一代承、核酸提取與純化介紹
核酸提取是分子生物學(xué)的基本組成部分安岂，因高質(zhì)量的核酸是分子生物學(xué)上的應(yīng)用至關(guān)重要褂始。
我們將會(huì)總結(jié)一些現(xiàn)用核酸提取技術(shù)和針對(duì)樣品類型選擇正確提取方法的小建議景埃；也會(huì)提及評(píng)估核酸濃度和質(zhì)量，以及核酸提取過程中的常見問題粱哼。
a. 為什么需要核酸提燃径？
核酸提取為大量廣泛研究和應(yīng)用提供了答案（例如：克隆皂吮、qRT-PCR和全基因組戒傻、轉(zhuǎn)錄組范疇中的二代測(cè)序技術(shù)）税手，獲得的核酸可以多種方式進(jìn)行應(yīng)用蜂筹。
準(zhǔn)確的研究目的，決定了要提取的核酸類型芦倒；核酸的應(yīng)用往往影響提取方法的選擇艺挪。（例如：標(biāo)準(zhǔn)的End-point PCR反應(yīng)，不需要與全基因組測(cè)序?qū)嶒?yàn)相同的DNA質(zhì)量）
為了確定最佳的研究方法，有必要清楚了解核酸的下游應(yīng)用以及任何與樣品類型相關(guān)的潛在限制麻裳。（例如口蝠，臨床樣品采集量往往有限，核酸提取存在挑戰(zhàn)津坑。）??
雖然依據(jù)樣品類型妙蔗，細(xì)胞裂解方式不同，但整體的核酸提取核心原則不變：細(xì)胞或組織樣品裂解疆瑰，去除非核酸污染物（例如眉反，蛋白質(zhì)等）。
提取核酸的原因：
①為了分析基礎(chǔ)研究和疾病研究中的基因表達(dá)穆役；?
②跟蹤對(duì)藥物治療的反應(yīng)（例如寸五，在抗病毒治療期間和之后監(jiān)測(cè)病毒滴度）。
③識(shí)別新物種并深入了解進(jìn)化過程（例如耿币，Ancient DNA分析）梳杏。?
④對(duì)人類、動(dòng)物和植物中引起傳染病暴發(fā)的病原體進(jìn)行監(jiān)測(cè)和分類淹接。?
⑤通過微生物檢測(cè)和量化監(jiān)測(cè)食品和水安全十性。?
⑥診斷疾病（如基因疾病蹈集，癌癥烁试，免疫學(xué)缺陷）。
b. 細(xì)胞裂解的方法
細(xì)胞裂解在很大程度上取決于樣品類型拢肆，更堅(jiān)固的組織减响，如植物，與哺乳動(dòng)物相比則需要更大的力量進(jìn)行處理郭怪。?
細(xì)胞裂解方法分為三大類：機(jī)械裂解支示、酶裂解和化學(xué)裂解。??
這個(gè)三種分析方法的基本原理和每種方法的優(yōu)缺點(diǎn)如下：
方法一：機(jī)械裂解
機(jī)械裂解：細(xì)胞膜被外力破壞鄙才。?
優(yōu)勢(shì)：?
效率高颂鸿，速度快；??
快速裂解縮短了從采集樣本到分離核酸的時(shí)間攒庵，這在基因表達(dá)分析實(shí)驗(yàn)中可能是至關(guān)重要的嘴纺；
非常適合于難以溶解的樣品（例如，植物材料浓冒，絲狀真菌和酵母）栽渴。?
劣勢(shì)：?
根據(jù)使用的方法，多樣本處理時(shí)比較耗時(shí)（例如稳懒，人工手動(dòng)研磨處理）闲擦；
大量樣品處理耗時(shí)，可能會(huì)增加樣品降解的風(fēng)險(xiǎn)；
機(jī)械處理會(huì)在樣本中產(chǎn)生熱量墅冷，導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集和核酸降解纯路；l需要一些特殊工具或儀器。
方法二：酶裂解
添加一種酶來消化蛋白質(zhì)或細(xì)胞結(jié)構(gòu)寞忿，如酵母細(xì)胞壁和絲狀真菌驰唬。?
