1. Time-Dependent Transcriptional Heterogeneity of Neutrophils in the Infarcted Heart
作者取了MI后day 1, 3, 5天的心臟,使用流式分選了CD11b+細胞,進行了單細胞轉錄組+CITEseq。作者對其中的中性粒細胞進行了亞群細分,得到了6個亞群畏鼓。其中day1主要是Neutro4群嘿悬,day3時Neutro1群增加锋爪,day5時Neutro3群增加副硅,每一群都有自己獨特的轉錄模式和轉錄因子。
2. SiglecFhi Neutrophils Time-Dependently Populate the Infarcted Heart
和MI后Day1的中性粒相比翅萤,day3和day5的中性粒高表達Siglecf恐疲,尤其是Neutro1和Neutro3群(這兩群在day1時很少)。對day1和day3 SiglecF的流式檢測(b-d)和免疫熒光染色(e)得到了一致的結果套么。此外培己,作者檢測了SiglecFhi 和 SiglecFlow中性粒細胞的功能。結果顯示MI后3天胚泌,SiglecFhi的吞噬功能更強(f)省咨,ROS的產生也更強(g)。day1時吞噬和ROS產生都差不多玷室。
而在day5時零蓉,中性馏允埽總數(shù)顯著下降,但SiglecFhi中性粒依然占了一半左右(附件流式結果)敌蜂。
3.Acquisition of SiglecF Parallels Acquisition of Aging and Activation Markers
同時箩兽,SiglecF的表達與中性粒細胞的aging/activation相一致。一些marker如Icam1, Itga4 (encoding CD49d), Cxcr4, Cxcr2 在SiglecFhi中性粒更高章喉,而naive marker 如Sell汗贫,在SiglecFlow中性粒更高。
主要還是根據(jù)aging marker看的成熟度秸脱,感覺分化軌跡可能更客觀一點落包。
4. The SiglecFhi Neutrophil State Is Acquired via a local tissue specification process
為了探究SiglecFhi中性粒的起源,作者對MI后day 1, day 3和對應con的外周血也進行了檢測摊唇。外周血中性粒是Ly6G+CD115?(a)咐蝇。對心臟和血液數(shù)據(jù)的整合提示血中存在3個主要細胞群:young neutrophils (Blood Young cluster: CD62Lhi, low Cxcr4), old blood neutrophils (Blood Old cluster: CD62Llow, high Cxcr4), type I IFN (interferon) response neutrophils (Neu-IFN)。
其中SiglecFneg和SiglecF+中性粒是心臟特有遏片。SiglecFneg主要存在于MI后1天心臟嘹害,而SiglecF+中性粒主要存在于MI后3天心臟。
5. Relation of Heart-Infiltrating Neutrophils to Blood, BM, and Spleen Neutrophils
作者整合了心臟和外周血的數(shù)據(jù)吮便,進行了擬時序分析笔呀。