培養(yǎng)中常出現(xiàn)一些黑點等太，是污染嗎
一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成探橱，首先肉眼觀察培養(yǎng)液是否變渾濁申屹，如果變渾濁，基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養(yǎng)液沒有變渾濁：在顯微鏡下觀察黑點大小和形狀是否規(guī)則隧膏，是否運動哗讥，是做布朗運動還是呈直線型快速移動。如果黑點大小不規(guī)則胞枕，做布朗運動杆煞，黑點可能是細胞碎片
可能是細胞狀態(tài)不佳或者消化過度引起的
，也可能是血清反復凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的曲稼，也可能是細胞的代謝產(chǎn)物索绪。如果黑點大小一致，快速移動贫悄，很可能是細菌污染瑞驱。
如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖窄坦，培養(yǎng)基就會迅速變黃唤反、變混濁凳寺。污染包括細菌污染、支原體污染等彤侍。 如果在鏡下觀察細胞肠缨，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比盏阶，沒有任何變化晒奕。
那么，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)
1.細胞生長過老名斟，破碎的細胞殘骸
2.血清質(zhì)量不好脑慧，反復凍融的結(jié)果
3.配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細胞生長
4.配制培養(yǎng)基的水質(zhì)砰盐、容器不合格
如何預防細胞培養(yǎng)中黑點的產(chǎn)生
掌握細胞傳代的最佳時機闷袒，不要細胞長老了再傳代;掌握好消化時間，防止消化過度產(chǎn)生細胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數(shù);將培養(yǎng)液的PH調(diào)到最佳;嚴格控制水質(zhì)和器皿的清潔岩梳。
黑點已經(jīng)產(chǎn)生了囊骤，如何進行處理
如果判定黑點是污染，請及時將細胞處理后丟棄冀值。其他情況也物，可參照以下進行：
如果是懸浮細胞：收集細胞上清慢速離心（500-600 rpm/min，5-6 min）并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細胞：將細胞用PBS洗2-3遍池摧，洗的時候焦除，輕輕拍打培養(yǎng)瓶激况，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落作彤，再棄去PBS，消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右乌逐，讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來竭讳，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細胞浙踢，將收集的細胞懸液慢速離心（500-600 rpm/min绢慢，5-6 min）并更換新的培養(yǎng)瓶，并可以嘗試適當增加血清濃度進行培養(yǎng)洛波。