優(yōu)勢(shì)：
實(shí)驗(yàn)室中的理想方法，過程中無需機(jī)械裂解設(shè)備腔彰；?
選擇性的去除細(xì)胞壁定嗓，留下細(xì)胞部分采用另一種裂解方式（通常是化學(xué)裂解），方法靈活萍桌，避免了一些由機(jī)械裂解產(chǎn)生的破壞宵溅。?
劣勢(shì)：?
耗時(shí)（酶消化可能需要1小時(shí)）而且價(jià)格昂貴；??
由于酶誘導(dǎo)的細(xì)胞變化可能影響基因表達(dá)上炎，因此不適合進(jìn)行基因表達(dá)分析恃逻。
方法三：化學(xué)裂解
在化學(xué)分解過程中，細(xì)胞被一種能分解脂膜的洗滌劑清洗藕施，從而釋放細(xì)胞成分寇损。除洗滌劑外，化學(xué)裂解緩沖液通常含有離液鹽裳食，如鹽酸胍或尿素矛市，這有助于破壞降解新暴露核酸蛋白質(zhì)（如核酸酶）的穩(wěn)定性，并使核酸與二氧化硅基質(zhì)結(jié)合诲祸∽抢簦化學(xué)裂解緩沖液的確切組成取決于應(yīng)用方向和樣品類型。?
優(yōu)勢(shì)：?
價(jià)格便宜救氯，操作簡(jiǎn)單找田，速度快；無需專用設(shè)備着憨。?
劣勢(shì)：??
破壞細(xì)胞膜的洗滌劑通常也會(huì)溶解其他細(xì)胞膜墩衙，從而釋放其成分。這種方法不適于細(xì)胞器特異性核酸的提燃锥丁漆改；
雖然這項(xiàng)技術(shù)對(duì)大腸桿菌有效，但對(duì)革蘭氏陽性細(xì)菌准谚、植物細(xì)胞或真菌細(xì)胞無效挫剑，因?yàn)榇嬖谧柚瓜礈靹┻M(jìn)入細(xì)胞膜的硬細(xì)胞壁；??
在大腸桿菌樣品中同時(shí)加入洗滌劑和離液鹽可能會(huì)影響質(zhì)粒DNA和基因組DNA的區(qū)別能力氛魁。但是暮顺，可以采取步驟區(qū)分這些類型，稍后討論秀存。?
化學(xué)物質(zhì)會(huì)給研究人員帶來危險(xiǎn)捶码。
c. 核酸純化原理的理解
在細(xì)胞裂解后，核酸被選擇性的從周圍細(xì)胞成分中釋放出來或链，集中在水溶液或合適的緩沖溶液中以供下有使用惫恼。細(xì)胞理解后的步驟，統(tǒng)稱為純化澳盐。由于分離的核酸化學(xué)性質(zhì)不變祈纯，無論樣品類型如下，下面描述的純化策略通常適用于所有樣品類型叼耙。
①離心柱（Spin Columns）
該方法通常跟試劑盒緊密相關(guān)腕窥，離心柱提取和純化可以快速獲得高質(zhì)量DNA、質(zhì)粒筛婉、RNA和PCR產(chǎn)物簇爆，而無需進(jìn)行新鮮試劑制備。離心柱含有硅膠或?qū)Ｓ袠渲墓腆w基質(zhì)爽撒，用于選擇性結(jié)合核酸入蛆。
典型離心柱提取操作步驟：
A.裂解的樣本保留至離心柱：?
