實(shí)驗(yàn)步驟:樣本制備
關(guān)鍵控制點(diǎn):
1)避免靶標(biāo)蛋白的降解
①添加復(fù)合蛋白酶抑制劑撮胧。
②涉及蛋白修飾的教寂,添加相應(yīng)的去修飾酶抑制劑钢猛。
2)富集靶標(biāo)蛋白
①選擇合適的裂解液锈嫩。
②超聲破碎處理。
3)低溫環(huán)境
①樣本在制備過(guò)程中甥角,始終置于冰上 网严。
4)蛋白變性
①蛋白95℃變性5-10min。
②多次跨膜蛋白嗤无,建議不煮樣震束。
5)濃度測(cè)定
①通過(guò)Bradfard分析、Lowry分析或BCA分析測(cè)定樣本蛋白濃度翁巍。