比如我現(xiàn)在需要表達FUS這個蛋白，首先我要確定FUS的CDS區(qū)序列幔崖，使用NCBI即可獲得信认；
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可以看出FUS有三個同源異構體，我們以第一個X1為例來說明青责；
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這是其CDS區(qū)序列信息挺据；
下面為編碼蛋白信息
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我們一般設計引物格式為
F: 5‘-保護堿基+酶切位點+Kozak（可選）+ATG+一小段目的基因序列（一般18或21個堿基）
R：5‘-保護堿基+酶切位點+終止密碼子+（如果你有要表達的標簽序列）+一小段目的基因序列
注：終止密碼子一般構建截短體的時候需要，詳情請見“截短體引物設計”
如果我選擇的內(nèi)切酶是cla1 and kpn1
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Forword seq
FUS（Cla1）-F：CC ATCGAT GG ATG GCCTCAAACGATTAT
格式為：保護堿基+ATG(不需要可以加入脖隶，全序列前3個堿基均是起始密碼子）+序列扁耐；
此處沒加Kozak序列的原因是不想讓引物太長，我們選擇的細胞株中FUS高表達产阱，不需要增強轉(zhuǎn)錄婉称；
Reverse seq
FUS（Kpn1）-R：GG GGTACC CC TTAATACGGCCTCTCCCT
此處沒有終止密碼子的原因是，CDS區(qū)的最后含有終止密碼子，所以直接是序列王暗，截短體或者要擴增一個基因的特定區(qū)域序列則是要加終止密碼子悔据；