裂解后的樣品，收集在含有離液鹽的結(jié)合緩沖液中硕勿，置于旋轉(zhuǎn)柱哨毁。結(jié)合緩沖液允許核酸與水溶液分離并與柱基質(zhì)結(jié)合。
B.核酸的結(jié)合：
離心使整個(gè)樣品與柱基質(zhì)接觸源武。樣本中的核酸選擇性地與柱結(jié)合扼褪，而其他細(xì)胞組件通過（這通常稱為流過）柱基質(zhì)。
C.洗滌：
結(jié)合后粱栖，對(duì)柱子進(jìn)行清洗迎捺，以去除可能嚴(yán)重影響下游應(yīng)用的任何殘留污染物，如蛋白質(zhì)或殘留鹽類查排。清洗次數(shù)取決于試劑盒凳枝。一些洗滌緩沖液中含有離液鹽以去除蛋白質(zhì)，有些緩沖液中含有高濃度的乙醇以去除鹽類跋核。大多數(shù)試劑盒都幾乎全部包括由乙醇組成的緩沖液作為最后清洗步驟岖瑰，以確保完全除鹽。
D.離心柱殘留乙醇的去除：
清洗后砂代，有時(shí)會(huì)進(jìn)行短時(shí)間的空離心以去除殘留乙醇蹋订。
E.洗脫：
從基質(zhì)中洗脫核酸，加入少量的水或洗脫緩沖液*刻伊，柱子靜置幾分鐘露戒。自上一步椒功，離液鹽已經(jīng)被去除，洗脫緩沖液能夠使核酸再水化智什，使核酸與柱基質(zhì)分離动漾。最后一次離心可以將含有核酸樣品的水溶液轉(zhuǎn)移到新的離心管中。
*核酸通常儲(chǔ)存在含有Tris和EDTA（TE緩沖液）的緩沖液中荠锭。EDTA的存在有助于抑制核酸酶活性旱眯。雖然TE緩沖液對(duì)抑制核酸酶是有效的，TE中EDTA的含量通常比大多數(shù)的Mg2+含量低幾個(gè)數(shù)量級(jí)证九。
離心柱的優(yōu)劣勢(shì)：
優(yōu)勢(shì)：?
低成本?
高效可靠?
產(chǎn)生核酸適用于用于下游應(yīng)用?
劣勢(shì)：
生長(zhǎng)緩慢的菌株核酸量低?
洗脫不完全導(dǎo)致核酸流失?
離心柱的結(jié)合能力決定了核酸的總量
質(zhì)粒離心柱試劑盒
質(zhì)粒提取試劑盒可以從大腸桿菌中快速分離質(zhì)粒删豺，是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)用最廣泛的試劑盒之一。
由于大腸桿菌易于化學(xué)裂解愧怜，質(zhì)粒試劑盒將樣品裂解和核酸純化結(jié)合如下：?
A.在細(xì)胞碎片被離心沉淀之前呀页，細(xì)菌細(xì)胞在離心管中裂解；?
B.裂解液的配置使得只有質(zhì)粒DNA在裂解后可以跟離心柱結(jié)合拥坛。因此赔桌，細(xì)胞裂解液通過離心可以立即掛載到柱上。?
C.將含有裂解物的質(zhì)粒與離心柱結(jié)合渴逻，剩余的純化步驟與所有其他離心柱方案相似疾党。?
D.水或TE緩沖液中洗脫使用高質(zhì)量質(zhì)粒DNA。
**大多數(shù)離心柱試劑盒在裂解過程中將質(zhì)粒DNA與基因組DNA（gDNA）進(jìn)行區(qū)分惨奕。裂解緩沖液中含有氫氧化鈉和十二烷基硫酸鈉雪位，使質(zhì)粒和gDNA完全變性。接下來的步驟梨撞，中和了樣本雹洗，使質(zhì)粒DNA重獲新生。然而卧波，高分子量的gDNA不能完全重新結(jié)合时肿，并且容易與樣品中的蛋白質(zhì)纏結(jié)，從而阻止gDNA與離心柱結(jié)合港粱，從而導(dǎo)致其去除螃成。盡管在效率和可靠性上，質(zhì)粒離心柱試劑盒存在一些缺點(diǎn)查坪。試劑盒的優(yōu)化標(biāo)準(zhǔn)主要是通過大腸桿菌菌株寸宏，生長(zhǎng)緩慢或不穩(wěn)定的菌株可能會(huì)發(fā)生低產(chǎn)量。此外偿曙，質(zhì)粒試劑盒和離心柱試劑盒的結(jié)合能力有限氮凝，根據(jù)試劑盒的不同，總回收率在50到100μg之間望忆。
其他離心柱試劑盒
除核酸提取外罩阵，離心柱還用于核酸的純化和濃縮竿秆。純化試劑盒，可用于移除PCR或其他酶制劑反應(yīng)中未被發(fā)生反應(yīng)的殘留試劑稿壁，并從瓊脂糖凝膠中純化DNA幽钢。濃縮樣品可以為許多下游應(yīng)用提供更大的靈活性。??
