PCR 技術(shù)壮啊,即聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction铐懊,PCR)是由美國 PE Cetus 公司的 Kary Mullis 在 1983 年(1993 年獲諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng))建立的肮雨。
這項(xiàng)技術(shù)可在試管內(nèi)經(jīng)數(shù)小時(shí)反應(yīng)就將特定的DNA 片段擴(kuò)增數(shù)百萬倍,這種迅速獲取大量單一核酸片段的技術(shù)在分子生物學(xué)研究中具有舉足輕重的意義奸鬓,極大地推動(dòng)了生命科學(xué)的研究進(jìn)展土全。它不僅是 DNA 分析最常用的技術(shù),而且在 DNA 重組與表達(dá)蓄髓、基因結(jié)構(gòu)分析和功能檢測中具有重要的應(yīng)用價(jià)值叉庐。
PCR 可以被認(rèn)為是與發(fā)生在細(xì)胞內(nèi)的 DNA 復(fù)制過程相似的技術(shù),其結(jié)果都是以原來的 DNA 為模板產(chǎn)生新的互補(bǔ) DNA 片段会喝。細(xì)胞中 DNA 的復(fù)制是一個(gè)非常復(fù)雜的過程陡叠。參與復(fù)制的有多種因素。PCR 是在試管中進(jìn)行的 DNA 復(fù)制反應(yīng)肢执,基本原理與細(xì)胞內(nèi) DNA 復(fù)制相似枉阵,但反應(yīng)體系相對較簡單。
PCR 由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:
① 模板 DNA 的變性:模板 DNA 經(jīng)加熱至 94℃ 左右一定時(shí)間后预茄,使模板 DNA 雙鏈或經(jīng) PCR 擴(kuò)增形成的雙鏈 DNA 解離兴溜,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合耻陕,為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備拙徽;
② 模板 DNA 與引物的退火 (復(fù)性):模板 DNA 經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至 55℃ 左右诗宣,引物與模板 DNA 單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合膘怕;
③ 引物的延伸:DNA 模板--引物結(jié)合物在 Taq 酶的作用下,以 dNTP 為反應(yīng)原料梧田,靶序列為模板淳蔼,按堿基配對與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板 DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈裁眯。
重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程鹉梨,就可獲得更多的「半保留復(fù)制鏈」,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板穿稳。每完成一個(gè)循環(huán)需 2~4 分鐘存皂, 2~3 小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。
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