大家在細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候,是不是經(jīng)常對(duì)著培養(yǎng)基包裝上那一堆成分表好奇?看到“L-谷氨酰胺(L-Glutamine)”這幾個(gè)字业踏,心里可能會(huì)嘀咕:“這玩意兒到底是干啥的?我的細(xì)胞非加它不可嗎涧卵?”堡称。咱們今天就和大伙兒來嘮嘮這個(gè)~
谷氨酰胺是不可或缺的
谷氨酰胺是一種非必需氨基酸,不僅可作為細(xì)胞的能量來源艺演,還參與蛋白質(zhì)合成和核酸代謝却紧。“非必需”并不是說它不重要胎撤,而是指細(xì)胞可以自身合成谷氨酰胺晓殊,不完全需要從外界攝取。然而體外培養(yǎng)的細(xì)胞自身合成的谷氨酰胺量太少伤提,不足夠自身使用巫俺,因此培養(yǎng)大多數(shù)細(xì)胞都需要在培養(yǎng)基中添加谷氨酰胺。
經(jīng)研究證明在培養(yǎng)基中添加谷氨酰胺可以提高細(xì)胞活力肿男,而缺乏谷氨酰胺會(huì)推遲細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的開始時(shí)間介汹,細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢甚至死亡。
由于細(xì)胞只能利用L型氨基酸舶沛,所以我們看到培養(yǎng)基包裝上標(biāo)注的都是L-谷氨酰胺嘹承,而不是D-谷氨酰胺。
谷氨酰胺不穩(wěn)定
谷氨酰胺容易降解如庭。隨著溫度升高和時(shí)間延長(zhǎng)叹卷,培養(yǎng)基中的谷氨酰胺將逐漸分解為氨和吡咯烷酮羧酸,而氨對(duì)細(xì)胞有一定的毒性坪它。不過我們可以調(diào)整谷氨酰胺濃度骤竹、正確的保存方法和嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)操作,減少降解產(chǎn)物的積累往毡。此外蒙揣,一種谷氨酰胺二肽(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)在溶液中具有更高的穩(wěn)定性,可以在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持其活性开瞭,常作為L(zhǎng)-谷氨酰胺的代替懒震。
如何正確使用谷氨酰胺
許多商業(yè)化的培養(yǎng)基已經(jīng)添加了適量的谷氨酰胺,無需實(shí)驗(yàn)者自己配制惩阶,提高了實(shí)驗(yàn)便捷性挎狸。由于谷氨酰胺的不穩(wěn)定性,縮短了培養(yǎng)基的保質(zhì)期断楷,所以已含有谷氨酰胺的培養(yǎng)基要盡快用完锨匆。如果短期內(nèi)用不完,可以按需要分裝,保存于-20℃冰箱恐锣。但不要反復(fù)多次凍融茅主,否則培養(yǎng)基里的某些成分可能會(huì)析出。
含L-谷氨酰胺培養(yǎng)基的保存期限:
未開封:2~8℃保存2個(gè)月內(nèi)使用/ -20℃半年內(nèi)使用
開封后:2~8℃保存2周內(nèi)使用
-20℃冷凍保存的培養(yǎng)基需要解凍時(shí)土榴,建議放入2~8℃冰箱過夜解凍诀姚,不建議放在室溫或水浴鍋中解凍,避免谷氨酰胺降解以及其他成分析出玷禽。
如果不小心超出了保存期限赫段,可以按2mM濃度補(bǔ)加L-谷氨酰胺溶液,以保證培養(yǎng)效果矢赁。
當(dāng)然你也可以選擇現(xiàn)配現(xiàn)用:?jiǎn)为?dú)購買不含谷氨酰胺的培養(yǎng)基糯笙,以及濃縮的L-谷氨酰胺溶液。使用前向培養(yǎng)基中按需添加適量谷氨酰胺溶液即可撩银。