一些商業(yè)離心柱試劑盒具有片段篩選的功能常摧，允許根據(jù)研究目的選擇合適的篩選片段范圍試劑盒（例如，小RNA）威创。這是通過改變緩沖溶液中的乙醇含量來實(shí)現(xiàn)的落午。??
許多離心柱試劑盒結(jié)合了細(xì)胞裂解和核酸純化，我們便可從幾乎任何類型的樣本中找到分離核酸的離心柱肚豺，包括但不限于昆蟲溃斋、植物、種子吸申、真菌梗劫、細(xì)菌、唾液截碴、血液梳侨、糞便和石蠟包埋樣品。
② 苯酚/氯仿和乙醇沉淀
苯酚/氯仿提取法是一種依靠溶解度不同原理分離核酸的方法日丹。樣品暴露于給定比例苯酚/氯仿混合液中獲取所需的核酸走哺。蛋白質(zhì)可溶與苯酚/氯仿，核酸可溶于水哲虾。當(dāng)苯酚/氯仿溶液與樣品混合時(shí)丙躏，蛋白質(zhì)和核酸被分離，為純化提供保障束凑。
對(duì)于RNA和DNA的雙重提取晒旅，此過程可通過添加酸性苯酚進(jìn)行調(diào)整。這使得過量的H+離子與磷酸鹽骨架相互作用汪诉，導(dǎo)致DNA不帶電废恋。DNA將溶解在酚/氯仿萃取的酚層中，而RNA由于其天然的酸性扒寄，將保持溶解在水相中拴签。離心后可以分離水相和有機(jī)相，并且每相都可以進(jìn)行乙醇沉淀旗们。
經(jīng)典苯酚/氯仿和乙醇沉淀的操作步驟：
A.苯酚和氯仿的接觸：
裂解的樣品與苯酚/氯仿通常通過強(qiáng)旋渦混合蚓哩。旋渦確保所有有機(jī)成分都能與苯酚/氯仿混合物充分相互作用，以達(dá)到完全溶解和去除的目的上渴。
B.離心：A步驟后岸梨，可見兩個(gè)相喜颁。含有核酸的水相位于頂部，而底部的有機(jī)相含有蛋白質(zhì)曹阔、脂質(zhì)和其他大分子半开。然后離心樣品以完全分離這兩個(gè)相
C.相分離：用移液管小心地除去水相。?
D.乙醇沉淀：用乙醇沉淀赃份、純化核酸寂拆。在乙醇沉淀過程中，加入鹽和乙醇以緩沖水溶液中的核酸抓韩。鹽緩沖糖磷酸骨架纠永，乙醇改變?nèi)芤旱慕殡姵?shù)。這使得核酸能夠從水溶液中分離出來谒拴，從而可以通過高速離心分離尝江。
E.重懸：在水或TE緩沖液中重新溶解成團(tuán)的DNA或RNA。
苯酚/氯仿提取的優(yōu)英上、劣勢(shì)：
優(yōu)勢(shì)：?
效率高炭序，通常比離心柱的產(chǎn)量高；ü適用于提取完整的高分子量DNA（如苍日，gDNA）惭聂；??
