免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry, IHC）利用抗原-抗體的相互作用來(lái)顯示組織切片中抗原（例如蛋白質(zhì)）的分布和定位上炎。這種實(shí)驗(yàn)的獨(dú)特之處在于它既直觀的顯示了蛋白在組織及細(xì)胞或細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)的定位盗舰，又保留了組織樣品的結(jié)構(gòu)特征枪狂，該方法對(duì)于診斷癌癥等疾病的異常細(xì)胞極為有用，因此該實(shí)驗(yàn)方法得到廣泛應(yīng)用抢埋。
但是弹灭，實(shí)驗(yàn)并不是做出來(lái)就結(jié)束了，更重要的是我們要對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析統(tǒng)計(jì)揪垄，以得出實(shí)驗(yàn)的結(jié)果結(jié)論穷吮。要想獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)操作步驟是第一步饥努，合適的分析方法是第二步捡鱼。
下面小編為大家介紹一下免疫組織化學(xué)常用的分析方法之一：使用Image J軟件進(jìn)行IHC score分析
IHC score是處理免疫組化結(jié)果的一種組織學(xué)評(píng)分方法，將每張切片內(nèi)陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)量及其染色強(qiáng)度轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的數(shù)值酷愧，達(dá)到對(duì)組織染色半定量的目的驾诈。目前該方法也被多數(shù)高分文章所采用認(rèn)可[1-3]。
標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分為：
根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分為4級(jí)：
陰性伟墙，計(jì)0分翘鸭；
弱陽(yáng)性，計(jì)1分戳葵；
陽(yáng)性就乓，計(jì)2分；
強(qiáng)陽(yáng)性拱烁，計(jì)3分生蚁。
根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分為4級(jí)：
0%≤陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤25%，計(jì)1分戏自；
25%<陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤50%邦投，計(jì)2分；
50%<陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤75%擅笔，計(jì)3分志衣；
75%<陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤100%屯援，計(jì)4分。
IHC score = 細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分 x 陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分
跟著小編的節(jié)奏念脯，我們來(lái)演示操作一下狞洋。
第一步：計(jì)算細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分。
首先绿店，我們需要下載Image J的插件IHC Profiler（https://sourceforge.net/projects/ihcprofiler/）吉懊。
（1）以細(xì)胞質(zhì)染色的IHC圖為例：
打開(kāi)圖片和插件（Plugins → IHC_Profiler）：
打開(kāi)插件后選擇細(xì)胞質(zhì)染色的Mode：
顏色去卷積默認(rèn)H DAB染色：
然后即可分別得到陰性區(qū)域和陽(yáng)性區(qū)域，直接得出結(jié)果：
由結(jié)果可得假勿，該IHC圖的細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分為弱陽(yáng)性借嗽，計(jì)1分。
（2）以細(xì)胞核染色為例：
打開(kāi)圖片和插件（Plugins → IHC Profiler）：
選擇細(xì)胞核染色Mode：
顏色去卷積默認(rèn)H DAB染色：
并不會(huì)直接得出結(jié)果转培，需要先設(shè)定一個(gè)閾值：
然后再次點(diǎn)擊Plugins的IHC Profiler Macro（Plugins → IHC Profiler Macro）恶导，即可得到結(jié)果：
由結(jié)果可得，該IHC圖的細(xì)胞核染色強(qiáng)度評(píng)分為陰性堡距，計(jì)0分甲锡。
第二步：計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比（以上述細(xì)胞質(zhì)染色的IHC圖為例進(jìn)行后續(xù)操作）。
打開(kāi)圖片羽戒，并將圖片格式轉(zhuǎn)換為RGB Stack（Image →type→RGB Stack）：
將進(jìn)度條拉至中間位置：
點(diǎn)擊Threshold進(jìn)行閾值的調(diào)整（Image→adjust→Threshold）：
點(diǎn)擊Analyze的Set measurements進(jìn)行計(jì)算內(nèi)容的選擇（Analyze→Set measurement→Area、Mean gray value虎韵、Area fraction）：
點(diǎn)擊Analyze的measure易稠，出現(xiàn)的%Area即為陽(yáng)性細(xì)胞百分比。
由結(jié)果可得包蓝，該IHC圖的陽(yáng)性細(xì)胞百分比為19.739%驶社，陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤25%，計(jì)1分测萎。
綜合亡电，該IHC圖的綜合IHC score得分為：1（細(xì)胞染色強(qiáng)度）*1（陽(yáng)性細(xì)胞百分比）=1分。
參考文獻(xiàn)
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