-400μL 洗脫液逊移,靜置3 分鐘龙填,5,000 rpm離心3 分鐘拐叉,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步實驗或-20℃保存扇商。如需濃縮核酸,則可繼續(xù)進行后續(xù)步驟钳吟。
    11.于洗脫液中加入800ul無水乙醇廷粒,輕輕顛倒混勻红且,5,000 rpm 離心5分鐘,棄上清暇番。
    12.開蓋室溫放置5min嗤放,待乙醇揮發(fā)后壁酬,加入30-50ul洗脫液溶解核酸次酌。提取的DNA即可用于下一步實驗或-20℃保存舆乔。

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    2.過夜培養(yǎng)绅这。
    B. DeofectEU /DNA復合物包裝(該步完成后應立即轉染):
    1.在1.5 ml無菌離心管中加入50μl無血清培養(yǎng)基涣达,并添加適量的轉染試劑(2~5μl/μg DNA,參見下表) 证薇。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5~10分鐘度苔。
    2.在1.5 ml無菌離心管中加入50μl無血清培養(yǎng)基,并添加適量的DNA (0.8~1μgDNA/孔寇窑, 參見附表)。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5~10分鐘箩张。
    3.將DeofectEU-培養(yǎng)基混合物滴加至DNA-培養(yǎng)基混合物中甩骏,用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15~20分鐘后,立即轉染饮笛。注意: DeofectEU-培養(yǎng)基混合物和DNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要咨察,切勿顛倒。

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