懸浮在復(fù)雜溶液中的樣品通常仍適用于該方法，而一些揮發(fā)性化合物可干擾離心柱柱基質(zhì)相恃；
對(duì)于脂肪類型樣品（如彼妻，腦組織），苯酚/氯仿提取優(yōu)于大多數(shù)離心柱試劑盒豆茫。
劣勢(shì)：
如果處理不當(dāng)侨歉，苯酚和氯仿是有害的，必須在通風(fēng)柜中極其小心地進(jìn)行處理揩魂。??
這種方法比離心柱試劑盒要費(fèi)時(shí)幽邓，而且可能導(dǎo)致較低的得率。??
核酸提取物中含有微量的苯酚和氯仿會(huì)對(duì)下游的酶反應(yīng)產(chǎn)生負(fù)面影響火脉，如牵舵，PCR。如果是這種情況倦挂，則需要在PCR之前清除畸颅。因此，有許多離心柱純化試劑盒方援。??
要有把握地提取不含污染物的水相没炒，可能需要一點(diǎn)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。
③提高通量的自動(dòng)化方法
根據(jù)核酸的應(yīng)用和樣本類型的不同犯戏，可選擇適合的高通量提取方法送火。最常用的是磁珠提取拳话。在這項(xiàng)技術(shù)中，正電荷磁珠被引入到樣品中种吸，DNA在低pH下與帶正電荷的磁珠結(jié)合弃衍，在高pH下釋放DNA。珠子可以通過磁鐵去除坚俗，溶液的pH可以很容易的調(diào)節(jié)镜盯，以分離所需核酸。這項(xiàng)技術(shù)快速高效猖败，但在自動(dòng)化設(shè)備上的投資可能會(huì)相當(dāng)昂貴速缆。（磁珠的包被材料不同，原理略有差異辙浑。）
d. 關(guān)鍵因子及對(duì)提取的影響
在進(jìn)行核酸提取或純化時(shí)激涤，必須密切注意一些因素拟糕，如pH值判呕、鹽濃度、溫度送滞、緩沖體積和潛在的乙醇污染侠草。這些因素中的每一個(gè)都會(huì)極大地影響下游實(shí)驗(yàn)的得率、質(zhì)量和成功率犁嗅。
1.非最適pH值或鹽濃度可改變核酸的電荷边涕，導(dǎo)致核酸不能與離心柱結(jié)合，或?qū)е卤椒?氯仿錯(cuò)誤的溶解核酸。?
2.緩沖液體積不正確，可導(dǎo)致不完全裂解锭部，中和或間接稀釋洗脫的核酸狡蝶。?
3.乙醇污染可以抑制下游的酶反應(yīng)，并使樣品從瓊脂糖凝膠中飄浮出來终抽。
e. 特殊情況
1.高分子質(zhì)量DNA的提取
對(duì)于某些應(yīng)用（如，Southern雜交和一些測(cè)序過程），提取完整的高分子量（HMW）DNA是必要的著隆。要提取HMWDNA，除了上述因素外呀癣，還需要考慮其他因素：
HMW-DNA在提取過程中容易斷裂美浦。因?yàn)榧羟辛Γu流、超聲波等）可導(dǎo)致DNA分子的分解项栏，從而在提取后產(chǎn)生較短的片段浦辨。為了避免這一點(diǎn)，對(duì)樣本施加最小的剪切力沼沈。
對(duì)于需要對(duì)HMWDNA進(jìn)行可視化的應(yīng)用荤牍，可以在瓊脂糖凝膠塞中進(jìn)行裂解和提取案腺，從而在整個(gè)過程中穩(wěn)定DNA（例如，脈沖場(chǎng)凝膠電泳）康吵，其中整個(gè)染色體保持完整劈榨，并通過電泳顯現(xiàn)。
堿裂解常常導(dǎo)致HMW-DNA的丟失晦嵌，因?yàn)樵谧冃赃^程中同辣，HMW-DNA會(huì)發(fā)生不可逆的纏結(jié)。
如果使用離心柱提取HMW-DNA惭载，考慮柱基質(zhì)的結(jié)合容量大小旱函。一些色譜柱只能處理10-15kb大小的片段，因?yàn)橛捎诰o密結(jié)合描滔，較大片段很難從色譜柱中洗脫棒妨。對(duì)于較大的碎片，可能需要考慮高HMW結(jié)合的專用柱含长，或手動(dòng)方法券腔，如苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀。
2.SmallRNAs?
