不同采血管和樣本凍融次數(shù)對血液生物標(biāo)志物檢出濃度的影響

Simoa單分子免疫陣列分析技術(shù)是目前市面上最靈敏的蛋白分子檢測技術(shù),其可以檢測單個蛋白分子议纯,靈敏度達(dá)到飛克級別父款。在腫瘤、神經(jīng)瞻凤、感染免疫憨攒、心血管、炎癥阀参、生殖肝集、眼科等領(lǐng)域都有著廣泛應(yīng)用。

在血液樣本的收集制備和儲存過程中蛛壳,往往會涉及不同采血管的使用和樣本凍融杏瞻。來自于瑞典所刀、美國、倫敦的科學(xué)家們針對這個問題在阿爾茲海默癥相關(guān)的血液生物標(biāo)志物上做了驗證研究伐憾,文章發(fā)表于Alzheimer’s & dementia(IF=14.48)勉痴。

Effects of pre-analytical procedures on blood biomarkers for Alzheimer's pathophysiology, glial activation, and neurodegeneration? ? ? ? ? ? ? ? Alzheimer’s & dementia (Amsterdam, Netherlands). 2021; 13:e 12168;IF=14.48

實驗方法?

本研究測試了使用不同采血管(乙二胺四乙酸[EDTA]树肃、血清蒸矛、肝素鋰[LiHep]和檸檬酸鹽)收集樣本以及樣本反復(fù)凍融對阿爾茨海默癥(AD)、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞活化和神經(jīng)元損傷等疾病的血液生物標(biāo)記物濃度水平的影響胸嘴。采用單分子免疫陣列分析技術(shù)(Simoa HD-X平臺)檢測Aβ42雏掠、Aβ40、p-tau181劣像、膠質(zhì)原纖維酸性蛋白乡话、t-tau、NfL耳奕、pNfH绑青。

?實驗結(jié)果

圖1. 本研究設(shè)計示意圖
表1. EDTA、血清屋群、LiHep和檸檬酸鹽等類型采血管收集的樣本中的生物標(biāo)志物的平均濃度??
圖2. 圖示不同采血管收集的8個樣本中8種生物標(biāo)志物的濃度闸婴。(A)NfL,(B)pNfH芍躏,(C)GFAP邪乍,(D)Aβ42,(E)Aβ40对竣,(F)Aβ42/40庇楞,(G)t-tau和(H)p-tau181。每種顏色代表一個樣本否纬÷郎危灰色框表示八個樣本的濃度平均值(pg/mL) *P<0.05,**P<0.01临燃,***P<.001


圖3. 圖示反復(fù)凍融對EDTA血漿和血清生物標(biāo)志物濃度的影響聂使。(A)NfL,(B)pNfH谬俄,(C)GFAP柏靶,(D)Aβ42,(E)Aβ40溃论,(F)Aβ42/40屎蜓,(G)t-tau和(H)p-tau181。每組的第1圖和第2圖為EDTA血漿钥勋,第3圖和第4圖為血清炬转;第1圖和第3圖顯示了四次反復(fù)凍融的30個樣本的生物標(biāo)志物濃度(pg/mL)辆苔,紅色菱形表示每次凍融循環(huán)的平均值;第2圖和第4圖表示與凍融1次相比扼劈,凍融2次至4次時30個樣本的生物標(biāo)志物濃度的百分比驻啤。* P<0.05,**P<0.01荐吵,***P<0.001

使用不同類型采血管收集的樣本中的大多數(shù)生物標(biāo)志物的絕對濃度存在顯著差異骑冗。其中使用LiHep采血管收集的樣本中,所有生物標(biāo)志物的濃度平均值最高先煎。Aβ42/40(r=0.63-0.86)和血清t-tau(r=0.46-0.64)與采血管類型的相關(guān)性較弱贼涩。反復(fù)凍融對血清Aβ和t-tau水平有顯著影響(P<0.0001)。凍融循環(huán)4次后薯蝎,EDTA Aβ40和EDTA P-tau181濃度水平略有下降(P<0.05)遥倦。

實驗結(jié)論

1. 含有EDTA、血清占锯、LiHep和檸檬酸鹽的采血管并不全部適用于本研究所涉及的生物標(biāo)志物袒哥,因為檢測得到的生物標(biāo)志物的絕對濃度顯著不同,在對血液生物標(biāo)志物進(jìn)行研究時消略,應(yīng)使用相同類型的采血管堡称;

2. 反復(fù)凍融少于四次時,NfL和pNfH濃度無明顯變化疑俭;

3. 血清樣本并不適用于Aβ42、Aβ40和t-tau的檢測婿失,因為凍融容易引起血清中這三個蛋白的濃度變化钞艇;

4. 檢測EDTA Aβ40時應(yīng)避免超過3次的凍融循環(huán),但可通過Aβ42/40比值進(jìn)行補償豪硅;

5. 檢測p-tau181時應(yīng)避免超過3次的凍融循環(huán)哩照。

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