C2C12細胞株是YaffeD,SaxelO建立的小鼠成肌細胞系的亞株粹庞。該細胞分化較快，可形成能收縮的微管瞎惫，產(chǎn)生特異的肌肉蛋白。在骨形態(tài)形成蛋白（BMP-2）的作用下，該細胞可由成肌細胞分化為成骨細胞伶棒。檢測發(fā)現(xiàn)該細胞鼠痘病毒陰性躺盛。
|?細胞復蘇
溶解細胞過程要迅速项戴；已溶解的凍存細胞不能在常溫下存放太久，需要盡快離心去除DMSO槽惫。
|?細胞凍存
凍存條件
60%基礎培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO周叮，液氮儲存。
【推薦海星HyCyte?一步凍存液(即用型界斜、無血清仿耽、無需程序降溫)】
細胞凍存步驟
1.常規(guī)方法收集對數(shù)期的貼壁 細胞或懸浮細胞于離心管中。
2.按照培養(yǎng)細胞密度和所用細胞凍存管的大小計算所需凍存細胞數(shù)(參考數(shù)量: 5x10^5~ 5x10^6cells/mL)各薇。
3.離心收集細胞项贺。(參考離心條件: 4℃， 250g峭判，離心4~6 min)开缎。
4.收集培養(yǎng)細胞沉淀， 徹底棄去離心管中的上清液朝抖。
5.加入適量的HyCyte? 一步凍存液于離心管中啥箭。輕柔地混勻細胞，制成細胞混合液治宣。
6.將離心管中的細胞混合液分裝于已標記的凍存管中急侥，建議每管1 mL或1.5 mL砌滞。
7. 立即將凍存管直接置于-80°C冰箱中(直立放置)完成"一步"凍存操作, 24小時后移入液氮或者-80C長期保存。
細胞凍存時坏怪，盡量吹散細胞贝润，注意控制吹打力度。
|?細胞培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基：DMEM-H+10%FBS+1%P/S
推薦傳代比例：1:3-1:6铝宵，每2-3天換液一次
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2打掘，溫度：37℃
|?傳代操作
去掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，加入PBS進行沖洗鹏秋，并去上清;
加入胰酶進行潤洗尊蚁，并去上清;
放入CO2培養(yǎng)箱消化2-4min;
加入完全培養(yǎng)基終止消化，并吹打均勻侣夷。
|?常見問題
1. 為什么會出現(xiàn)空泡横朋？
可能是鋪板時鋪得不夠均勻，局部過于密集百拓，密集地方的細胞就開始狀態(tài)變差琴锭、空泡增多。也可能是血清差衙传，需要更換優(yōu)質血清决帖，及時換液。
2. 為什么細胞長得慢蓖捶？
可能是細胞接種得太少地回，細胞密度太低】∮悖可以先培養(yǎng)落君，然后消化重新鋪瓶，提高密度培養(yǎng)亭引。
3. 為什么細胞狀態(tài)變差，容易漂皮获？
可能是血清問題焙蚓，建議換血清，并注意血清要程序解凍洒宝，不能水浴化開购公；也有可能是細胞生長密集，需要及時傳代雁歌，并不是細胞長滿才傳代宏浩，當有個別地方長得過于密集，容易疊加的時候應該就要傳代了靠瞎。
|?注意事項
在培養(yǎng)過程中比庄，保持細胞匯合度30％～90％
每一步操作都要輕柔小心求妹，以免細胞受損
選用優(yōu)質培養(yǎng)基，減少有害物質對細胞的刺激