在傳統(tǒng)的RNA提取過程中拘泞，小RNA分子經(jīng)常丟失纷纫，因?yàn)閭鹘y(tǒng)的離心柱通常有大約100個(gè)堿基對(duì)的尺寸限制，盡管尺寸限制值很大程度上取決于緩沖液的配方陪腌。小RNA分子對(duì)于理解生物功能極其重要辱魁，所以大多數(shù)總RNA提取純化試劑盒都經(jīng)過優(yōu)化以捕獲這些小RNA。
二诗鸭、評(píng)估提取的核酸
a. 定量與質(zhì)控
在核酸提取和純化之后染簇，了解提取樣品的濃度和質(zhì)量是非常重要的。根據(jù)下游實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌堪叮@些參數(shù)的波動(dòng)會(huì)極大地改變結(jié)果锻弓。例如，如果每個(gè)cDNA合成反應(yīng)不使用完全相同的總RNA请唱，qRT-PCR的表達(dá)分析將導(dǎo)致不可靠的數(shù)據(jù)弥咪。有許多核酸評(píng)估方法，它們?cè)跁r(shí)間消耗十绑、成本和精度上有所不同聚至。最終，選擇方法時(shí)應(yīng)考慮下游實(shí)驗(yàn)的要求本橙。
以下是一些最常見的評(píng)估方法的概述：
1. 瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳以分子量為基礎(chǔ)扳躬，通過在電流的存在下通過固化的凝膠基質(zhì)將核酸分離出來。將提取的核酸與平行的分子量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，所述分子量標(biāo)準(zhǔn)包含已知大小和濃度的片段贷币。
優(yōu)勢(shì)：目測(cè)DNA質(zhì)量击胜；完整的基因組DNA樣本顯示為完整條帶；降解的核酸顯示為彌散狀態(tài)役纹；核糖體RNA清晰可見偶摔；可供大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用；可視化可能存在的污染（例如促脉，質(zhì)粒純化樣品中存在RNA）辰斋。
劣勢(shì)：只提供粗略的濃度估計(jì)；不顯示樣品中存在污染物瘸味，如鹽宫仗。
2. 毛細(xì)管電泳
毛細(xì)管電泳，有時(shí)被稱為芯片上的實(shí)驗(yàn)室旁仿，通過一個(gè)由檢測(cè)器監(jiān)測(cè)的小毛細(xì)管來吸取樣品藕夫，計(jì)算機(jī)接收信息并以圖形方式顯示。毛細(xì)管電泳適用于分析片段大小枯冈、數(shù)量和樣品的整體質(zhì)量毅贮。這種技術(shù)比傳統(tǒng)的瓊脂糖電泳更精確，通常是在qPCR之前進(jìn)行核酸評(píng)估的方法霜幼。
優(yōu)勢(shì)：多類型核酸的精確分析嫩码；自動(dòng)上樣和定量比凝膠法更精確誉尖；高靈敏度-可檢測(cè)和分析少罪既、微量樣品。
劣勢(shì)：價(jià)格昂貴铡恕。
3. 分光光度法
分光光度法是一種快速檢測(cè)技術(shù)琢感，它依賴于光與樣品相互作用的特性來精確定量。樣品被裝入通過測(cè)試的儀器（分光光度計(jì)）中不同波長(zhǎng)的光通過它們探熔，然后被探測(cè)器接收驹针。探測(cè)器提供有關(guān)樣品數(shù)量和質(zhì)量的信息，然后計(jì)算機(jī)軟件翻譯诀艰。通過在260nm和280nm處測(cè)量吸光度柬甥，兩者的比值表示樣品的純度。對(duì)于純DNA和RNA其垄，260/280的比率應(yīng)該在1.8到2.1之間苛蒲。可在230nm處進(jìn)行額外測(cè)量绿满，低于2.0的230/280nm比率表示存在有機(jī)污染物臂外。
