我最近分化的細(xì)胞發(fā)現(xiàn)經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)團(tuán)快抖剿，不管的話會(huì)越來越多朽寞，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)很差，大多是死細(xì)胞斩郎，只能丟棄脑融。因?yàn)榉只瘯r(shí)間很長(zhǎng)，很心痛缩宜，網(wǎng)上查了一下原因肘迎。
這是我的細(xì)胞，一直是懸浮培養(yǎng)锻煌，不進(jìn)行胰酶消化妓布，平時(shí)離心用1800rpm，所以可能是加速度過大宋梧，或者我混勻時(shí)過于粗暴匣沼。并且細(xì)胞擴(kuò)增很快，我也沒注意細(xì)胞密度捂龄，释涛。之前隔一天換一次液，操作較密集致使細(xì)胞老化跺讯，死亡枢贿。
- 為什么細(xì)胞喜歡“抱團(tuán)”
首先要明確一點(diǎn)，常規(guī)的“抱團(tuán)”是指貼壁細(xì)胞被消化后懸浮狀態(tài)下的聚集情況刀脏。細(xì)胞在貼壁生長(zhǎng)時(shí)局荚，聚集在一起是正常現(xiàn)象愈污。當(dāng)周圍細(xì)胞寥寥無幾耀态，而這一團(tuán)已經(jīng)疊層生長(zhǎng)，這就是在懸浮狀態(tài)就已經(jīng)聚團(tuán)的細(xì)胞再貼壁導(dǎo)致的暂雹。相同條件下首装，培養(yǎng)的癌細(xì)胞對(duì)密度依賴性的生長(zhǎng)抑制敏感性降低，所以即使在形成單層后杭跪，也不會(huì)停止生長(zhǎng)仙逻，而是相互堆積形成多層生長(zhǎng)的聚集體驰吓。
其次，部分細(xì)胞被污染后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞聚團(tuán)系奉，這和操作有很大關(guān)系檬贰，比如：傳代鋪板時(shí)，是否進(jìn)行了活細(xì)胞計(jì)數(shù)并及時(shí)調(diào)整濃度缺亮；終止消化時(shí)間點(diǎn)是否準(zhǔn)確翁涤；混勻是否過于輕柔或粗暴；胰酶是否濃度過高萌踱；離心收集時(shí)葵礼，加速度是否過大等，都會(huì)直接影響子代細(xì)胞狀態(tài)并鸵。
另外鸳粉，過度消化細(xì)胞、狀態(tài)不好的老化細(xì)胞也可能會(huì)出現(xiàn)聚團(tuán)能真。很多人覺得細(xì)胞多多益善赁严，經(jīng)常將貼壁細(xì)胞養(yǎng)到疊層、或密集程度特別高時(shí)才進(jìn)行傳代粉铐，如果一直這樣疼约，不僅會(huì)縮短傳代時(shí)間，導(dǎo)致操作密集蝙泼；同時(shí)細(xì)胞的老化會(huì)更加嚴(yán)重程剥。另外，細(xì)胞死亡時(shí)釋放DNA汤踏，會(huì)“抓住”其他細(xì)胞织鲸，形成黏性的細(xì)胞團(tuán)，若不及時(shí)處理溪胶，整體細(xì)胞狀態(tài)會(huì)惡性循環(huán)搂擦。
- 聚團(tuán)細(xì)胞狀態(tài)都不好嗎
若細(xì)胞輪廓清晰，胞體通透哗脖，呈串狀均勻聚集瀑踢，證明其狀態(tài)較好，正在分裂才避。但是大多數(shù)情況下橱夭，聚團(tuán)細(xì)胞都是輪廓模糊，細(xì)胞透光性差桑逝，甚至出現(xiàn)合胞體棘劣，同時(shí)伴有細(xì)胞碎片，這證明細(xì)胞已經(jīng)衰老或者產(chǎn)生病變楞遏，狀態(tài)不佳茬暇。
- 如何避免聚團(tuán)細(xì)胞的生成
首先確認(rèn)當(dāng)前細(xì)胞生長(zhǎng)密度及狀態(tài)首昔，80%左右的生長(zhǎng)密度即可進(jìn)行傳代，此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較好而钞，且用于傳代的數(shù)量也足夠沙廉。
傳代操作前，使用緩沖液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)且全面地潤(rùn)洗臼节，清除死亡的細(xì)胞團(tuán)和部分堆疊雜質(zhì)（在選擇適當(dāng)胰酶濃度時(shí)，對(duì)于不同代數(shù)的不同細(xì)胞系需進(jìn)行一定的調(diào)整珊皿，如：部分貼壁牢固的細(xì)胞應(yīng)將胰酶分裝后网缝，進(jìn)行預(yù)熱處理；細(xì)胞密度過高時(shí)蟋定，應(yīng)該向胰酶中加入少量緩沖液粉臊，緩慢均勻地消化細(xì)胞等。對(duì)于貼壁格外牢固的細(xì)胞驶兜，可以嘗試多次分批進(jìn)行消化扼仲，最大限度保證細(xì)胞狀態(tài)）。
在消化過程中抄淑，需均勻慢速晃動(dòng)培養(yǎng)器皿屠凶，以免局部胰酶濃度過高而影響傳代。切勿用力搖動(dòng)肆资，導(dǎo)致邊緣松動(dòng)的大片細(xì)胞直接脫落矗愧，從而增加細(xì)胞成團(tuán)幾率。
培養(yǎng)器皿的選擇也需注意郑原，部分實(shí)驗(yàn)室會(huì)使用玻璃培養(yǎng)瓶唉韭，因細(xì)胞貼壁在玻璃底更容易分離。同時(shí)玻璃材質(zhì)的親水性和塑料有區(qū)別犯犁，而且玻璃細(xì)胞培養(yǎng)瓶都是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部處理属愤，可能會(huì)有清潔殘留，在一定程度上抑制細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)酸役，并且更容易消化住诸，細(xì)胞之間的連接比貼壁還要緊密，聚團(tuán)幾率很大簇捍。
另外只壳，避免傳代過程中匯合度較大，本身1:3甚至1:4都可以正常培養(yǎng)的細(xì)胞被1:2傳代暑塑，會(huì)導(dǎo)致母代細(xì)胞濃度過高吼句，在分化過程中出現(xiàn)堆疊現(xiàn)象，所以在每次細(xì)胞傳代前要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)事格。
- 已經(jīng)聚團(tuán)的細(xì)胞惕艳，只能棄掉嗎
如果預(yù)實(shí)驗(yàn)比較緊急搞隐，或者細(xì)胞株較為珍貴，也可以在復(fù)蘇新細(xì)胞的同時(shí)远搪，進(jìn)行聚團(tuán)細(xì)胞“拯救”劣纲。
首先，將帶有聚團(tuán)細(xì)胞的樣品低密度連續(xù)傳代谁鳍，約三代過后癞季，可逐漸分散為獨(dú)立個(gè)體，再通過監(jiān)測(cè)細(xì)胞活力狀態(tài)倘潜，判斷是否可用來進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)绷柒。若肉眼可見，即可直接通過清洗和吸出涮因，或是在消化后將懸起的細(xì)胞樣品靜置數(shù)十秒以沉淀團(tuán)塊废睦。對(duì)于死細(xì)胞聚團(tuán)，可以在細(xì)胞液中適量加入DNase以斷裂DNA养泡。
