C2C12細胞株是YaffeD,SaxelO建立的小鼠成肌細胞系的亞株。該細胞分化較快，可形成能收縮的微管，產(chǎn)生特異的肌肉蛋白篙骡。在骨形態(tài)形成蛋白（BMP-2）的作用下，該細胞可由成肌細胞分化為成骨細胞丈甸。檢測發(fā)現(xiàn)該細胞鼠痘病毒陰性糯俗。
細胞名稱：小鼠成肌細胞(經(jīng)成肌管分化能力驗證)
細胞簡稱：C2C12
產(chǎn)品貨號：TCM-C720
細胞形態(tài)：成肌細胞樣
生長特性：貼壁生長
培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1% Sodium Pyruvate+1%P/S
配套培養(yǎng)基貨號：TCM-G720
傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次
傳代周期：48-72 h
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2睦擂，溫度：37℃
凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO得湘，液氮儲存
質(zhì)量檢測：細菌、真菌顿仇、支原體檢測均為陰性
C2C12細胞培養(yǎng)注意要點
1. 細胞貼壁較弱
該細胞貼壁比較弱淘正，消化時間偏短，注意控制消化時間夺欲。另外跪帝，在遇到運輸震蕩、低溫些阅、室溫靜置太長時間、添加的培養(yǎng)基或其他試劑過冷等情況時會出現(xiàn)明顯的細胞回縮變粗變短甚至脫落的現(xiàn)象斑唬，及時放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)后可恢復(fù)正常市埋。?
2. 注意控制細胞密度
密度過高和過低都會影響細胞狀態(tài)黎泣。密度過低時，細胞生長速度減慢缤谎；長滿后長時間高密度培養(yǎng)將導(dǎo)致細胞受損抒倚，可能影響后續(xù)實驗。建議細胞生長至80%密度時立即傳代坷澡。
3. 細胞生長較快
注意每天觀察細胞密度和培養(yǎng)基顏色托呕，及時換液或傳代。應(yīng)注意每天傳代對細胞不利频敛，通過控制接種密度將傳代頻率保持在2天左右傳一次為宜项郊。
4. 培養(yǎng)時背景中可能有黑點
背景中存在少量黑點，為細胞代謝產(chǎn)物和細胞碎片斟赚，不影響細胞生長着降。若碎片較多可以通過PBS潤洗或換液清除。
5.?細胞復(fù)蘇要點
溶解細胞過程要迅速拗军；已溶解的凍存細胞不能在常溫下存放太久任洞，需要盡快離心去除DMSO。
6.?其他注意事項
（1）在培養(yǎng)過程中发侵，保持細胞匯合度30％～90％
（2）每一步操作都要輕柔小心交掏，以免細胞受損
（3）選用優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基，減少有害物質(zhì)對細胞的刺激
C2C12細胞常見問題
1. 為什么會出現(xiàn)空泡刃鳄？
可能是鋪板時鋪得不夠均勻盅弛，局部過于密集，密集地方的細胞就開始狀態(tài)變差铲汪、空泡增多熊尉。也可能是血清差，需要更換優(yōu)質(zhì)血清掌腰，及時換液狰住。
2. 為什么細胞長得慢？
可能是細胞接種得太少齿梁，細胞密度太低催植。可以先培養(yǎng)勺择，然后消化重新鋪瓶创南，提高密度培養(yǎng)。
3. 為什么細胞狀態(tài)變差省核，容易漂稿辙？
可能是血清問題，建議換血清气忠，并注意血清要程序解凍邻储，不能水浴化開赋咽；也有可能是細胞生長密集，需要及時傳代吨娜，并不是細胞長滿才傳代脓匿，當有個別地方長得過于密集，容易疊加的時候應(yīng)該就要傳代了宦赠。
C2C12細胞凍存
1. 待細胞生長至可傳代的密度陪毡，即可準備凍存。
2. 消化細胞勾扭，取少量細胞懸液計數(shù)毡琉。細胞懸液經(jīng)250 g離心4 min。
3. 離心后去除上清尺借，用適量4℃預(yù)冷的凍存液重懸細胞绊起。將細胞按比例或數(shù)量分裝至凍存管中。一般凍存密度為(1.0~2.0)×10^6個/mL燎斩。
注意：細胞長時間在非培養(yǎng)條件下放置會嚴重影響細胞的狀態(tài)虱歪。如離心后用凍存液重懸計數(shù)，請將細胞放置于4℃冰箱內(nèi)栅表，以減弱細胞代謝笋鄙，較好的保持細胞狀態(tài)。
4. 如使用海星一步凍存液怪瓶，凍存管直接豎直放入-80℃冰箱即可完成“一步”凍存萧落。如使用程序凍存液，需將凍存管放入提前預(yù)冷的程序降溫盒后放入-80℃冰箱洗贰。
注意：細胞凍存時找岖，盡量吹散細胞，注意控制吹打力度敛滋。
5. 24小時后可將凍存管轉(zhuǎn)移到液氮進行長期保存许布。
注意：細胞不可長期保存在-80℃冰箱中。建議24 h后盡快轉(zhuǎn)移至液氮中绎晃。