近年來，一種新型的基于熒光的分光光度分析方法在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室得到了廣泛的應(yīng)用。這種基于熒光的技術(shù)比傳統(tǒng)的分光光度法具有更高的靈敏度漏健，并且能夠通過使用DNA和RNA特有的熒光染料來區(qū)分DNA和RNA嚎货。
優(yōu)勢(shì)：準(zhǔn)確快速；提供關(guān)于污染物存在的信息蔫浆；大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都有分光光度計(jì)殖属。
劣勢(shì)：無法量化單個(gè)片段；昂貴瓦盛。
b.提高核酸質(zhì)量
盡管我們盡了最大的努力忱辅，但通常還是有必要采取額外的措施來提高核酸質(zhì)量。以下將描述在需要改進(jìn)核酸質(zhì)量時(shí)需要考慮的一些附加因素谭溉。
1.使用和儲(chǔ)存溫度：
核酸易被核酸酶（即RNase和DNase）降解墙懂，低溫儲(chǔ)存有助于抑制酶活性。DNA天生比RNA更穩(wěn)定扮念，在較高的儲(chǔ)存溫度下對(duì)核酸酶活性更具抵抗力损搬。
DNA應(yīng)儲(chǔ)存在-20℃或以下，并在使用過程中保存在冰上柜与。反復(fù)的凍融可能會(huì)使DNA片段化巧勤，特別是HMW-DNA。因此弄匕，如果經(jīng)常使用HMWDNA颅悉，則應(yīng)將其儲(chǔ)存在4℃下。
RNA更易被核酸酶降解迁匠，應(yīng)始終保存在非常低的溫度（-20至-80℃）剩瓶，只有在絕對(duì)必要時(shí)才能解凍。
2. 核酸酶抑制劑和清洗液
核酸酶的存在可以快速降解核酸樣品城丧。很容易將核酸酶從未受保護(hù)的手轉(zhuǎn)移到工作表面延曙；因此，在使用核酸時(shí)應(yīng)始終戴手套亡哄。
工作場(chǎng)所應(yīng)保持清潔枝缔，并經(jīng)常用乙醇擦拭，以去除核酸酶污染蚊惯。有許多商用產(chǎn)品可以防止RNase污染愿卸。許多研究人員還將核糖核酸酶抑制劑焦碳酸二乙酯（DEPC）添加到水中，用于RNA的工作截型。在RNA工作之前用EDPC清洗和處理玻璃器皿也是可取的趴荸。
近年來，市場(chǎng)上出現(xiàn)了許多核酸穩(wěn)定劑菠劝。與上述清洗溶液不同赊舶，這些試劑在采集點(diǎn)直接添加到完整樣品中睁搭，以抑制核酸酶并穩(wěn)定核酸，直到進(jìn)行提取笼平。盡管這些試劑中的大多數(shù)與大多數(shù)下游提取試劑盒和應(yīng)用兼容园骆，但其中一些試劑需要在提取核酸之前從完整樣品中去除。
3. 使用無核酸酶耗材
使用任何核酸時(shí)寓调，確保對(duì)任何消耗品或玻璃器皿進(jìn)行核酸酶處理锌唾。盡可能購(gòu)買無核酸酶管和帶過濾器的吸管頭。如果在分析之后夺英，您發(fā)現(xiàn)您的DNA產(chǎn)量很低晌涕，質(zhì)量不理想，或者如果提取的DNA通過了您的質(zhì)量評(píng)估痛悯，但您在下游實(shí)驗(yàn)過程中獲得了不理想的結(jié)果余黎，則需要進(jìn)行一些故障排除。
