細胞鋪板后狀態(tài)不好：可通過更換其他批次細胞系骤素，優(yōu)化胰酶消化條件乎莉，血清中和量和時間改善埠啃；
細胞鋪板不勻：消化過度容易造成細胞整片粘連死宣，結(jié)團率高，很難通過吹打分散碴开；不同細胞接種前毅该，最好進行梯度吹打?qū)嶒?/b>；加樣從孔的左邊靠底部緩慢加入潦牛；
每孔之間細胞量不同：鋪板速度盡量要快眶掌；每接幾個孔細胞懸液需要混勻一下；加完半邊板后巴碗，需要再次講培養(yǎng)皿內(nèi)剩余細胞懸液充分混勻后鋪板朴爬。
血清溶解后有絮狀物：冷凍血清應置于4℃冰箱溶解，期間需均勻搖晃橡淆，溶解后按需分裝凍存召噩，避免反復凍融，不宜在4℃長期儲存逸爵。血清的顏色依據(jù)血紅蛋白含量不同而變化具滴。
細胞污染排查：培養(yǎng)試劑和輔助試劑等條件不變，重新復蘇一株細胞师倔，復蘇時注意水浴不能沒過凍存管瓶蓋构韵，傳代時不能觸碰吸管尖頭部或容器瓶口。操作前需要用75%的酒精擦拭無菌操作臺面。觀察細胞是否有污染現(xiàn)象疲恢。
血清污染排查：其他試劑不變凶朗，僅更換血清。
基礎(chǔ)培養(yǎng)基：其他試劑保持不變显拳，僅更換基礎(chǔ)培養(yǎng)基俱尼。
PBS：其他試劑保持不變，僅更換PBS萎攒。
胰酶：若細胞復蘇的很好遇八，一傳代就污染，可以嘗試其他試劑保持不變耍休，僅更換消化用胰酶刃永，看細胞狀態(tài)。
耗材：培養(yǎng)基及輔助試劑等條件不變羊精，使用新耗材（培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶斯够、槍頭）培養(yǎng)細胞，觀察細胞是否有污染喧锦。
細胞不貼壁：胰酶消化時間不當读规。時間短，易成團燃少；胰酶處理太久束亏，易造成細胞膜蛋白損傷，嚴重導致細胞死亡阵具。
缺少貼壁因子：血清中含有促貼壁因子碍遍，無血清培養(yǎng)基，細胞貼壁效果下降很多阳液。
其他原因：支原體或細菌污染怕敬；細胞狀態(tài)不好，細胞老化帘皿；接種細胞數(shù)目少东跪；復蘇時處理速度太慢；培養(yǎng)液配制儲存不當（eg:pH過堿鹰溜，Gln太少）虽填。
解決方法：
貼壁變差：可適當加高血清比例（最高不超過20%）；建議試好一個血清批次多囤一些奉狈，可以避免血清批間差對細胞的影響卤唉。
細胞老化怎么辦？
防止細胞老化最主要還是要做到勤觀察仁期、勤換液桑驱、勤傳代竭恬、勤保種，特別是傳代熬的，不能等細胞太密了之后傳痊硕，一般細胞建議長到70％融合度傳代最好；
換培養(yǎng)液應該根據(jù)自己細胞消耗培養(yǎng)基的情況來確定是否該換押框。如果感覺時間不好把握的話就多培養(yǎng)幾瓶細胞岔绸，在不同的時間換液，最后再來比較下橡伞，看什么時候換液好盒揉，得出自己的結(jié)論；
選擇正確的血清與培養(yǎng)基：細胞對血清特別敏感兑徘，直接影響細胞的生長刚盈。一定要選擇適合的血清不然就會因營養(yǎng)物質(zhì)不協(xié)調(diào)而導致細胞老化；
在間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)時必然要進行消化挂脑，但是消化對細胞的表面蛋白質(zhì)有很強的破壞作用藕漱，因此不能長時間進行消化并且在選擇消化酶時也要選擇較為合適的pH和濃度，不然就會使細胞老化或者分化崭闲；?
293細胞感染病毒后凋亡嚴重：
通過更換血清批次肋联，再進行轉(zhuǎn)染實驗并觀察轉(zhuǎn)染后的效果，比較分析出原因刁俭。
293傳代：鑒于該細胞貼壁疏松橄仍，普通0.25%胰酶消化時間控制15s-30s；吹打動作輕柔薄翅，控制在10-20次沙兰；細胞融合率達到80%傳代即可傳代氓奈，不可長的太滿翘魄。
血清渾濁怎么辦？
血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀屬于常見現(xiàn)象舀奶，無需過多擔心暑竟，并且不會影響血清的品質(zhì)，對細胞培養(yǎng)而言也是沒有任何問題的育勺，可放心使用但荤。若想去除沉淀，我們建議您采用2000 rpm 離心5分鐘涧至，或用0.45 μm的過濾器去除沉淀腹躁。
