Simoa單分子免疫陣列分析技術(shù)是目前市面上最靈敏的蛋白分子檢測技術(shù),其可以檢測單個蛋白分子议纯,靈敏度達(dá)到飛克級別父款。在腫瘤、神經(jīng)瞻凤、感染免疫憨攒、心血管、炎癥阀参、生殖肝集、眼科等領(lǐng)域都有著廣泛應(yīng)用。
在血液樣本的收集制備和儲存過程中蛛壳,往往會涉及不同采血管的使用和樣本凍融杏瞻。來自于瑞典所刀、美國、倫敦的科學(xué)家們針對這個問題在阿爾茲海默癥相關(guān)的血液生物標(biāo)志物上做了驗證研究伐憾,文章發(fā)表于Alzheimer’s & dementia(IF=14.48)勉痴。
實驗方法?
本研究測試了使用不同采血管(乙二胺四乙酸[EDTA]树肃、血清蒸矛、肝素鋰[LiHep]和檸檬酸鹽)收集樣本以及樣本反復(fù)凍融對阿爾茨海默癥(AD)、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞活化和神經(jīng)元損傷等疾病的血液生物標(biāo)記物濃度水平的影響胸嘴。采用單分子免疫陣列分析技術(shù)(Simoa HD-X平臺)檢測Aβ42雏掠、Aβ40、p-tau181劣像、膠質(zhì)原纖維酸性蛋白乡话、t-tau、NfL耳奕、pNfH绑青。
?實驗結(jié)果
使用不同類型采血管收集的樣本中的大多數(shù)生物標(biāo)志物的絕對濃度存在顯著差異骑冗。其中使用LiHep采血管收集的樣本中,所有生物標(biāo)志物的濃度平均值最高先煎。Aβ42/40(r=0.63-0.86)和血清t-tau(r=0.46-0.64)與采血管類型的相關(guān)性較弱贼涩。反復(fù)凍融對血清Aβ和t-tau水平有顯著影響(P<0.0001)。凍融循環(huán)4次后薯蝎,EDTA Aβ40和EDTA P-tau181濃度水平略有下降(P<0.05)遥倦。
實驗結(jié)論
1. 含有EDTA、血清占锯、LiHep和檸檬酸鹽的采血管并不全部適用于本研究所涉及的生物標(biāo)志物袒哥,因為檢測得到的生物標(biāo)志物的絕對濃度顯著不同,在對血液生物標(biāo)志物進(jìn)行研究時消略,應(yīng)使用相同類型的采血管堡称;
2. 反復(fù)凍融少于四次時,NfL和pNfH濃度無明顯變化疑俭;
3. 血清樣本并不適用于Aβ42、Aβ40和t-tau的檢測婿失,因為凍融容易引起血清中這三個蛋白的濃度變化钞艇;
4. 檢測EDTA Aβ40時應(yīng)避免超過3次的凍融循環(huán),但可通過Aβ42/40比值進(jìn)行補償豪硅;
5. 檢測p-tau181時應(yīng)避免超過3次的凍融循環(huán)哩照。